土壤淤泥中的宏基因組提取

1、土壤、淤泥中的宏基因組提取(磁珠法)貨號：KTSM2636 產(chǎn)品簡介：本試劑盒適用于從土壤、淤泥、糞便中提取基因組 DNA,采用具有獨特別離作用的磁珠和獨特的緩沖液系統(tǒng),可以將樣本中雜質(zhì)盡可能的去除,配有的研磨珠和高效的裂解液保證從土壤中提取基因組DNA的完整性.使用本試劑盒回收的 DNA雜質(zhì)少,完整性好,可直接用于 PCR、酶切等分子生物學(xué)下游實驗. 產(chǎn)品內(nèi)容：產(chǎn)品組成KTSM2636 (50 次)緩沖液 DA (Buffer DA )50 ml裂解液 DLA (Buffer DLA )25 ml溶菌酶2支Proteinase K1支裂解液 DLB (Buffer DLB )10 ml結(jié)合液

2、 DB (Buffer DB )12.5 ml磁珠懸浮液1 ml漂洗液 DW1 (Buffer DW1 )50 ml漂洗液 DW2 (Buffer DW2 )35 ml洗脫緩沖液 TE (Buffer TE )5 ml研磨珠12.5g 儲存條件：該試劑盒置于室溫(15-25 C)枯燥條件下,可保存 12個月,更長時間的保存可置于2-8 C.2-8 C保存條件下,假設(shè)溶液產(chǎn)生沉淀,使用前應(yīng)將試劑盒內(nèi)的溶液在室溫放置一段時間,必要時可在37 c水浴中孵育10 min ,以溶解沉淀. 產(chǎn)品特點：(1)適用范圍廣：適用于花壇土、花盆土、農(nóng)田土、山林土、海水淤泥、湖邊淤泥、紅土、黑土等多類土壤環(huán)境樣本的

3、提取,同樣適用于糞便樣本的提取.(2)簡便快捷：能夠集中在相對較短時間內(nèi)完成實驗操作.(3)高純度：與磁珠法純化相結(jié)合,提取的DNA純度高,可直接用于下游實驗.(4)完整性好：可同時提取革蘭氏陰性菌和革蘭氏陽性菌.本卷須知(請務(wù)必在使用本試劑盒之前閱讀此本卷須知)：(1)自備試劑：異丙醇,乙醇.(2)假設(shè)裂解液中有沉淀,可在 37c水浴中重新溶解,搖勻后使用(3)假設(shè)對RNA較為敏感,可參加 RNase A處理.操作步驟:使用前請先在結(jié)合液中參加異丙醇,漂洗液中參加無水乙醇,參加體積請參照瓶子上的標簽.(1)取0.3-0.5 g 土壤或糞便至2 ml離心管中,參加0.25g研磨珠和1 ml緩沖

4、液DA,渦旋振蕩1-3 min(2) 12000 rpm 離心 2 min ,棄上清.(3)參加500 M裂解液DLA , 50 N溶菌酶,振蕩10 min , 95c溫育10 min.(4) 12000 rpm 離心 2 min ,取上清.(5)參加20川蛋白酶K和200回裂解液DLB, 70 C溫育10 min.(6)參加兩倍體積的結(jié)合液DB (使用前參加異丙醇)振蕩混勻10 sec.(7)參加20川磁珠懸浮液,振蕩混勻10 min.注意：為了保證磁珠徹底重懸,請在使用前振蕩混勻(8)將離心管置于磁力架上,靜置 2 min,磁珠完全吸附后,吸去液體,小心勿碰到磁珠.(9)將離心管從磁力架取

5、下,參加 500川漂洗液DW1 (使用前請先檢查是否已參加無水乙醇),振蕩混勻1 min 0(10)將離心管置于磁力架上,靜置 30 sec ,磁珠完全吸附后,吸去液體,小心勿碰到磁珠.(11)重復(fù)步驟8-9 一次.(12)將離心管從磁力架取下,參加 700 M漂洗液DW2 (使用前請先檢查是否已參加無水乙醇),振蕩混勻1 min(13)將離心管置于磁力架上,靜置 30 sec ,磁珠完全吸附后,吸去液體,小心勿碰到磁珠.注意：如果對于 DNA純度要求更高,可以重復(fù)步驟 9和10一次.(14)將離心管置于磁力架上,室溫晾干10-15 min或通風(fēng)櫥枯燥3 min.注意：乙醇殘留會抑制后續(xù)的酶反響,所以晾干時要保證乙醇揮發(fā)干凈.但也不要枯燥太長時間,以免難以洗脫DNA(15)將離心管從磁力架取下,參加 50-100回洗脫緩沖液TE,振蕩混勻,磁珠應(yīng)完全浸沒于緩沖液中,置于 56 C,孵育(5) min