_高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒分子流行病學(xué)調(diào)查_百度

1、 收稿日期 :2008-02-25 基 金 項 目 :國 家 “ 十 一 五 ” 科 技 支 撐 計 劃 資 助 項 目 (2007BAD86D03, 2006BAD06A01 作者簡介 :侯麗麗 (1981- , 女 , 碩士 。, E :263net高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒分子流行病學(xué)調(diào)查侯麗麗 1, 2, 趙鐵柱 2, 遇秀玲 2, 曹 振 2, 鄧小雨 2, 喬明明 2, 張 碩 2, 王 斌 2, 陳西釗 2, 田克恭 2* (1. 中國農(nóng)業(yè)大 學(xué) 動物醫(yī)學(xué)院 , 北京 100094; 2. 中國動物疫病 預(yù)防控制中心 , 北京 100094摘要 :2006年 6月份以來 ,

2、我國多個省份暴發(fā)高致病性豬繁殖與 呼吸綜合 征 , 給我 國養(yǎng)豬業(yè) 造成了 巨大經(jīng) 濟損失 。 為全面了解高致病性豬繁殖與呼吸綜合 征病毒 在我國 的流行 情況 以及 遺傳變 異規(guī) 律 , 本 研究 采用 RT -P CR 的 方 法 , 對從 2006年 8月至 2007年 10月期間 , 來自于 19省 (市 共 474份樣品進行高致病豬繁殖與 呼吸綜合征病毒核 酸的檢測 , 結(jié)果檢出陽性樣品 294份 。 在各省不同時期樣 品中均有 陽性樣 品檢出 。 通 過對陽 性樣品 進行 Nsp2基 因和 O RF 5基因擴增 , 序列分析發(fā)現(xiàn)所有檢測的豬繁殖與 呼吸綜合征病毒株高度同源 , 為同

3、一 毒株遺傳 變異而來 , 所有豬繁殖與呼吸綜合征毒株與 H B -1株遺傳關(guān)系最近 ; 且 N sp2均缺失 30個氨基酸 。 關(guān)鍵詞 :高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒 ; N sp2; O RF5中圖分類號 :S852. 65 文獻標(biāo)識碼 :A 文章編號 :1005-4545(2009 06-0677-06Molecular epidemiology of highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome virus in ChinaH OU Li -li 1, 2, ZH AO Tie -zhu 2, YU X

4、iu -ling 2, CAO Zhen 2, DENG Xiao -yu 2, QIAO Ming -ming 2,ZH ANG Shuo 2, WANG Bin 2, CH EN Xi -zhao 2, TIAN Ke -g ong 2*(1. College o f Veterinary Medicine , China Agricultural University , Beijing 100094, China ; 2. China Animal D isease Con -trol Center , Beij ing 100094, China A bstract :In the

5、summer of 2006, a lar ge -scale o utbreak of highly pa thog enic P RRS in China wa s repor ted . T o fully understand the know ledg e of highly pathog enic P RRSV epidemiolog y and the ex tent of genetic diver sity in Chi -na , w e ana ly sed 474samples obtained fro m 19pr ovinces using RT -P CR ass

6、ay . 294samples of them w ere po sitive . Subsequent sequencing of the P CR pro ducts fr om Nsp2and O RF5and phylog enetic analy sis revealed that all positiv e strains are hig hly ho mologo us to each o ther , may hav e evo lv ed fro m the same ancesto r . M o reove r , they we re mo st similar to

7、HB -1. A t the same time , we obse rved a unique mo lecular hallmark in these viral isolates , a disco ntinuous dele tion of 30amino acids in nonstructural pro tein 2(N sp2 . Key words :highly patho genic P RRSV ; N sp2; O RF5*Corresponding author , E -mail :tiank g 263. net 豬繁殖與呼吸綜合征是由豬繁殖與呼吸綜合征 病 毒

8、 (Porcine reproductive and respiratory sy n -drome virus , PRRSV 引起的以母豬發(fā)熱 、 流產(chǎn) , 斷 奶前 、 后的仔豬死亡率升高 , 不同年齡豬呼吸障礙等 為臨床特征 的疾病 1-4。 1991年 , 荷蘭學(xué)者 Wens -v oor t 等 2人在感染豬體內(nèi)分離到歐洲型 PRRSV ,命名為 Lely stad 病毒 (LV 5; 同年 , 美國學(xué)者 Ben -field 等 人 分 離 到 美 洲 型 PRRSV , 命 名 為 V R -23321, 6。 近年來 , 我國學(xué)者相繼 分離鑒定 了美洲型 PRRSV 的 CH

9、 -1a 、 S1、 H B -1和 H B -2等毒株 。PRRSV 為單股正鏈 RNA 病毒 , 包含 8個開放 閱讀框 (ORFs , 其中 ORF1編碼有關(guān) RNA 復(fù)制和 轉(zhuǎn)錄的蛋白 , Nsp2屬非結(jié)構(gòu)蛋白 , 位于 ORF1區(qū) , 可 能與 PRRSV 的 嗜 細(xì) 胞 性 和 嗜 組 織 性 有 關(guān) 7-9。 ORF5編碼的糖蛋白 GP5是主要的保護性抗原 , 可 以誘導(dǎo)細(xì)胞凋 亡和參與 PRRSV 粒子 與受體 的結(jié) 合 10-12; PRRSV 基因的易變性及分子進化機制 , 一 直倍受各國學(xué)者關(guān)注 3-4, 13。 PRRSV 的變異分布于 整個基因組 , 但以 N sp2

10、基因和 ORF5基因變異最 大 。 PRRSV 美國 分 離 株 MN 184和我 國 分 離 株 H B -2, 其 Nsp2均缺失數(shù)量不等的氨基酸 7, 10; 不同677 中 國 獸 醫(yī) 學(xué) 報 2009年 6月 第 29卷 第 6期 Chin J Vet Sci Jun . 2009 V ol . 29 N o . 6的 PRRSV 分離株 , 其 GP5氨基酸序列存在數(shù)量不 等的點突變 7, 14-16。 國內(nèi)外學(xué)者多以 ORF5基因繪 制 PRRSV 的系統(tǒng)發(fā)育樹 13, 17-18。2006年 6月份以來 , 我國多個省份的養(yǎng)豬場 、 戶暴發(fā)豬 “ 高熱病 ” 疫情 , 給我國的

11、養(yǎng)豬業(yè)造成了巨 大的經(jīng)濟損失 。 田克恭等 19研究發(fā)現(xiàn) , 豬 “ 高熱病 ” 的主要致病病原為 Nsp2缺失 30個氨基酸 的高致 病性 PRRSV 。 本研 究利 用特 異性 檢測 高 致病 性 PRRSV 的 RT -PCR 方法檢測我國不同地區(qū)發(fā)生高 致病性 PRRS 樣品 , 繪制高致病性 PRRSV 在我國 的流行區(qū)域 圖 ; 利用分子生物學(xué)技 術(shù)解析其 Nsp2基因 和 O RF5基 因 的 變 異 情 況 , 分 析 高 致 病 性 PRRSV 遺傳變異情況 , 為 PRRSV 的遺傳變異及蛋 白功能的研究提供數(shù)據(jù) , 并對疾病的防制提供分子 流行病學(xué)信息 。1 材料與方法1

12、. 1 材料 采集我國 19個省 (市 發(fā)病豬的肺 、 扁 桃體 、 腦等臟器組織或血清樣品 。 樣品采集情況如 下 :2006年 7月至 12月 , 采集到發(fā)病豬樣品的地區(qū) 有安徽蕪湖 、 巢湖 , 江西省南昌 、 撫湖 , 湖北黃岡 , 湖 南益陽 、 湘潭 , 北京市順義 、 房山 、 密云 、 平谷 、 昌平 、 懷柔 、 大興 , 河北省廊坊 、 石家莊 、 徐水 、 唐山 、 三河 、 保定 、 張家口 、 遵化 、 肅寧 、 高碑店 , 內(nèi)蒙古鄂爾多斯 , 天津?qū)氎?, 廣東新興 , 山東鄒城 、 肥城 、 曲阜 、 德州 , 河 南南陽 、 洛陽 、 四川內(nèi)江 , 遼寧綏中 ,

13、 山西興縣 , 寧夏 中衛(wèi) 、 德 隆 , 陜西 西安 以及 浙江 , 上 海等 地 區(qū) 。 而 2007年 1月至 10月 , 采集到樣品的地區(qū)為湖南湘 潭 、 株洲 、 益陽 , 北京順義 、 平谷 、 大興 , 河北石家莊 、 安平 、 大廠 、 高碑店 、 張家口 、 邢臺 、 昌黎 、 辛集 , 廣東 云浮 , 山東濟寧 , 遼寧大連 、 本溪 , 以及天津 。1. 2 試劑 、 載體和菌株 總 RNA 提取試劑盒 , 購 于 QIAG EN 公 司 ; AMV 反 轉(zhuǎn)錄 酶 、 RNA 酶 抑制 劑 、 Taq DNA 聚合酶 、 pGEM T -easy 載體系 統(tǒng) , 購 于

14、Promeg a 公司 ; DNA 膠回收試劑盒 , 購于上海華 舜生物工程有限公司 ; DH 5感受態(tài)菌 , 由本實驗室 保存 。1. 3 引物設(shè)計 根據(jù)高致病性 PRRSV Nsp2基因 序列和 GenBank 上已發(fā)表的 PRRSV 基因序列 , 設(shè) 計 1對特異性檢測高致病 PRRSV 的引物 、 3對重疊 擴增 PRRSV Nsp2基因引物和 1對擴增 ORF5基 因引物 (表 1 , 引物由上海生工生物工程技術(shù)有限 公司合成 。表 1 引物設(shè)計名稱 引物序列 引物位置 片段大小 /b p 用途JB U 5 -GT CCTA ACGGT TCGGAAGAAAC -3 14241446

15、n t 400高致病性 PRRSV 檢測 JBD 5 -GAGCTGAGT AT TT TGGGCGTG T -3 18021823n tNs p2-1U 5 -GGT TTGGCAGTC ATAAGTGGT -3 13151335n t1205Nsp2-1D 5 -TCCT CCTCC ATC TGG TCT T TA -3 25002519n tNs p2-2U 5 -CAAGGTGACGAGGTT CATC A -3 23642383n t1257 Nsp2基因分段擴增Nsp2-2D 5 -CCCGAGGATGCGTGGAACA -3 36023620n tNs p2-3U 5 -CC

16、TCACACGCCTGC ACC T TCCG -3 35353556n t822Nsp2-3D 5 -CC TTGAGAAAGCACAT AAGC -3 43374356n tORF5U 5 -AGCC TGTC TT TT TGCCA TCCT -3 1365413675n t 718ORF5基因擴增 O RF5D 5 -CAC TGGCG TGTAGGTAA TGGAAAAC -3 1434714372n t1. 4 RNA 提取和 RT -PCR 檢測 提取總 RNA 方 法按 QIAGEN 公 司 提取 試劑 盒說 明 書進 行 。 以 JBU 和 JBD 為擴增引物 , RT -P

17、C R 一步法擴增 , 反 應(yīng)條件為 :42 45min , 94 3min ; 94 30s , 55 30s , 72 30s ; 35個循環(huán)后 , 72 延伸 7min 。 2%瓊脂糖凝膠電泳檢測擴增結(jié)果 。1. 5 繪制 高 致病 性 PRRSV 流行 區(qū) 域圖 根 據(jù) RT -PC R 檢測高致病 PRRSV 的結(jié)果 , 利用 Photo -shop 軟件標(biāo)注中國 地圖 , 繪制我國高致病 PRRSV 流行區(qū)域圖 。1 和測序 提取陽性樣品總 RNA , 采用 RT -PCR 方 法分段擴增 N sp2基因 , ORF5基 因 。 反應(yīng) 條件同 1. 4, 但延伸時間改為 2min

18、。 擴增產(chǎn)物經(jīng) 1%瓊脂 糖凝膠電泳檢查 , 將擴增產(chǎn)物回收并連接 pG EM T -easy 載體 , 轉(zhuǎn)化 DH5感受 態(tài)菌 , 涂于 含氨芐青霉 素 、 IPTG 和 X -gal 的 LB 平板上 , 37 培養(yǎng) 14h , 挑 取白色菌落接種于含氨芐青霉素的液體 LB 培養(yǎng)基 中 , 37 振蕩培養(yǎng) 8h , 取 PC R 鑒定為陽性的菌液送 上海英駿公司測序 。1. 7 PRRSV Nsp2、 ORF5基因序列分析及系統(tǒng)發(fā)678 中 國 獸 醫(yī) 學(xué) 報 2009年 6月 第 29卷 第 6期 Chin J Vet S ci Jun . 2009 Vo l . 29 No . 6病性

19、 PRRSV 的 41個 Nsp2基 因 序 列 和 49個 O RF5基 因 序 列 及 推 導(dǎo) 的 氨 基 酸 序 列 , 并 用 C LUSTA LX1. 8與 GenBank 上 已 發(fā) 表 的 對 應(yīng) PRRSV 序列進行同源性比較 , 繪制系統(tǒng)發(fā)育樹 。2 結(jié)果2. 1 RT -PCR 檢測高致病性 PRRSV RT -PCR 擴 增產(chǎn)物經(jīng) 2%瓊脂糖凝膠電泳可見特異性擴增片段 的條帶 , 大小為 400bp , 與預(yù)期結(jié)果一致 。 19省 (市 的發(fā)病豬的樣 品均為高致病性 PRRSV 陽性 。 RT -PCR 方法檢測部分省 (市 樣品的電泳結(jié)果見圖 1 。圖 1 RT -PC

20、R 檢測部分省 (市 高致病 性 P RRSV 電泳結(jié)果 1. DL20001DNA M arker ; 2. 陽性對照 ; 3. 陰性對照 ; 4. SHH 上海市樣 品 ; 5. HEN 河 南省樣 品 ; 6. SD 山東 省樣品 ; 7. GD 廣 東省樣 品 ; 8H EBB1河 北省 樣品 ; 9. N M 內(nèi)蒙 古 自 治 區(qū) 樣 品 ; 10. BJSY 北 京 市 樣 品 ; 11. SXXX 山西省樣品 ; 12. ZHJ 浙江省樣品 ; 13. SHX 陜西 省樣品 ; 14. LN SZ 遼寧省樣品 ; 15. VR -2332株2. 2 繪制 高 致病 性 PRRSV

21、 流行 區(qū) 域圖 根 據(jù)RT -PC R 檢測高致病性 PRRSV 情況 , 繪制 我國高 致病性 PRRSV 分布區(qū)域圖 , 圖 2 。圖 2 我國高致病性 P RRS V 分布區(qū) 域圖 白色區(qū)域為高致病性 PR RS 疫區(qū) , 黑色區(qū)域為未采集病料的地區(qū)2. 3 高致病性 PRRSV Nsp2和 ORF5基因的擴增 RT -PCR 擴增 N sp2基因產(chǎn)物經(jīng) 1%瓊脂 糖凝膠 西省 (JXA1 PRRSV Nsp2基因 、 ORF5的瓊脂糖凝 膠電泳結(jié)果見圖 3。圖 3 JXA 1N sp2、 O RF5PCR 產(chǎn) 物電 泳 結(jié)果 1. DL 2000DN A M ar ker ; 2.

22、陰性對照 ; 3. JX A1O RF5; 4. JX A1N sp2-3; 5. JX A1N sp2-2; 6. JX A1N sp2-12. 4 高致病性 PRRSV Nsp2基因序列分析及系統(tǒng)發(fā)育樹 獲得的 高致病性 PRRSV Nsp2基 因序列 全長為 2850bp , 編碼 950個氨基酸 。 41個 N sp2基因 均 缺 失 第 481位 和 532560位 氨 基 酸 , PRRSV 部分 N sp2氨基酸序列比較結(jié)果見圖 4。41個 N sp2基因序列之間高度同源 , 其核苷酸 及氨基 酸 序列 同源 性分 別為 97. 5%99. 9%和 94. 1%99. 8%;與

23、H B -1株核苷酸及氨基酸序列 同源性分別為 95. 1%96. 5%和 92. 1%95. 2%;與 V R -2332株基因序列及氨基酸序列同源性分別 為 82. 6%83. 7%和 75. 6%78. 3%;與 LV 株基 因序 列 及 氨 基 酸 序 列 同 源 性 分 別 為 51. 2%51. 8%和 31. 5%32. 2%。系統(tǒng)發(fā) 育 樹 分 析表 明 , 高致 病 性 PRRSV 與 H B -1株遺傳關(guān)系較近 , 處于同一分支 ; 與 LV 株遺 傳關(guān)系較遠(yuǎn) , 屬于不同基因型的 PRRSV , 系統(tǒng)發(fā)育 樹見圖 5。2. 5 高致病性 PRRSVORF5基因序列分析及系

24、統(tǒng) 發(fā)育樹 獲得的 49個高 致病性 PRRSV ORF5基 因長 603bp , 編碼 200個氨基酸 。 序列分析表明 , 獲 得的 ORF5核苷酸序列及 GP5氨基酸序列之間同 源性分別為 97. 2%99. 8%和 97. 2%100%;與 H B -1株 ORF5核苷酸序列和 GP5氨基酸序列同源 性 最 高 , 分 別 為 96. 0%97. 3%和 92. 5%94. 5%;與 VR -2332株和 LV 株 ORF5核苷酸序列 同源性分別為 88. 4%89. 7%和 63. 8%65. 0%,氨基 酸 序 列 同 源 性 分 別 為 87. 0%89. 5%和57. 1%59

25、. 2%。系統(tǒng)發(fā) 育 樹 分 析表 明 , 高致 病 性 PRRSV 與 H B -1株遺傳關(guān)系較近 , 處于同一分支 ; 與 LV 株遺 傳關(guān)系 較 遠(yuǎn) , 屬 于 不 同 基 因 型 的 PRRSV 。 依 據(jù) ORF5基因繪制的 PRRSV 系統(tǒng)發(fā)育樹見圖 6。679 中 國 獸 醫(yī) 學(xué) 報 2009年 6月 第 29卷 第 6期 Chin J Vet Sci Jun . 2009 V ol . 29 N o . 6 圖 4 PR RSV 部 分 N sp2氨 基酸 序 列 比 較 結(jié) 果 H B1. 河 北 分 離 株 ; CH -1a . 我 國 1996年 分 離 株 ; JA 1

26、42. 美 國 分 離 株 ;N VSL 97. 美國分離株 ; P129. 美 國分 離 株 ; Resp P P RRS M LV . 美 國 疫苗 株 ; PA 8. 加拿 大 分 離 株 ; L P1. 韓 國 分離 株 ; HN 1. 湖南分 離株 ; S1. 南 京 分離 株 ; 01NP 1. 2. 泰 國 分離 株 ; HB2. 河 北 分 離 株 ; BJ -4. 北 京 分離 株 ; V R -2332. 美 洲 型 PR RSV 標(biāo)準(zhǔn)株 ; M N 184B . 美 國分 離株 ; 16244B . 美 國分 離株 ; SD 、 SD2、 SDDZ . 山 東省 樣品 ;

27、 N M . 內(nèi) 蒙古 自治 區(qū) 樣品 ; JX A1、 JXB2. 江西省樣品 ; H U B2、 H U B1. 湖北 省樣 品 ; HN XT A . 湖 南省 樣 品 ; H EN 、 H EN LY 、 H ENN Y . 河南 省 樣品 ; HEB1、 HEBBD 、 T S . 河北省樣品 ; SHH 、 SH H2. 上 海市樣 品 ; BJPG 、 BJF S1、 BJFS2、 BJSY1、 BJS Y2、 BJD R 、 BJHR . 北京 市 樣品 ; SXXX . 山 西省樣 品 ; GD 、 G D1、 G D2. 廣 東省樣 品 ; L NSZ . 遼 寧省樣 品

28、; SHX . 陜西省 樣品 ; Z HJ . 浙江省 樣品 ; T J , T J2. 天津市樣品 ; -. 表示缺失 圖 6680 中 國 獸 醫(yī) 學(xué) 報 2009年 6月 第 29卷 第 6期 Chin J Vet S ci Jun . 2009 Vo l . 29 No . 63 討論2006年 6月以來 , 高致病性 PRRSV 在我國不 同規(guī)模的養(yǎng)豬場流行 , 與以往分離的 PRRS 毒株不 同 , 高致病性 PRRSV 造成大量成年豬以及一些懷 孕母豬感染 , 并導(dǎo)致死亡 。 最初 (68月份 疫情集 中發(fā)生于我國的江西 、 湖南 、 湖北等南方少數(shù)省份 , 在這 3個省的 5個

29、地區(qū)的 11個豬場采集到的所有 發(fā)病豬樣品均為高致病性 PRRSV 陽性 。 隨后該病 毒逐漸擴散和蔓延到相臨省份以及我國大部分養(yǎng)豬 省份和地區(qū) , 諸如華北 、 東北地區(qū) 。 之后從 2006年 8月底至 2007年 10月間 , 19個省采集的病料中均 有高致病性 PRRSV 陸續(xù)檢出 , 疫情范圍覆蓋了我 國的大部分地區(qū) 。 檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn) :在 2006年發(fā)生過 疫情的一些地區(qū) , 在 2007年同樣發(fā)生了疫情 , 如湖 南省湘潭 、 益陽地區(qū) , 北京的順義 、 大興以及河北的 石家莊 、 高碑店 、 張家口等地區(qū) 。 在一些 2006年曾 有疫情初發(fā)的省市 , 2007年該省其他地區(qū)

30、又有陽性 樣品檢出 , 如廣東云浮 、 遼寧本溪等地區(qū) 。 在采集樣 品較多的北京 、 河北 , 從 2006年 8月至 2007年 10月 1年多時間中 , 不斷有陽性病料檢出 , 疫區(qū)的涉及 范圍幾乎包括北京的所有郊區(qū)縣以及河北省大部分 地區(qū) , 充分說明該病毒在我國呈長期帶毒 , 持續(xù)性流 行狀態(tài) 。在 PRRSV 的全基因組序列中 , N sp2和 O RF5基因變異最大 8, 19。 以 ORF5和 Nsp2基因作為分 子流行病學(xué)調(diào)查的對象 , 在一定程度上可以反映整 個基因組的變異情況 。 N sp2是 PRRSV 整 個基因 組中變異最大的區(qū)域 , 在不同的毒株中存在著不同 長度

31、缺失 、 突變以及插入 , 但 Nsp2基因變異主要位 于其 中 部 區(qū) 域 3, 15, 20。 我 們 獲 得 的 高 致 病 性 PRRSV 基因 Nsp2均存在著相同的 30個氨基酸的 缺失 , 與國內(nèi)外報道的 PRRSV N sp2基因缺失株比 較 , 其 N sp2基因缺失的位置及長度均不相同 , 但均 位于 PRRSV Nsp2基因的中部區(qū)域 。目前 , 國內(nèi)外學(xué)者多用 O RF5基因?qū)?PRRSV 進行基因型的鑒定或型內(nèi)群的分類 8-9, 有學(xué)者比較 了 1996 2006年中國大陸的 42個分離株的 O RF5基因序列發(fā)現(xiàn) :各分離株基因變異較大 , 分別屬于 2個不同的亞群

32、 21。 而 高致病性 PRRSV 與以往 分 離的毒株不同 , 從不同時間 、 不同地區(qū)陽性樣品中獲 得 ORF5、 Nsp2基因序列之間高度同源 , 均 屬于美 洲型 PRRSV 。 系統(tǒng)發(fā) 育樹分析表明 :獲得的分 離 株基因位于同一基因亞群 , 與 H B -1株遺傳關(guān)系較 近 , PRRSV 沿不同方向進化而來 , 也可能由 HB -1株直 接演變而來 。2001年 , 美國發(fā)生非典型 PRRS 疫情 , 其致病 病原為 N sp2缺失氨基酸的美洲型 PRRSV M N184株 10, 22; 進一步研究表明 MN184分離株中的一株 M N184B 株具有高 度致病力 , 經(jīng)比對發(fā)

33、現(xiàn)其 N sp2蛋白有更多氨基酸的缺失 , 這可能導(dǎo)致其致病性升 高的毒力因子 10, 16。 有學(xué)者認(rèn)為 N sp2蛋白可能具 有種屬 特 異 性 , PRRSV 對細(xì) 胞 和 組 織 性 親嗜 有 關(guān) 8, 15。 高致病性 PRRSV 的 Nsp2不連續(xù)缺失 30個氨基酸可能導(dǎo)致嗜組織性改變而使其毒力增強 , 故而使發(fā)病豬死亡率升高 。 但有待于應(yīng)用更多的研 究方法去探索證實 。目前 , 預(yù)防 PRRS 最 合適的方 法是疫苗 免疫 , 不同 PRRSV 毒株的遺傳變異和進化機制是否與疫 苗免 疫 壓 力 有 關(guān) 尚 需 進 行 相 關(guān) 的 試 驗 研 究 。 PRRSV 基因序列變異與

34、其誘導(dǎo)的抗體應(yīng)答有相關(guān) 性 9-12, 因此 PRRSV 的 快速進化 可能影響 疫苗免 疫的效果 。 研究表明 , 美國發(fā)生的非典型 PRRS 疫 情 時 , 當(dāng) 時 美 國 現(xiàn) 有 的 疫 苗 并 不 能對 其 提 供 保 護 8-10。 我國現(xiàn)有 PRRS 疫苗是否能有效防制高致 病性 PRRSV , 有待進一步試驗研究 。參考文獻 :1 斯特勞 B E . 豬 病學(xué) M . 8版 . 張 中秋 , 趙德 明 , 沈 建 中 , 等譯 . 北京 :中國農(nóng)業(yè)大學(xué) 出版社 , 2003:205-230. 2 We nsvo or t G , Te rpstra C , Po l J M ,

35、e t al . M y stery swine disease in T he N etherla nds :the iso lation o f Le ly stad virus J . Ve t Q , 1991, 13:121-130.3 童光志 , 仇華吉 , 周 彥君 , 等 . 豬生 殖 -呼吸 道綜 合征 病 毒 CH -1a 結(jié)構(gòu)蛋 白基因 的克 隆與 序列分 析 J . 自 然 科學(xué)進展 , 2000, 10(2 :147-153.4 姜 平 , 陳溥言 , 姜志華 , 等 . 我國兩個不同地區(qū)豬繁 殖 與呼吸綜合征 病毒 O RF5基因 序列 比較 J . 病 毒 學(xué) 報

36、 , 2000, 16(3 :70-72.5 A lbina E . Epidemiolo gy of po rcine reproductive and re -spirato ry sy ndro me (P RRS :an o ver view J . Vet M i -crobio l , 1997, 55:309-316.6 郭寶清 , 陳章水 , 劉 文興 , 等 . 從疑似 P RRS 流產(chǎn)胎兒 分 離 P RRSV 的研 究 J . 中國 預(yù) 防 獸 醫(yī) 學(xué) 報 , 1996, 2 (2 :1-5.7 Gao Z Q , G uo X , Y ang H C . Ge nomi

37、c characterization of tw o Chinese iso lates of po rcine respirato ry and re -productive sy ndrome virus J . A r ch Viro l , 2004, 149: 1341-1351.8 高志強 . 豬繁殖 與呼吸 綜合征 病毒全基 因組分 子遺 傳 ,681 中 國 獸 醫(yī) 學(xué) 報 2009年 6月 第 29卷 第 6期 Chin J Vet Sci Jun . 2009 V ol . 29 N o . 6682 中 國 獸 醫(yī) 學(xué) 報 2009 年 6 月 第 29 卷 第 6 期

38、Chin J Vet S ci Jun . 2009 Vo l . 29 No . 6 S ta te s J . V irus Re s , 2004 , 100 : 229 -235 . 16 Faaberg K S , H an J , Wang Y , et al . M o lecular dissection of por cine re pr oductiv e a nd respirato ry vir us putative no nst ructura l protein 2 J . A dv Exp M ed Bio l , 2006 , 581 : 73-77 . 17

39、 Key K F , Haqshenas G , G uenette D K , et al . G ene tic v ariation and phy lo genetic a naly ses of the O RF 5 gene o f acute po rcine repro ductiv e and re spir atory sy ndro me virus isolates J . Vet M icrobio l , 2001 , 83 : 249263 . 18 Chen J , L iu T , Z hu C G , et al . Genetic V ariatio n

40、o f Chinese P RRSV Str ains Based on O RF5 Sequence J . Bio chem Genet , 2006 , 44 : 421-431 . 19 A llende , R . M utatio ns in the g eno me o f po rcine r eproductive and respirato ry sy ndro me virus respo nsible fo r the attenua tion pheno ty pe J . A rch Viro l , 2000 , 145( 6: 1149-1161 . 20 A

41、llende R , Lewis T L , L u Z , e t a l . N o rth A me rican and Euro pean po rcine repro ductive and respira to ry sy ndro me v ir uses differ in no n -str uctural pro tein co ding regions J . J G en Viro l , 1999 , 80( 2: 307-315 . 21 A N T ong-qing , Z HO U Y an -jun , LI U G uang -qing , et al .

42、G enetic div ersity and phy lo genetic ana ly sis o f glycopro tein 5 of P RRSV iso lates in mainland China f rom 1996 to 2006 : Coe xistence of two N A - subgenoty pes with g rea t div ersity J . V et M icr obiol , 2007 , 123( 1/ 2/ 3: 43 -52 . 22 Pirzadeh B , Dea S . Immune respo nse in pig s vacc

43、inated with plasmid DN A encoding O RF5 o f por cine repro ductive a nd respirato ry syndrome virus J . J Ge nera l V ir ol , 1998 , 79( 5: 989 -999 . 9 Yo shii M , Kaku Y , M urakami Y , et al . G ene tic v aria tio n and g eog raphic dist ribution of po rcine repro duc tiv e and re spir atory syndrome virus in Ja