生脈拆方系列注射液的制備及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

1、生脈拆方系列注射液的制備及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究    【摘要】  目的 對生脈注射液不同拆方配伍制備的注射液進(jìn)行制備工藝及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究,為生脈注射液在體藥物配伍關(guān)系研究提供物質(zhì)基礎(chǔ)及質(zhì)量保證。方法 參照生脈注射液制備方法,規(guī)范了7種注射液的制備工藝,并采用HPLC及TLC法分別對系列注射液人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1、五味子醇甲及麥冬藥材進(jìn)行定量或定性分析。結(jié)果 人參皂苷Rg1、人參皂苷Re在0.942 49.424 g與0.6246.24 g范圍內(nèi),進(jìn)樣量與峰面積呈良好的線性關(guān)系(r10.999 5、r20.999 7),平均回收率為

2、97.0%100.4%,RSD為0.45%3.44%。TLC檢出人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1、五味子醇甲成分及麥冬對照藥材主斑點。結(jié)論 本試驗確定的制備工藝穩(wěn)定,質(zhì)量控制方法便捷,結(jié)果準(zhǔn)確可靠、重現(xiàn)性好,可為生脈注射液在體藥物配伍關(guān)系研究提供試驗基礎(chǔ)與保證。 【關(guān)鍵詞】  生脈注射液；人參皂苷Rg1；人參皂苷Re；人參皂苷Rb1；五味子醇甲；高效液相色譜法；薄層色譜法     Abstract：Objective To study the preparation and quality standard of seri

3、es of Shengmai Injection, and supply substantial basis and quality assurance for compatibility relation research on traditional Chinese medicine in vivo. Methods According to the preparing process of Shengmai Injection, preparing processes for 7 dismantlement injections were established. HPLC and TL

4、C methods were used for qualitative analysis and quantitation determination of Ginsenoside Rg1, Ginsenoside Re, Ginsenoside Rb1, Schisandrin and Radix Ophiopgonis. Results The linear ranges of Ginsenoside Rg1 and Ginsenoside Re were 0.942 49.424 g (r0.999 5) and 0.6246.24 g (r0.999 7). The average r

5、ecovery was 97.0%100.4%, and RSD was 0.45%3.44%. The main spots of Ginsenoside Rg1, Ginsenoside Re, Ginsenoside Rb1, Schisandrin and Radix Ophiopgonis were identified by TLC method. Conclusion The preparation processes are stable. The method of quality control was showed rapid, reliable and well rep

6、roducible. It set a good basis for the compatibility study on Shengmai Injection in vivo.    Key words：Shengmai Injection；Ginsenoside Rg1；Ginsenoside Re；Ginsenoside Rb1；Schisandrin；HPLC；TLC     探討中藥復(fù)方發(fā)揮整體效應(yīng)的物質(zhì)基礎(chǔ)及藥味配伍關(guān)系是現(xiàn)代中藥學(xué)研究的熱點。為了開展此方面的研究工作,本試驗選定生脈注射液為示范性研究制劑。在統(tǒng)一

7、藥材批次、固定處方比例、規(guī)范制備條件的前提下,參照衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)(中藥成方制劑)“生脈注射液”項下制備方法1,分別制備7種注射液,并制定其質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn),為方中紅參、麥冬、五味子3味中藥群體組分在體研究的均一性和可比性提供基本保障,同時為方中藥味在體生脈注射液指紋譜的識別與歸屬、色譜峰的消長變化與藥物配伍關(guān)系的評定提供良好的物質(zhì)基礎(chǔ)和技術(shù)保證。 1  儀器與試藥     Waters高效液相色譜儀(美國),LC-10UV檢測器,JS-3030型色譜工作站。人參皂苷Rg1(批號110703-200424)、人參皂苷Re(批號110754-

8、200421)、人參皂苷Rb1(批號110704- 200420)、五味子醇甲(批號110857-200507)、麥冬對照藥材(批號121013-200607),均由中國藥品生物制品檢定所提供；生脈系列注射液由遼寧省中醫(yī)藥研究院藥學(xué)研究室制備。乙腈為色譜純,水為重蒸餾水,磷酸及其他試劑均為分析純。 2  生脈系列注射液的制備 2.1  紅參注射液     取紅參100 g,粉碎成細(xì)粒,用乙醇回流提取5次,每次2 h,合并提取液,冷藏,濾過,濾液濃縮至稠膏狀。加入注射用水至400 mL,攪勻,冷藏,濾過,濾液加注射用

9、水至1 000 mL,調(diào)節(jié)藥液pH值至7.5,濾過,灌封,滅菌,即得。 2.2  麥冬注射液     取麥冬312 g,加水煎煮3次,每次40 min。合并煎液,濾過,濾液濃縮至稠膏狀,加入乙醇進(jìn)行2次醇沉,第1次使含醇量達(dá)80%,第2次使含醇量達(dá)85%。濾過,合并濾液,回收乙醇并濃縮至稠膏狀。加入注射用水約200 mL,攪勻,冷藏,濾過,濾液加適量活性碳煮沸30 min,稍冷,過濾至澄明,加注射用水至1 000 mL,調(diào)節(jié)藥液pH值至7.5,濾過,灌封,滅菌,即得。 2.3  五味子注射液  

10、   取五味子156 g,水蒸氣蒸餾法收集餾液150 mL,冷藏,供配液用。藥渣加水煎煮3次,每次40 min。合并煎液,濾過,濾液濃縮至稠膏狀,加入乙醇進(jìn)行兩次醇沉,第1次使含醇量達(dá)80%,第2次使含醇量達(dá)85%。濾過,合并濾液,回收乙醇并濃縮至稠膏狀。加入注射用水至200 mL,攪勻,冷藏,濾過,濾液加適量活性碳煮沸30 min,稍冷,過濾至澄明,濾液加入蒸餾液及注射用水至1 000 mL,調(diào)節(jié)藥液pH值至7.5,濾過,灌封,滅菌,即得。 2.4  參味注射液     取紅參100 g、五味子156 g,分別按

11、照“2.1”、“2.3”項下方法制備至“加注射用水至1 000 mL”前。合并上述紅參水液、五味子蒸餾液、五味子水液,混合均勻,濾過,濾液加注射用水至1 000 mL,調(diào)節(jié)藥液pH值至7.5,濾過,灌封,滅菌,即得。 2.5  參麥注射液     取紅參100 g、麥冬312 g,分別按照“2.1”、“2.2”項下方法制備至“加注射用水至1 000 mL”前。合并上述紅參水液、麥冬水液,混合均勻,濾過,濾液加注射用水至1 000 mL,調(diào)節(jié)藥液pH值至7.5,濾過,灌封,滅菌,即得。 2.6  麥味注射液 

12、;   取麥冬312 g、五味子156 g,分別按照“2.2”、“2.3”項下方法制備至“加注射用水至1 000mL”前。合并上述麥冬水液、五味子蒸餾液、五味子水液,混合均勻,濾過,濾液加注射用水至1 000mL,調(diào)節(jié)藥液pH值至7.5,濾過,灌封,滅菌,即得。 2.7  生脈注射液     取紅參100 g、麥冬312 g、五味子156 g,將紅參粉碎成細(xì)粒,用乙醇回流提取5次,每次 h,合并提取液,冷藏,濾過,濾液濃縮至稠膏狀,加入注射用水至400 mL,攪勻,冷藏,濾過,濾液供配液用；五味子用水蒸氣蒸餾法收集

13、餾液150 mL,冷藏,供配液用,藥渣加水煎煮3次,每次40 min,合并煎液,濾過,濾液濃縮至稠膏狀,加入乙醇進(jìn)行2次醇沉,第1次使含醇量達(dá)80%,第2次使含醇量達(dá)85%,濾過,合并濾液,回收乙醇并濃縮至稠膏狀,加入注射用水至200 mL,攪勻,冷藏,濾過,濾液加適量活性碳煮沸30 min,稍冷,過濾至澄明,供配液用。麥冬照五味子水液制備方法制成澄明的麥冬水溶液約200 mL,供配液用。將上述紅參水液、五味子蒸餾液、五味子水液和麥冬水液混合均勻,濾過,濾液加注射用水至1 000 mL,調(diào)節(jié)藥液pH值至7.5,濾過,灌封,滅菌,即得。 3  生脈系列注射液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

14、60;3.1  定性鑒別  分別取生脈注射液、參麥注射液、參味注射液、紅參注射液5 mL,水浴蒸干,殘渣加甲醇1 mL使溶解,作為供試品溶液。另取人參皂苷Rb1、Re、Rg1對照品,加乙醇制成每1 mL各含2 mg的混合溶液,作為對照品溶液。照2005年版中華人民共和國藥典附錄B試驗,精密吸取上述5種溶液各24 L,分別點于同一硅膠薄層板上,以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水(15402210)10 以下放置的下層溶液為展開劑,展開,取出,晾干,噴以10%硫酸乙醇溶液,在105 烘數(shù)分鐘,置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中,在與對照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相

15、同顏色的熒光斑點。  分別取生脈注射液、參麥注射液、麥味注射液、麥冬注射液40 mL,加鹽酸3 mL,置水浴中加熱1 h,放冷,加乙醚振搖提取2次,每次30 mL,合并醚液,蒸干,殘渣加三氯甲烷1 mL使溶解,作為供試品溶液。另取麥冬對照藥材2 g,加水煎煮30 min,濾過,濾液濃縮至約40 mL,同法制成對照藥材溶液。照2005年版中華人民共和國藥典附錄B試驗,吸取上述5種溶液各510 L,分別點于同一硅膠薄層板上,以三氯甲烷-丙酮(41)為展開劑,展開,取出,晾干,噴以10%硫酸乙醇溶液,在105 烘約5 min。供試品色譜中,在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色

16、的主斑點。  分別取生脈注射液、參味注射液、麥味注射液、五味子注射液50 mL,水浴濃縮至約25 mL,移至分液漏斗中,加三氯甲烷振搖提取3次,每次10 mL,濾過,合并濾液,水浴蒸至近干,殘渣加甲醇1 mL使溶解,作為供試品溶液。另取五味子醇甲對照品,加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液,作為對照品溶液。照2005年版中華人民共和國藥典附錄B試驗,吸取上述供試品溶液45 L、對照品溶液12 L,分別點于同一硅膠GF254薄層板上,以石油醚(3060 )-甲酸乙酯-甲酸(1451)的上層溶液為展開劑,展開,取出,晾干,置紫外光燈(254 nm)下檢視。供試品色譜中,在與對照品色譜

17、相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點。 3.2  含量測定  色譜柱：XB-C18(4.6 mm×250 mm,5 m)；柱溫：常溫；流動相：乙腈-0.05%磷酸水溶液(1981)；流速：1.0 mL/min；檢測波長：203 nm；理論塔板數(shù)按人參皂苷Rg1色譜峰計應(yīng)不低于5 000。  精密稱取在五氧化二磷干燥器中干燥至恒重的人參皂苷Rg1 23.52 mg和人參皂苷Re 15.60 mg,置25 mL量瓶中,加乙腈-水(1981)至刻度,搖勻,精密量取5 mL置10 mL量瓶中,加乙腈-水(1981)稀釋至刻度,搖勻,即得(

18、每1 mL含人參皂苷Rg1 0.471 2 mg、人參皂苷Re 0.312 mg)。  分別精密量取生脈注射液、參麥注射液、參味注射液、紅參注射液各25 mL,水浴蒸干,殘渣加流動相溶解,并定量轉(zhuǎn)移至5 mL量瓶中,稀釋至刻度,搖勻,作為供試品溶液。  精密吸取混合對照品溶液2.0、4.0、8.0、16.0、20.0 L,注入高效液相色譜儀。以進(jìn)樣量為縱坐標(biāo),峰面積為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得回歸方程：YRg11.422×10-6XRg10.091 2(r0.999 5)；YRe1.676×10-6XRe0.036(r0.999 7)。

19、結(jié)果表明：人參皂苷Rg1與人參皂苷Re進(jìn)樣量分別在0.942 49.424 g、0.6246.24 g范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。  精密吸取同一樣品供試品溶液20 L,連續(xù)進(jìn)樣6次,測定人參皂苷Rg1與人參皂苷Re峰面積。結(jié)果4種樣品2種成分峰面積精密度RSD在1.32%1.58%范圍內(nèi),說明精密度良好。  取每種注射液同一樣品供試液,分別于0、2、4、6、8 h檢測。結(jié)果人參皂苷Rg1與人參皂苷Re測定在8 h內(nèi)穩(wěn)定,RSD在1.29%1.83%范圍內(nèi)。  取每種注射液同一批樣品,精密吸取6份,平行制備供試品溶液并進(jìn)樣測定。結(jié)果RSD在1.79%2.95%范圍內(nèi)。  采用加樣回收法。精密稱定4種注射液已知含量的同一批樣品9份,每份12.5 mL,每3份1組,分別按樣品含量80%、100%、120%加入對照品溶液(人參皂苷Rg1 0.471 2 mg/mL；人參皂苷Re 0.312 mg/mL),制備供試品溶液,測定,結(jié)果平均回收率在97.0%100.4%,RSD在0.45%3.44%范圍內(nèi)。結(jié)果見表1。表1  加樣回收率試驗結(jié)果（略）  精密吸取對照品溶液10 L、各供試品溶液20 L,分別注入液相色譜儀,測定,