附錄一藥物溶出釋放比較研究基本方法

1、附錄一、藥物溶出/釋放比較研究基本方法一、基本原則藥品獲準(zhǔn)上市后，溶出度或釋放度檢查是藥品生產(chǎn)和質(zhì)量控制的一項(xiàng)重要內(nèi)容，對(duì)保證批間產(chǎn)品質(zhì)量一致性有重要作用。當(dāng)藥品處方、生產(chǎn)工藝、生產(chǎn)地點(diǎn)和生產(chǎn)規(guī)模等發(fā)生變更后，溶出度或釋放度檢查是比較變更前后產(chǎn)品相似性或差異程度的重要方法和研究工作的重要內(nèi)容。對(duì)于口服固體制劑微小的處方、工藝、產(chǎn)地等方面變更，一般通過(guò)溶出度和釋放度比較研究已可以證明變更前后產(chǎn)品質(zhì)量的一致性。溶出度或釋放度檢查方法需符合藥典有關(guān)規(guī)定。由于溶出/釋放比較研究可能需采用與原上市注冊(cè)時(shí)不一致的方法，此時(shí)應(yīng)注意進(jìn)行相應(yīng)的方法學(xué)驗(yàn)證，注意研究這些方法對(duì)區(qū)分藥品質(zhì)量及體內(nèi)行為的分辨能力。二、

2、藥物溶出比較研究基本方法口服固體制劑給藥后體內(nèi)吸收主要依賴于制劑中藥物溶解、溶出及藥物在胃腸道的通透性等方面，基于這一過(guò)程中藥物溶解、溶出的重要性，體外藥物溶出行為與體內(nèi)藥物吸收在某些情況下是相關(guān)的。藥物的水溶解性、藥物對(duì)腸壁的通透性是溶出比較研究中需要注意的問(wèn)題，不同特性的藥物研究工作側(cè)重點(diǎn)不盡相同。藥物水溶解性、通透性本文附注有相應(yīng)說(shuō)明，具體界定及研究工作可參照相關(guān)技術(shù)指導(dǎo)原則進(jìn)行。如果無(wú)法判定藥物是屬于高通透性，還是低通透性的，建議根據(jù)藥物的水溶解性，分別參照下述1.2項(xiàng)或1.3項(xiàng)進(jìn)行變更前后溶出行為比較研究。1、實(shí)驗(yàn)方法1.1、原料藥屬于高溶解性，高通透性的一般認(rèn)為餐后胃平均保留（排空

3、）T50%是1520分鐘。因此，當(dāng)此類藥物在0.1N鹽酸中15分鐘溶出85%以上時(shí)，一般認(rèn)為藥物體內(nèi)吸收速度與程度不再依賴于胃排空速率，這種情況下，只要處方中不含顯著影響藥物吸收的輔料，藥品一般不會(huì)有生物利用度方面的問(wèn)題。反之，如果藥物溶出比胃排空速率慢，則需要在多種介質(zhì)中對(duì)藥物溶出行為進(jìn)行考察。此類藥物溶出比較試驗(yàn)介質(zhì)建議首先選擇900mL0.1N HCl，可采用藥典收載的轉(zhuǎn)藍(lán)法（轉(zhuǎn)速100rpm），也可選擇藥典收載的槳法（轉(zhuǎn)速50rpm）。如果15分鐘內(nèi)藥物溶出85%以上，則不需要再比較其他pH條件下或介質(zhì)中藥物溶出情況。如果15分鐘內(nèi)藥物溶出未達(dá)到85%，則需要按下述1.2或1.3對(duì)變更

4、前后溶出行為進(jìn)行比較。1.2、原料藥屬于高溶解性，低通透性的此類藥物由于通透性低而溶解性好，體內(nèi)吸收的主要限速步驟是藥物的滲透過(guò)程，而不是藥物的溶出過(guò)程。因此，一般不需要在不同pH條件下考察產(chǎn)品變更前后溶出情況。溶出比較研究可選擇質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的檢查方法進(jìn)行，如標(biāo)準(zhǔn)中未收載溶出度檢查方法，可選擇產(chǎn)品申請(qǐng)上市注冊(cè)時(shí)質(zhì)量研究和穩(wěn)定性考察中選擇的溶出度檢查方法。一般每批樣品至少采用12個(gè)劑量單位（如片劑為12片，膠囊為12粒）進(jìn)行測(cè)定，除0時(shí)外，一般至少選擇3個(gè)時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行測(cè)定，如5、15、30、45min，或采用其他適宜的時(shí)間間隔取樣，直到藥物溶出90%以上或達(dá)到溶出平臺(tái)，計(jì)算各時(shí)間點(diǎn)藥物溶出百分比

5、，繪制每批樣品藥物溶出曲線。除0時(shí)外，第1個(gè)時(shí)間點(diǎn)的變異系數(shù)不得過(guò)20%，從第2個(gè)時(shí)間點(diǎn)至最后1個(gè)時(shí)間點(diǎn)的溶出結(jié)果的變異系數(shù)應(yīng)小于10%參考文獻(xiàn)6。各批樣品測(cè)試需采用相同的儀器，盡可能在同一天進(jìn)行。 1.3、原料藥屬于低溶解性、高通透性的（鹽酸?？颂婺幔┯捎诖祟愃幬锿ㄍ感愿?，藥物的溶出過(guò)程可能成為體內(nèi)吸收的限速步驟，因此，建議考察不同pH條件下變更前后藥物溶出情況，可選擇水、0.1N鹽酸及pH 4.57.5緩沖液三種介質(zhì)進(jìn)行比較。對(duì)于膠囊或含明膠包衣的片劑，可采用含酶的人工胃液或人工腸液進(jìn)行。如無(wú)特殊情況，溶出比較研究一般不使用含有機(jī)溶劑的介質(zhì)（如乙醇-水體系）進(jìn)行。如有充分的依據(jù)，介質(zhì)中可加

6、適量的表面活性劑。如果原料藥或處方中輔料屬于pH非敏感型的，溶出曲線比較可僅采用2種緩沖體系進(jìn)行。一般每批樣品至少采用12個(gè)劑量單位（如片劑為12片，膠囊為12粒）進(jìn)行測(cè)定，除0時(shí)外，一般至少選擇3個(gè)時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行測(cè)定，如5、15、30、45min，或采用其他適宜的時(shí)間間隔取樣，直到藥物溶出90%以上或達(dá)到溶出平臺(tái)，計(jì)算各時(shí)間點(diǎn)藥物溶出百分比，繪制每批樣品藥物溶出曲線。除0時(shí)外，第1個(gè)時(shí)間點(diǎn)的變異系數(shù)不得過(guò)20%，從第2個(gè)時(shí)間點(diǎn)至最后1個(gè)時(shí)間點(diǎn)的溶出結(jié)果的變異系數(shù)應(yīng)小于10%參考文獻(xiàn)6。 各批樣品測(cè)試應(yīng)采用相同的儀器，盡可能在同一天進(jìn)行。 2、比較方法變更前后溶出曲線比較可采用適宜的統(tǒng)計(jì)學(xué)方法進(jìn)行

7、。溶出曲線比較通常選擇非模型依賴方法，如可通過(guò)計(jì)算相似因子f2比較變更前后溶出行為的相似性，當(dāng)f2數(shù)值在50100范圍認(rèn)為兩條溶出曲線是相似的。f2=50·log1+（1/n）（Rt-Tt）2-0.5100上述公式中n為時(shí)間點(diǎn)（n3），Rt是變更前制劑藥物溶出平均百分?jǐn)?shù)，Tt是變更后制劑藥物溶出平均百分?jǐn)?shù)。采用相似因子比較法需滿足以下條件：取樣時(shí)間點(diǎn)除0時(shí)外，至少有3個(gè)每個(gè)處方樣品至少采用12個(gè)劑量單位計(jì)算時(shí)藥物溶出達(dá)到85%以上的時(shí)間點(diǎn)只能選取一個(gè)從第2個(gè)時(shí)間點(diǎn)至最后1個(gè)時(shí)間點(diǎn)溶出結(jié)果的變異系數(shù)應(yīng)小于10%保證藥物溶出90%以上或達(dá)到溶出平臺(tái)如果藥物在15min內(nèi)溶出達(dá)到85%以上

8、，可以認(rèn)為兩批產(chǎn)品溶出行為是相似的，不需要通過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)方法對(duì)數(shù)據(jù)分析判定。溶出曲線比較也可采用模型依賴法，即一些用于描述藥物溶出曲線的數(shù)學(xué)模型，如線性模型、Weibull模型等。如果可以提供充分的依據(jù)和數(shù)據(jù)分析，這些證明溶出行為相似性的統(tǒng)計(jì)學(xué)方法也是可以接受的。統(tǒng)計(jì)學(xué)比較一般先根據(jù)變更前的代表性批次的溶出曲線，選擇最合適的模型，建議采用不超過(guò)三個(gè)參數(shù)的模型（例如線性、二次方、對(duì)數(shù)、概率和Weibull模型），再對(duì)模型的參數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)比較，基于對(duì)已批準(zhǔn)的標(biāo)準(zhǔn)批次的測(cè)試單位（例如膠囊或片）的匹配模型的參數(shù)變化設(shè)置相似區(qū)間，以測(cè)試批次和參比批次間的模型參數(shù)計(jì)算MSD，估計(jì)在兩個(gè)批次間真實(shí)差別的90%可

9、信區(qū)間，比較可信區(qū)間和相似區(qū)間的限度。如果可信區(qū)間是在相似區(qū)間的范圍內(nèi)，則認(rèn)為測(cè)試批次與參比批次有相似的溶出曲線。三、藥物釋放研究比較基本方法1、實(shí)驗(yàn)方法 1.1、緩釋/控釋制劑緩釋/控釋制劑處方、工藝、產(chǎn)地等變更可能對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量產(chǎn)生顯著影響，需注意對(duì)變更前后不同pH條件下藥物釋放情況進(jìn)行全面考察和了解。除質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的釋放度檢查方法外，釋放行為比較研究建議另外選擇至少三種介質(zhì)進(jìn)行，如水、0.1N鹽酸、pH4.5及pH 6.8的緩沖液。在有充分依據(jù)的情況下，釋放介質(zhì)中可加適量的表面活性劑。一般每批樣品至少采用12個(gè)劑量單位進(jìn)行測(cè)定，除0時(shí)外，建議在開(kāi)始檢查后1、2、4小時(shí)（4h后每間隔2小時(shí)）

10、取樣直到藥物釋放80%以上或達(dá)到平臺(tái)參考文獻(xiàn)4，計(jì)算各時(shí)間點(diǎn)藥物釋放百分比，繪制每批樣品藥物釋放曲線。各取樣時(shí)間點(diǎn)變更前后樣品藥物釋放數(shù)據(jù)的平均值之差應(yīng)小于15%參考文獻(xiàn)4。各批樣品測(cè)試需采用相同的儀器，盡可能在同一天進(jìn)行。 1.2、腸溶制劑腸溶制劑處方、工藝、產(chǎn)地等變更后，需注意對(duì)變更前后人工胃液及人工腸液中藥物釋放情況進(jìn)行全面考察。除質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的釋放度檢查方法外，建議采用標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的釋放度檢查儀器，依次考察在0.1N鹽酸中（2小時(shí)）及pH4.57.5緩沖液中藥物釋放情況，除質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中釋放度檢查規(guī)定的轉(zhuǎn)速外，需考察其他兩種轉(zhuǎn)速條件下藥物釋放情況。例如，如果標(biāo)準(zhǔn)中釋放度檢查采用轉(zhuǎn)籃法，則轉(zhuǎn)

11、速可選擇50、100、150rpm進(jìn)行考察；如標(biāo)準(zhǔn)中釋放度檢查采用槳法，轉(zhuǎn)速可選擇50、75、100rpm。一般每批樣品至少采用12個(gè)劑量單位（如片劑為12片，膠囊為12粒）進(jìn)行測(cè)定。取樣時(shí)間除0時(shí)及在0.1N鹽酸中考察2小時(shí)外，可在緩沖液中15、30、45、60、120分鐘取樣，或采用其他適宜的時(shí)間間隔取樣，直到藥物釋放80%以上或達(dá)到平臺(tái) 參考文獻(xiàn)4，計(jì)算各時(shí)間點(diǎn)藥物釋放百分比，繪制每批樣品藥物釋放曲線。各取樣時(shí)間點(diǎn)變更前后樣品藥物釋放數(shù)據(jù)的平均值之差應(yīng)小于15%參考文獻(xiàn)4。各批樣品測(cè)試應(yīng)采用相同的儀器，盡可能在同一天進(jìn)行。2、比較方法變更前后釋放曲線比較可采用適宜的統(tǒng)計(jì)學(xué)方法進(jìn)行。釋放曲

12、線比較通常選擇非模型依賴方法，如通過(guò)計(jì)算相似因子f2的方法比較變更前后釋放行為的相似性，當(dāng)f2數(shù)值在50100范圍，則認(rèn)為兩條釋放曲線是相似的。f2=50·log1+（1/n）（Rt-Tt）2-0.5100上述公式中n為時(shí)間點(diǎn)，Rt是變更前制劑藥物釋放平均百分?jǐn)?shù)，Tt是變更后制劑藥物釋放平均百分?jǐn)?shù)。采用相似因子比較法需注意滿足以下條件：取樣時(shí)間點(diǎn)根據(jù)劑型特點(diǎn)及產(chǎn)品特點(diǎn)合理設(shè)置（詳見(jiàn)正文）每個(gè)處方樣品至少采用12個(gè)劑量單位從第2個(gè)時(shí)間點(diǎn)至最后1個(gè)時(shí)間點(diǎn)釋放結(jié)果的變異系數(shù)應(yīng)小于10%，且各取樣時(shí)間點(diǎn)變更前后樣品藥物釋放數(shù)據(jù)的平均值之差應(yīng)小于15%保證藥物釋放80%以上或達(dá)到釋放平臺(tái)釋放曲

13、線比較也可選擇模型依賴法。如果可以提供充分的依據(jù)和數(shù)據(jù)分析，這些證明釋放行為相似性的統(tǒng)計(jì)學(xué)方法也是可以接受的?！靖阶ⅰ?、藥物的水溶解性主要反映藥物在生理pH條件下的溶解性情況。研究工作一般在37±1條件下，pH17.5的水性介質(zhì)中進(jìn)行測(cè)定，繪制被測(cè)藥物的pH溶解度曲線?？筛鶕?jù)藥物的離子化特性選擇pH測(cè)定點(diǎn)，例如，當(dāng)藥物的pka為35時(shí)，藥物的溶解度建議在pH=pka, pH=pka+1, pH=pka-1, pH=1和pH=7.5處測(cè)定。藥典收載的緩沖溶液可用于藥物溶解度的研究。藥物水溶解性可根據(jù)pH17.5范圍溶解藥物單次最大給藥劑量的介質(zhì)的體積來(lái)決定。在pH17.5范圍，如果單

14、次最大給藥劑量的藥物可溶于不多于250 ml的介質(zhì)中，則該藥物認(rèn)為是高溶解性的。2、藥物的通透性（Permeability）藥物通透性分類以測(cè)定藥物透過(guò)人體腸壁膜量為直接依據(jù)，而藥物在人體吸收程度（指藥物吸收比例，而不是系統(tǒng)生物利用度）只是間接依據(jù)。藥物通透性的測(cè)定可采用人體實(shí)驗(yàn)方法或其他能預(yù)測(cè)藥物體內(nèi)吸收程度的非人體實(shí)驗(yàn)方法。人體實(shí)驗(yàn)方法包括質(zhì)量平衡法、絕對(duì)生物利用度法和小腸灌流法等。多數(shù)藥物研究結(jié)果顯示質(zhì)量平衡法測(cè)定結(jié)果變異程度大，一般應(yīng)優(yōu)先考慮采用其它方法。以靜脈注射給藥為對(duì)照，測(cè)定口服原料藥給藥的絕對(duì)生物利用度某些情況下可以間接反映藥物吸收情況，如無(wú)法證明藥物在胃腸道內(nèi)是否穩(wěn)定的情況下，藥物吸收程度達(dá)到90%以上時(shí)，該藥物被認(rèn)為是高通透性的。其他能預(yù)測(cè)藥物體內(nèi)吸收程度的非人體實(shí)驗(yàn)方法也可作為判定藥物通透性的依據(jù)，如使用適宜的動(dòng)物模型進(jìn)行體內(nèi)或在體灌腸研究，使用人或動(dòng)物腸組織樣本進(jìn)行體外通透性實(shí)驗(yàn)，體外表皮單層細(xì)胞培養(yǎng)通透性實(shí)驗(yàn)。上述實(shí)驗(yàn)可參照相關(guān)技術(shù)指導(dǎo)原則進(jìn)行?？紤]藥物在透過(guò)胃腸壁膜前可能會(huì)有部分降解，為證明藥物從胃腸道消除是由于藥物透過(guò)胃腸壁膜而不是