胃舒顆粒對(duì)胃粘膜保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究

1、    胃舒顆粒對(duì)胃粘膜保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究*         摘要：觀察了胃舒顆粒對(duì)大鼠胃粘膜的保護(hù)作用，并對(duì)其作用機(jī)理進(jìn)行探討。結(jié)果表明：胃舒顆粒對(duì)消炎痛、酸性乙醇和水浸束縛應(yīng)激誘導(dǎo)的大鼠胃粘膜損傷具有明顯的保護(hù)作用。這種粘膜保護(hù)作用與其提高胃粘膜清除氧自由基能力有關(guān)，而對(duì)胃液成分及胃壁結(jié)合粘液含量無(wú)明顯影響。關(guān)鍵詞：胃舒顆粒；胃粘膜；氧自由基；大鼠Experimental Research of Weishu Granular on Gastric Mucosa Prot

2、ectionWang Jing（王晶），Hou Jiayu（侯家玉）,Liu Hengkuan（劉衡寬）,et al. (Beijing University of Traditional Chinese Medicine, Beijing 100029)ABSTRACT: The protective effects of the Weishu Granular on the gas tric mucosa of rats were observed and the mechanism of action was discussed. The results show that the We

3、ishu Granular has a markedly protection on the gast ric mu cosa injury induced by the indometacin, acidic ethanol and water immersion-encha ining. The protection correlates with enhancing the ability of the gastric muco sa to clear the oxygen free radical. It has no significant effects on the gastri

4、 c content and the gastric folds bound mucus.KEY WORDS: Chinese medicine; Gastric mucosa; Oxygen free radical胃舒顆粒由百合、烏藥、枳實(shí)、虎杖4味中藥組成，主治胃陰不足、胃氣失和兼有血瘀者。本文旨在觀察胃舒顆粒對(duì)胃粘膜損傷的保護(hù)作用，并對(duì)其作用機(jī)理進(jìn)行探討，以期為其臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。1材料1.1動(dòng)物Wistar大鼠，雌雄兼用，體重180220g，購(gòu)于中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院動(dòng)物中心。1.2藥物及試劑胃舒顆粒由北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院制劑室提供，1g藥粉相當(dāng)于5g生藥材，用常水配成相當(dāng)于藥粉4、2

5、、1g/kg的溶液，相當(dāng)于臨床人用劑量的20、10及5倍，大鼠1mL/kg體重；消炎痛(IM)，石家莊強(qiáng)力制藥廠生產(chǎn)；甲氰咪胍，上海延安制藥廠生產(chǎn)；還原型谷胱甘肽(GSH)、谷胱甘肽過(guò)氧化酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)測(cè)定試劑盒由南京建成生物研究所提供；氣滯胃痛沖劑，由遼寧本溪第三制藥廠生產(chǎn)，研究采用劑量5g/kg，相當(dāng)于臨床人用劑量的10倍。1.3儀器722型光柵分光光度計(jì)，上海第三分析儀器廠生產(chǎn)；400R低溫離心機(jī)，德國(guó)Heraeus公司產(chǎn)品。2方法及結(jié)果2.1胃舒顆粒對(duì)消炎痛致大鼠胃粘膜損傷的保護(hù)作用實(shí)驗(yàn)用大鼠59只，禁食24h后分為5組。模型對(duì)照組：大鼠灌胃常水10mL/kg。胃

6、舒4g/kg組、胃舒2g/kg組、胃舒1g/kg組：分別予胃舒4、2、1g/kg灌胃。氣滯胃痛沖劑組：氣滯胃痛沖劑5g/kg。以上5組灌胃同時(shí)肌肉注射消炎痛40mg/kg，10h后處死取胃，于10%福爾馬林溶液中固定。損傷程度以潰瘍指數(shù)表示：參照Kitagwa方法，按粘膜損傷的長(zhǎng)度積分計(jì)算，將粘膜平鋪在濾紙上，在解剖顯微鏡下觀察，損傷每1.0mm的長(zhǎng)度記作1分，若損傷寬度大于1.0mm，則積分加倍。實(shí)驗(yàn)結(jié)果：消炎痛引起的胃粘膜損傷在腺胃部，損傷呈條索狀，粘膜呈暗紅色。胃舒對(duì)胃粘膜保護(hù)作用呈一定量效關(guān)系。胃舒4、2g/kg能顯著減少條索狀損傷，降低潰瘍指數(shù)，1g/kg無(wú)明顯保護(hù)作用。氣滯胃痛沖劑

7、5g/kg對(duì)胃粘膜損傷無(wú)明顯影響。見表1。組別n潰瘍指數(shù)抑制率/%模型對(duì)照組1719.02±9.54胃舒4g/kg組126.12±7.46*67.82胃舒2g/kg組1012.05±4.93*36.65胃舒1g/kg組1017.10±19.24*21.29氣滯胃痛5g/kg組1012.16±10.22*36.07     注：與模型對(duì)照組比*P0.05*P0.01 2.2胃舒顆粒對(duì)酸性乙醇致大鼠胃粘膜損傷的保護(hù)作用實(shí)驗(yàn)大鼠56只，禁食24h后分為4組。模型對(duì)照組：常水10mL/kg灌胃；胃舒2g/kg、胃

8、舒1g/kg組：分別予胃舒2、1g/kg灌胃；氣滯胃痛沖劑組：氣滯胃痛沖劑5g/kg灌胃。以上4組均在1h后灌胃50%乙醇0.15mol/L鹽酸10mL/kg，1h后處死取胃，固定。損傷程度計(jì)量方法同前。實(shí)驗(yàn)結(jié)果，以50%乙醇0.15mol/L鹽酸給大鼠灌胃后，胃體部產(chǎn)生條索狀出血性潰瘍，部分皺襞消失，粘膜水腫呈暗紅色。各給藥組均能顯著減少粘膜條索狀出血，潰瘍指數(shù)顯著降低。胃舒的兩個(gè)劑量組有顯著量效關(guān)系。見表2。表2胃舒顆粒對(duì)大鼠酸性乙醇潰瘍的影響組別n潰瘍指數(shù)抑制率/%模型對(duì)照組2157.40±39.73胃舒2g/kg組105.15±5.92*91.03胃舒1g/kg組1

9、328.35±18.34*50.06氣滯胃痛5g/kg組120.08±0.20*99.86     注：與模型對(duì)照組比*P0.01 2.3胃舒顆粒對(duì)水浸束縛應(yīng)激致大鼠胃粘膜損傷的保護(hù)作用實(shí)驗(yàn)大鼠55只，禁食24h后分為5組。分組與灌胃方法同2.1。灌胃1h后，將以上5組大鼠放入特制的束縛籠內(nèi)，并浸于22的恒溫水浴中，液面保持在胸骨劍突水平。7h后取出大鼠，處死取胃，固定，損傷程度計(jì)量方法同前。實(shí)驗(yàn)結(jié)果：將大鼠水浸束縛應(yīng)激，潰瘍發(fā)生在腺胃部，呈深褐色條索狀損傷。胃舒4、2g/kg及氣滯胃痛沖劑均可顯著降低潰瘍指數(shù)。胃舒1g/kg對(duì)胃粘膜

10、損傷無(wú)明顯影響。見表3。表3胃舒顆粒對(duì)大鼠水浸束縛應(yīng)激潰瘍的影響組別n潰瘍指數(shù)抑制率/%模型對(duì)照組159.45±5.62胃舒4g/kg組101.70±1.92*82.01胃舒2g/kg組113.18±3.06*66.35胃舒1g/kg組95.39±5.6542.96氣滯胃痛5g/kg組101.00±1.20*89.42     注：與模型對(duì)照組比*P0.01 2.4胃舒顆粒對(duì)酸性乙醇大鼠胃粘膜GSH、MDA含量及GSH-Px活性的影響實(shí)驗(yàn)大鼠59只，禁食24h后分為4組。正常對(duì)照組：常水10mL/kg灌胃

11、；模型對(duì)照組：常水10mL/kg灌胃；胃舒2g/kg組、胃舒1g/kg組：分別予胃舒灌胃2、1g/kg。1h后給后3組大鼠灌胃50%乙醇0.15鹽酸，1h后處死取胃，沿胃大彎剪開，4生理鹽水清洗胃內(nèi)容物，以濾紙吸干胃粘膜表面水分，刮取腺胃部粘膜組織，立即稱重后按110加生理鹽水(4)，冰浴中勻漿，按試劑盒說(shuō)明書用比色法在722型分光光度計(jì)上測(cè)定GSH含量、GSH-Px活性及MDA含量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果：給酸性乙醇1h后，胃粘膜過(guò)氧化脂質(zhì)(LPO)的代謝產(chǎn)物MDA含量明顯高于正常對(duì)照組，GSH含量及GSH-Px活性明顯低于正常對(duì)照組。胃舒2、1g/kg組均可顯著增加GSH含量，顯著降低MDA含量；胃舒2

12、g/kg還能顯著增加GSH-Px活性。見表4。表4胃舒顆粒對(duì)酸性乙醇大鼠胃粘膜氧自由基的影響組別GSH(mg/mg)GSH-PxMDA(nmol/mg)正常對(duì)照組374.85±50.06(n=14)401.31±85.78(n=12)0.80±0.25(n=14)模型對(duì)照組254.77±41.61(n=14)244.65±91.17(n=13)1.95±0.60(n=13)胃舒2g/kg組324.19±54.50*(n=11)332.50±49.82*(n=11)0.90±0.20*(n=11)胃舒1g/

13、kg組297.65±30.71*(n=10)288.05±43.35*(n=10)1.36±0.44*(n=10)     注：與正常對(duì)照組比P0.01；與模型對(duì)照組比*P0.05*P0.01 2.5胃舒顆粒對(duì)大鼠胃液分泌及胃壁結(jié)合粘液含量的影響實(shí)驗(yàn)大鼠60只，禁食24h后分為4組。模型對(duì)照組：乙醚麻醉下結(jié)扎幽門，同時(shí)十二指腸注射常水10mL/kg；胃舒組：乙醚麻醉下結(jié)扎幽門，同時(shí)十二指腸注射胃舒2g/kg；甲氰咪胍組：乙醚麻醉下結(jié)扎幽門，同時(shí)十二指腸注射甲氰咪胍800mg/kg；氣滯胃痛沖劑組；乙醚麻醉下結(jié)扎幽門，同時(shí)十二

14、指腸注射氣滯胃痛沖劑5g/kg。5h后，處死以上4組大鼠，取胃沿小彎剪開，取胃液離心(3000r/min，10min)，記錄胃液量。滴定法測(cè)定胃液總酸度和總酸排出量；按Mett法1測(cè)定胃蛋白酶活性；阿利新蘭染色法測(cè)定胃壁結(jié)合粘液含量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果：胃舒2g/kg對(duì)胃壁結(jié)合粘液含量、胃液量、總酸度、總酸排出量、胃蛋白酶活性均無(wú)明顯影響；甲氰咪胍800mg/kg可顯著減少胃液量、總酸度和總酸排出量；氣滯胃痛沖劑5g/kg可顯著減少胃液量。見表5。表5胃舒顆粒對(duì)大鼠胃液分泌及胃壁結(jié)合粘液含量的影響組別胃液量(mL)總酸度(mmol/L)總酸排出量(mol/h)胃蛋白酶活性粘液結(jié)合量(mg)模型對(duì)照組5.

15、32±2.34(n=13)69.54±35.14(n=11)78.80±46.67(n=11)33.62±33.83(n=11)1.03±0.17(n=13)甲氰咪胍組3.16±1.09*(n=17)16.49±10.96*(n=12)11.46±9.86*(n=12)22.61±37.76(n=10)1.01±0.21(n=17)氣滯胃痛5g/kg組3.60±1.71*(n=14)52.32±26.85(n=12)52.64±32.01(n=12)46.72

16、77;45.40(n=12)1.02±0.22(n=15)胃舒2g/kg組4.35±2.49(n=15)61.14±34.74(n=14)59.99±52.39(n=14)47.61±45.59(n=15)1.05±0.16(n=15)     注：與模型對(duì)照組比*P0.05*P0.01 3討論胃舒顆粒是主治胃病日久致氣陰兩傷的調(diào)補(bǔ)之劑。本實(shí)驗(yàn)證明，胃舒對(duì)IM、酸性乙醇及水浸束縛應(yīng)激誘導(dǎo)的大鼠胃粘膜損傷具有顯著的保護(hù)作用。近年來(lái)眾多研究表明，脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)參與了胃粘膜損傷致病機(jī)制25。本研究證明

17、了鹽酸性乙醇可致胃粘膜損傷而出現(xiàn)出血、壞死，粘膜組織中LPO含量顯著高于正常對(duì)照組。胃舒能對(duì)抗酸性乙醇所致的胃粘膜損傷，粘膜組織中LPO含量顯著降低，說(shuō)明胃舒具有降低粘膜組織中脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)的作用，從而保護(hù)胃粘膜。大鼠胃粘膜富含非蛋白質(zhì)結(jié)合巰基(NPSH)，NPSH含量在大鼠胃粘膜的分布類似于人類6。眾多研究表明NPSH的減少可能是誘發(fā)胃粘膜損傷的重要原因之一711。NPSH95%以上是GSH，作為一種氧自由基清除劑，GSH的氧化還原循環(huán)是細(xì)胞抗氧化的重要途徑之一。本研究表明，酸性乙醇模型GSH消耗增加，粘膜GSH含量顯著低于正常對(duì)照組。而胃舒組GSH含量顯著高于模型組，說(shuō)明胃舒可能是通過(guò)升高胃粘膜GSH水平，清除過(guò)多的自由基而抑制脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，進(jìn)而起到胃粘膜保護(hù)作用的。GSH-Px是清除自由基的主要酶之一，它特異地催化GSH對(duì)H2O2的還原反應(yīng)，從而起到保護(hù)細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)和功能完整的作用。本實(shí)驗(yàn)證實(shí)，模型組的GSH-Px活性顯著下降，而胃舒可明顯增強(qiáng)胃粘膜GSH-Px活性。上述結(jié)果表明，胃舒對(duì)粘膜脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)的抑制效應(yīng)，可能是通過(guò)增強(qiáng)GSH-Px活性而起作用。胃酸和胃蛋白酶是胃粘膜攻擊因子之一，在一定條件下，不僅可以消化胃粘膜而且可增加其它因子對(duì)胃粘膜的損傷。胃舒對(duì)胃蛋白酶和胃酸無(wú)明顯影響，提示胃舒對(duì)胃粘膜損傷的保護(hù)作用不是通過(guò)抑制胃酸和胃蛋白酶的途徑來(lái)介導(dǎo)的