考馬斯亮藍法測定果汁中蛋白質(zhì)的含量

1、 食品與發(fā)酵工業(yè) 160 考馬斯亮藍法測定果汁中蛋白質(zhì)的含量 3黃婉玉 , 曹煒 , 李菁 , 朱青 , 常丹(西北大學(xué)化工學(xué)院食品科學(xué)與工程系 , 陜西 西安 , 710069摘 要 采用考馬斯亮藍法 , 對不同果汁中的蛋白質(zhì)含量進行了測定 。 結(jié)果表明 :蛋白質(zhì)濃度在 10-80g/mL 內(nèi)與吸光度有良好的線性關(guān)系 (R 2=0. 9964 ; 樣品平均回收率 (n =3 分別為 9912%、 9818%、 10118%,RSD 分 別為 0164%、 0181%和 0158%(n =3 。 該方法具有快速 、 靈敏度高 、 重現(xiàn)性好等特點 。 關(guān)鍵詞 果汁 , 蛋白質(zhì) , 考馬斯亮藍 ,

2、 含量 , 測定第一作者 :碩士研究生 (曹煒副教授為通訊作者 。 3陜西省農(nóng)業(yè)科技攻關(guān)計劃 (2006K02-G4收稿日期 :2008-12-02, 改回日期 :2009-04-02 在濃縮果汁和果汁飲料生產(chǎn)中 , 后混濁一直是影 響產(chǎn)品質(zhì)量的關(guān)鍵因素之一 , 它不僅可以破壞產(chǎn)品的 感官質(zhì)量 , 甚至可以導(dǎo)致果汁發(fā)生沉淀 。 形成果汁后 混濁的因素很多 , 其中 , 酚類氧化聚合成大分子物質(zhì) 或酚類與蛋白質(zhì)形成的聚合物是導(dǎo)致果汁后混濁的 主要因素 1。 Beveridage 等人在研究蘋果汁混濁成 分時 , 發(fā)現(xiàn)果汁中蛋白質(zhì)的含量與混濁的形成密切相 關(guān)2,3。 因此 , 測定果汁中的蛋白質(zhì)含

3、量對控制果汁后混濁尤為重要 。氏定氮法 、 福林 24白質(zhì)時 , 有一定的誤差 ; 福林 2酚比色法是靈敏度較高 的方法之一 , 但是 , 由于果汁中酚類及檸檬酸的干擾 , 導(dǎo)致測定結(jié)果偏高 ; 凱氏定氮法是測定粗蛋白質(zhì)的經(jīng) 典方法 , 但由于樣品中非蛋白質(zhì)含氮化合物的干擾 , 使得測定結(jié)果不能完全反映被測樣品中真實蛋白質(zhì) 的含量 ; 考馬斯亮藍比色法是由 Bradford 等人建立 的 1種測定微量蛋白質(zhì)的方法 5, 考馬斯亮藍所含疏 水基團在酸性條件下與蛋白質(zhì)的疏水微區(qū)具有親和 力 , 通過疏水作用與蛋白質(zhì)相結(jié)合 , 形成的藍色蛋白 質(zhì) 2染料復(fù)合物 , 在 595nm 處有最大吸光度 ,

4、 復(fù)合物 1h 內(nèi)保持穩(wěn)定 。在一定的蛋白質(zhì)濃度范圍內(nèi) , 蛋白質(zhì) 2染料復(fù)合物在 595nm 處的吸光度與蛋白質(zhì)含量 成正比 , 因此可用于蛋白質(zhì)含量的測定 。 該方法不受 酚類化合物和游離氨基酸的干擾 617, 具有快速 , 穩(wěn) 定 , 靈敏度高 , 測量結(jié)果準確等特點 。本文采用考馬斯亮藍比色法測定了不同果汁中 蛋白質(zhì)的含量 , 并對該方法的線性關(guān)系 、 回收率 、 精密度 、 穩(wěn)定性等進行了考察 , 旨為建立 1種測定果汁蛋白質(zhì)的新方法 , 以便優(yōu)化果汁加工工藝 , 提高果汁 的品質(zhì) 。1 材料與方法111 實驗材料紅棗汁按照文獻 8:選取完整無霉爛的 , , 4倍的純凈水 , 6L

5、果膠酶 ,50 下酶 r/min 條件下離心 10min , 上清液 中加入 011g/L 的殼聚糖進行澄清 ,8000r/min 離 心 10min , 將離心后的紅棗汁經(jīng)超濾得到紅棗澄清 汁 , 澄清后的紅棗汁置于 -18 冰箱中冷凍待用 ; 蘋 果汁 , 鮮橙汁 , 葡萄汁 , 水蜜桃汁等均為市購 ; 考馬斯 亮藍 G 2250(分析純 購自中國醫(yī)藥公司 , 小牛血清白 蛋白 (生化試劑 購自西安沃爾森生物技術(shù)有限公司 , 其余試劑均為分析純 。 112 實驗儀器751-GD 型紫外可見光分光光度計 (上海分析儀器廠 ;L N G 2TM 2018超濾試驗機 (上海朗極化工 科技有限公司

6、 ; H H 22數(shù)顯恒溫水浴鍋 (國華電器有 限公司 ; 打漿機 (美國 ACA 公司 ;BS 200S 2WE1電 子分析天平 (北京賽多利斯天平有限公司 ;L X J 2 B 型高速離心機 (上海安亭科學(xué)儀器廠 。 113 溶液的配制小牛血清白蛋白標準溶液的配制 :準確稱取牛血 清白蛋白 1014mg , 用蒸餾水定溶至 100mL , 配成 104g /mL 的標準溶液 , 置于 4 冰箱中備用 。 考馬斯亮藍 G 2250溶液的配制 :準確稱取考馬 斯亮藍 G 225060mg , 溶于 100mL 30g/L 的過氯酸 溶液中 , 用濾紙過濾 , 將濾液置于棕色試劑瓶中備用 。 1

7、14 果汁中蛋白質(zhì)含量的測定方法4準確移取一定量經(jīng)活性炭脫色后的果汁置于試分析與檢測161 管中 , 加入 210mL 考馬斯亮藍 G -250溶液 , 用蒸餾 水定容至 410mL , 搖勻 , 在室溫下反應(yīng) 10min , 以空 白 (不加果汁 溶液作參比溶液 , 用 7512GD 型分光光 度計于 595nm 波長處測定樣品組的吸光度 ,2 結(jié)果與分析211 標準曲線的繪制在試管中分別精確移取牛血清白蛋白標準溶液 010、 012、 014、 016、 018、 110、 112、 114mL , 加蒸餾水至 2mL , 配制成濃度為 010、 1014、 2018、 3112、 411

8、6、 5012、 6214、 7218g /mL 的蛋白質(zhì)標準溶液 , 然后在 各支試管中分別加入 210mL 考馬斯亮藍 G 2250溶 液 , 搖勻 , 在 595nm 波長處測定吸光度 , 以牛血清白 蛋白標準溶液濃度為橫坐標 , 以吸光度為縱坐標 , 繪 制標準曲線 ?；貧w方程為 Y =010083X +011449(R 2=019964 , 小牛血清白蛋白濃度 10-80g/mL 內(nèi)與其吸光度呈良好的線性關(guān)系 。 212 精密度實驗 精密移取牛血清白蛋白標準溶液 6份 , 按照 11方法測定蛋白質(zhì)的含量 , RSD 為 0186%。 213穩(wěn)定性試驗在同一果汁中加入 210mL 考馬

9、斯亮藍 G 2250溶液 , 搖勻 , 在 8h 內(nèi) , 每隔 1h 測定 1次蛋白質(zhì)含量 , 計算其 RSD 值 。 由實驗結(jié)果可知 , 同一果汁蛋白質(zhì) 含量的 RSD 為 117%, 表明 8h 內(nèi)溶液穩(wěn)定性良好 。 214 重復(fù)性實驗取一定量果汁 6份按 114實驗方法進行檢測 , 計 算其蛋白質(zhì)含量的 RSD 值 。 結(jié)果表明蛋白質(zhì)含量的 RSD 值為 0196%, 表明其重復(fù)性好 。 215 加樣回收率實驗 在 1mL 紅棗汁中分別準確加入牛血清白蛋白 標準溶液 012mL 、 013mL 和 014mL 、 用蒸餾水補足 至 210mL , 再加入 210mL 考馬斯亮藍 G 22

10、50溶液 , 搖勻 , 測定蛋白質(zhì)含量 , 并計算回收率 。 結(jié)果見表 1。表 1 回收率結(jié)果本底量/g加標量/g測定的總量/g回收率/%RSD /%561256125612 結(jié)果表明 , 回收率為 9818%-10118%, 平均加 樣回收率為 99197%, RSD 值為 0158%-0181%, 平均 RSD 為 0168%, 準確度較高 , 符合測定要求 。 216 不同果汁中蛋白質(zhì)含量的測定 按 114的方法測定不同果汁中的蛋白質(zhì)含量 , 每 種樣品取 3份 ,3次測定的平均值作為該種果汁蛋白 質(zhì)含量的實測值 , 結(jié)果見表 2。表 2 不同果汁蛋白質(zhì)含量 (n =3樣品蛋白質(zhì)含 /g

11、 mL -1RSD /%紅棗汁 56120156蘋果汁 12120124鮮橙汁 82120181葡萄汁 62170119水蜜桃汁11180169 從表 2中可知 , 不同種類果汁中蛋白質(zhì)含量各不 相同 , 鮮橙汁中的蛋白質(zhì)含量最高為 8212g/mL , 葡 萄汁次之為 6217g/mL , 紅棗汁為 5612g/mL , 水 蜜桃汁中的蛋白質(zhì)含量最低 , 僅為 1118g/mL , 由此 可見 , 。 217, 按照 211的方法分別測定 2蛋白質(zhì)復(fù)合物的吸光度 , 結(jié)果見表 3。表 3 沒食子酸和甘氨酸對考馬斯亮藍比色法測定蛋白質(zhì)含量的干擾干擾物 濃度 /g m L -1吸光度 (A 沒食

12、子酸0135101356對照組0135601356 由表 3可知 , 不同濃度的沒食子酸和甘氨酸對考 馬斯亮藍 2小牛血清白蛋白復(fù)合物的吸光度沒有明顯 干擾 。3 結(jié)論采用考馬斯亮藍比色法測定果汁中的蛋白質(zhì)含 量時 , 用小牛血清白蛋白作為對照品 , 其濃度在一定 范圍內(nèi)與吸光度有良好的線性關(guān)系 , 樣品平均回收率 (n =3 分別為 9912%、 9818%、 10118%,RSD 分別為 0164%、 0181%和 0158%, 該法具有精密度高 、 穩(wěn)定性和重現(xiàn)性好 , 不受酚類和游離氨基酸的影響 , 對設(shè) 備要求較低 , 適合大量果汁樣品的測定等優(yōu)點 。本 文僅對果汁中蛋白質(zhì)含量進行了

13、測定 , 其中的蛋白質(zhì) 的種類和單體含量有待進一步深入研究 。 食品與發(fā)酵工業(yè) 162 參考文獻1 Beveridge T , Harrison J E , Weintraub SE 1Procyanidincontributions to haze formation in an aerobically pro 2duced apple juice haze J 1Lebensmittel Wissenschaft and Technologic , 1997, 30:594-601.2 Siebert K J , Carrasco A 1Formation of protein 2poly

14、phe 2nol hazes in beverages J1Journal of Agricultural and Food Chemistry , 1996, 44:1997-2005.3 Siebert K J 1Protein 2polyphenol haze in beverages J1Food Technology , 1999, 53(1 :54-57.4 寧正祥 1食品成分分析手冊 M 1北京 :中國輕工業(yè)出版社 , 1997172-81.5Bradford1A rapid and sensitive method for the quantita 2tion of micro

15、gram quantities of protein utilizing the prin 2ciple of protein 2dye binding J1Analytical Biochemis 2try ,1976, 72:248-254.6 王衛(wèi)國 , 吳強 , 胡保坤 , 等 1幾種測定灰樹花多糖中蛋白質(zhì)含量方法的比較研究 J1中國食用菌 , 2003, 22(1 :27-30.7 王愛軍 , 王鳳山 , 王友聯(lián) , 等 1低濃度蛋白質(zhì)含量測定方法的比較 J1中國生化藥物雜志 , 2003, 24(2 :78-80.8 張靜 , 曹煒 , 曹艷萍 , 等 1紅棗汁中維生素 C 熱降解

16、的動力學(xué)研究 J1農(nóng)業(yè)工程學(xué)報 , 2008, 6(6 :295-298.Determination of Protein Content in Juice by Coomassie Brilliant BlueHuang Wanyu , Cao Wei ,Li Jing ,Zhu Qiog , Dan(Department of Food Science and Engineering , College of Chemical Xi an 710069, China ABSTRACT The content of by t he dying met hod wit h coomassie

17、brilliant blue. The t linearity relation between t he absorbency and t he con 2tent of standard p t he of 10-80g/mL. The average recovery rate were 99. 2%, 98. 2%, 101. 8%, respectively , RSDs were 0. 64%, 0. 81%and 0. 58%respectively. A rapid , sensitive , and accurate met hod for t he determinatio

18、n of p rotein content in juice was found.K ey w ords juice , protein , coomassie brilliant blue , content , determination 市 場 動 態(tài)飲料機械將隨飲料市場火熱走俏市場我國目前生產(chǎn)果汁廠家大約有 6000家 , 具有一定規(guī)模的飲料企業(yè)有 1000多家 , 擁有職工 20萬余人 , 年銷售收入600多億元 , 年創(chuàng)利稅 60多億元 。 全國飲料總產(chǎn)量保持持續(xù)穩(wěn)定增長 ,1980年年產(chǎn)不足 30萬 t ,1990年猛增到 330萬 t , 到 2000年為 1490萬 t ,20年增長 50多倍 , 平均年增長速度為 21. 8%。 2001年達 1670萬 t , 比 2000年增長 11. 94%, 持續(xù)保持 2位數(shù)以上的增長速度 , 是食品工業(yè)中發(fā)展最快的行業(yè)之一 。 隨著飲料市場的發(fā)展 , 飲料設(shè)備的發(fā)展也進入了一個新發(fā)展空間 我國的飲料工業(yè)迅速的發(fā)展 , 產(chǎn)量迅猛增長 , 品種也迅速增多 , 為了滿足中小型企業(yè)和大型生產(chǎn)飲料企業(yè) , 飲料機械廠家針對不 同企業(yè) , 不斷創(chuàng)新 , 研究出適合飲料生產(chǎn)廠家的設(shè)備 。 飲料加工機械分前處理機械 、 后處理機械 、 包裝機械 、 裝箱碼垛機械等 , 主 要有 :清洗機械 、 分級 (篩選 機械 、 粉碎機械