初始污染菌方法驗(yàn)證

1、1. 目的驗(yàn)證產(chǎn)品初始污染菌數(shù)的試驗(yàn)方法.2. 范圍適用于質(zhì)量部門對產(chǎn)品初始污染菌數(shù)驗(yàn)證試驗(yàn)的檢測.3. 責(zé)任質(zhì)量檢驗(yàn)人員負(fù)責(zé)執(zhí)行此規(guī)程.4. 依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)及相關(guān)文件2021版?中華人民共和國藥典第二部?附錄XIJ微生物限度檢查法GB/T19973.1-2005?醫(yī)療器械的滅菌-微生物學(xué)方法-第一局部 產(chǎn)品中微生物數(shù)量的估計(jì)?GB15980-2021?一次性使用醫(yī)療用品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)?5. 試驗(yàn)產(chǎn)品6. 本卷須知6.1本操作應(yīng)在環(huán)境潔凈度 10000級下的局部潔凈度100級的無菌操作臺內(nèi)進(jìn)行.操作過程應(yīng)盡量預(yù)防任何可能使結(jié)果發(fā)生偏差的污染.6.215min前方可進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作.6.3膜在過濾前后的完整性.

2、7. 器材與試劑7.1器材35 C恒溫培養(yǎng)箱、23 C恒溫培養(yǎng)箱、滅菌器、潔凈工作臺、無菌過濾裝置、鑲子、剪子、電子天平、移液器、 接種環(huán)7.2稀釋液、沖洗液及其制備方法稀釋液、沖洗液配制后按說明書要求進(jìn)行滅菌.pH 7.0無菌氯化鈉溶液一蛋白月東緩沖液0.9%無菌氯化鈉溶液.7.3培養(yǎng)基營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基：按說明書方法保存配制.玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基：按說明書方法保存配制.改良馬丁液體培養(yǎng)基：按說明書方法保存配制.改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基：按說明書方法保存配制.營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基：按說明書方法保存配制.8. 計(jì)數(shù)方法的驗(yàn)證試驗(yàn)當(dāng)建立產(chǎn)品初始污染菌數(shù)檢查法時,應(yīng)進(jìn)行細(xì)菌、霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)方法的驗(yàn)證：以確認(rèn)所采用

3、的方法適合于該產(chǎn)品細(xì)菌、霉菌及酵母菌的測定.假設(shè)產(chǎn)品的組分或原檢驗(yàn)條件發(fā)生改變可能影響檢驗(yàn)結(jié)果時,計(jì)數(shù)方法應(yīng)重新驗(yàn)證.驗(yàn)證時,按供試液的制備和細(xì)菌、霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)所規(guī)定的方法及以下要求進(jìn)行.對各試驗(yàn)菌的回收率應(yīng)逐一進(jìn)行驗(yàn)證.8.1菌種培養(yǎng)基靈敏度檢查所用的菌株傳代次數(shù)不得超過5代,從菌種保藏中央獲得的冷凍枯燥菌種為0代,并采用適宜的菌種保藏技術(shù),以保證試驗(yàn)菌株的生物學(xué) 特性.金黃色葡萄球菌 大腸埃希菌 枯草芽孑包桿菌 白色念珠菌CMCC B 26 003CMCCB 11 102CMCCB 63 501CMCCF 98 001CMCC F 98 003Candida albicansStaph

4、ylococcus aureus Escherichia coli Bacillus subtilis黑曲霉 Aspergillus niger8.2菌液制備接種金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草芽弛桿菌的新鮮培養(yǎng)物至營養(yǎng)肉湯培養(yǎng) 基中或營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上,30-35 C培養(yǎng)18-24小時,接種白色念珠菌的新 鮮培養(yǎng)物至改良馬丁培養(yǎng)基中或改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基上23-28 C培養(yǎng)24-48小時.上述培養(yǎng)物用 0.9%無菌氯化鈉溶液制成每1ml含菌數(shù)為50-100cfu 的菌懸液.接種黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物至改良馬丁瓊脂斜面培養(yǎng)基上23-28 C培養(yǎng)5-7天,參加3-5ml含0.05% (mol/ml )聚

5、山梨酯80的0.9%無菌氯 化鈉溶液,0.05% (mol/ml )聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉溶液制成每 1ml含菌數(shù)為 50-100cfu的弛子懸液.注：菌液制備后假設(shè)在室溫下放置,應(yīng)在 2小時內(nèi)使用,假設(shè)保存在 2-8 C,可在 24小時內(nèi)使用.黑曲霉孑包子懸液可保存在2-88.3供試液的制備在潔凈工作臺內(nèi),將樣品分別放入配制好的pH7.0無菌氯化鈉溶液一蛋白月東緩沖液中,充分震蕩,作為試驗(yàn)液.8.4培養(yǎng)條件 細(xì)菌30-35 C培養(yǎng)3天； 霉菌及酵母菌23-28 C培養(yǎng)5天； 8.5驗(yàn)證方法8.5.1驗(yàn)證試驗(yàn)至少應(yīng)進(jìn)行3次獨(dú)立的平行試驗(yàn),并分別計(jì)算各試驗(yàn)菌每次試驗(yàn) 的回收率試驗(yàn)組菌回

6、收率=(A-C) /B 稀釋劑對照組菌回收率=D/B 8.5.2薄膜過濾法依據(jù)ISO11737-1所述,膜過濾法尤其適用于微生物濃度較低的懸液.因此 本驗(yàn)證首選薄膜過濾法.A. 試驗(yàn)組100ml樣品供試液100ml稀釋的菌懸液,包括：1ml含50-100cfu的菌懸液和99mlPH7.0 無菌氯化鈉一蛋白月東緩沖液；B. 菌液組100ml稀釋的菌懸液,包括：1ml含50-100cfu的菌懸液和99mlPH7.0無菌氯化鈉一蛋白月東緩沖液;C. 供試品對照組100ml樣品供試液沖洗液:100ml無菌氯化鈉一蛋白月東緩沖液PH7.0D. 稀釋劑對照組100ml無菌氯化鈉一蛋白月東緩沖液PH7.0100ml稀釋的菌懸液,包括:1ml含50-100cfu的菌懸液和99mlPH7.0無菌氯化鈉一蛋白月東緩沖液；8.5.3結(jié)果判定在3次獨(dú)立的平行試驗(yàn)中,稀釋劑對照組的菌數(shù)回收率應(yīng)均不低于70%假設(shè)試驗(yàn)組的菌數(shù)回收率均不低于 70%照該供試液制備方法和計(jì)數(shù)法測定供試品的70%應(yīng)采用其它適宜方法,并重新進(jìn)行驗(yàn)證.