肝硬化鼠食管、胃及肝一氧化氮合酶的分布

1、    肝硬化鼠食管、胃及肝一氧化氮合酶的分布        我們應用NADPH-d組織化學染色觀察肝硬化大鼠食管下段及胃底粘膜及肝組織中NOS分布，以期探討NO在肝硬化門脈高壓性胃病及胃、食管靜脈曲張中的致病作用。材料與方法一、肝硬化模型建立參見文獻1。二、標本來源模型建立后，隨機取8只大鼠作為肝硬化組，另取同批正常SD大鼠8只作為對照組。處死動物，迅速截取食管組織、胃底組織及少許肝組織置入液氮速凍，其中食管下段、胃底組織及肝組織用于NADPH-d組化染色，余下食管及肝組織

2、用于制備勻漿待NO含量測定。另取小塊肝組織置10%甲醛液中固定，備形態(tài)學檢查。三、NADPH-d組化染色2自液氮中取出食管下段、肝及胃底組織標本，立即置入內(nèi)含4%多聚甲醛、0.4%苦味酸的0.16mol/L PBS(PH6.9)中固定4小時。然后移入內(nèi)含10%蔗糖的0.1mol/L PBS(PH7.2)中，4過夜。-20恒冷切片機連續(xù)切片68張，厚度10m。以0.01mol/L PBS漂洗切片，然后置于含下列試劑的PBS(PH8.0, 37)中孵育40min：0.3%Triton X-100, 0.5mmol/L硝基四唑氮藍，1.0mmolb-NADPH。然后將切片置于0.01mol/L PB

3、S(PH7.4)中終止反應。乙醇梯度脫水、透明及封片。四、組織勻漿中NO含量測定取0.3g新鮮食管組織，1.0g肝組織，分別制成10%的勻漿，按文獻3方法測NO含量。五、肝臟形態(tài)學檢查常規(guī)10%甲醛溶液固定，石蠟包埋切片，HE染色，光鏡下觀察肝臟形態(tài)學改變。二、統(tǒng)計學處理數(shù)據(jù)以±s表示，行配對t檢驗。P<0.05有統(tǒng)計學意義。結(jié) 果一、肝硬化大鼠造模成功，光鏡示肝細胞再生、脂肪變性、纖維組織增生及假小葉形成。二、肝硬化大鼠組織中NO含量顯著高于正常對照組(附表)。三、NADPH-d組化染色發(fā)現(xiàn)，肝硬化大鼠食管上皮及血管內(nèi)皮著色深藍，呈NOS陽性反應，正常大鼠著色淡藍或不著色，呈

4、NOS弱陽性或陰性反應。討 論研究結(jié)果顯示，肝硬化大鼠食管下段粘膜及粘膜下血管內(nèi)皮均呈NOS強陽性反應，而正常對照鼠則呈弱陽性或陰性反應，與之相對應，食管組織勻漿中NO含量亦同步升高，且顯著高于對照組(P<0.01)。提示NO在肝硬化食管靜脈曲張中可能發(fā)揮作用。Tanoue等2報道門脈高壓鼠食管粘膜、粘膜肌層cNOS及iNOS均顯著表達，且粘膜下血管內(nèi)皮NOS活性顯著高于假手術(shù)組，結(jié)果與我們基本一致。我們認為，NO因具強烈的舒張血管作用，其含量增加可能為導致食管靜脈曲張形成的機理之一，這或許也是食管靜脈曲張破裂出血的原因之一；此外，NO尚具細胞毒性，食管粘膜NOS的過度表達，使大量的NO

5、合成并釋出，從而增加了食管粘膜對損傷的易感性，這可能是食管靜脈曲張破裂的又一因素。本研究還發(fā)現(xiàn)，肝硬化大鼠胃底粘膜呈現(xiàn)NOS陽性反應，而正常SD大鼠則呈陰性反應，說明肝硬化時胃粘膜合成NO增加，而NO作為強烈的血管內(nèi)皮舒張因子無疑在胃粘膜血管擴張、血流量增加乃至充血反應中發(fā)揮病理生理學作用。我們應用57Co同位素標記微球技術(shù)對其血流動力學檢測發(fā)現(xiàn)，肝硬化大鼠胃粘膜血流量明顯高于對照組，似乎可以解釋門脈高壓性胃病，即“充血性胃病”的發(fā)病與之有關1。本實驗發(fā)現(xiàn)，肝硬化大鼠肝臟假小葉內(nèi)肝細胞呈NOS陽性反應，而正常大鼠肝細胞NOS呈陰性反應。說明肝硬變時肝細胞內(nèi)的NOS被高度激活，從而產(chǎn)生較多的NO

6、，對肝細胞的蛋白質(zhì)合成產(chǎn)生抑制作用。作者單位：200001上海第二醫(yī)科大學附屬仁濟醫(yī)院消化所（蕭樹東、張德中、莫劍忠、彭延申）；（黃穎秋，現(xiàn)在遼寧省本鋼總醫(yī)院消化科）參 考 文 獻1 黃穎秋，張德中，莫劍忠，等. 一氧化氮對肝硬化大鼠血流動力學的影響. 中華肝臟病雜志，1997, 5: 153-155.2 Tanoue K, Ohta M, Tarnawski AS, et al. Portal hypertension activates the nitric oxide synthase gene in the esophageal mucosa of rats. Gastroenterology, 1996, 110: 549-557.3 Misko TP, Schilling RJ, Salvemini D, et al. A fluorometric assay for the measurement of nitrite in biological samples. Anal biochem, 1993, 214: 11-16.附表組織中NO2-/NO3-含量(nmol/g) 例數(shù)食管肝對照組80.06±0.0117.03&