PCR實(shí)驗(yàn)檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范

1、PCR檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室操作規(guī)范一、PCR實(shí)驗(yàn)室的設(shè)置及管理1目的：建立實(shí)驗(yàn)室的合理設(shè)置和科學(xué)管理，防止實(shí)驗(yàn)污染，保證檢測(cè)結(jié)果的可靠性。 2適用范圍：本程序適用于分子診斷室的設(shè)置、工作流程和日常管理等。3負(fù)責(zé)人：4細(xì)則：4 1 流感實(shí)驗(yàn)室為急傳所的專業(yè)實(shí)驗(yàn)室，從事臨床標(biāo)本的基因擴(kuò)增檢測(cè)及相關(guān)科研工作等。4 2 本實(shí)驗(yàn)室采用實(shí)時(shí)熒光定量（定性） PCR 技術(shù)作為病毒基因診斷的主要手段，實(shí)驗(yàn)室分 為三個(gè)區(qū)：試劑準(zhǔn)備區(qū)（第一區(qū)）、標(biāo)本處理區(qū)（第二區(qū)）、擴(kuò)增分析區(qū)（第三區(qū)）。每一工 作區(qū)配備專用的設(shè)備、儀器、輔助設(shè)施、耗材、清潔用品、辦公用品、專用工作服，并有明顯 的區(qū)分標(biāo)識(shí)。標(biāo)本的接收則在檢驗(yàn)科標(biāo)本接收處進(jìn)

2、行。4 3 各工作區(qū)專用的儀器設(shè)備、辦公用品、工作服、實(shí)驗(yàn)耗材和清潔用具等，不可混用。44 各工作區(qū)配置、功能和內(nèi)務(wù)管理見各相關(guān)SOP 文件。4. 5 嚴(yán)格遵守從“試劑準(zhǔn)備區(qū)T標(biāo)本處理區(qū)T擴(kuò)增分析區(qū)”的單一流向制度，不得逆向進(jìn)入 前一工作區(qū)。4. 6 非本實(shí)驗(yàn)室工作人員，未經(jīng)許可不得入內(nèi)；進(jìn)修、實(shí)習(xí)或其他科室人員因科研活動(dòng)需 要，進(jìn)入實(shí)驗(yàn)區(qū)域（試劑準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本處理區(qū)、擴(kuò)增分析區(qū)）需首先熟悉本程序的各項(xiàng)規(guī)定并嚴(yán)格遵守執(zhí)行，在本實(shí)驗(yàn)室人員監(jiān)督指導(dǎo)下進(jìn)行。4. 7 實(shí)驗(yàn)完畢后做好清潔消毒工作。、PCR實(shí)驗(yàn)室工作制度1. 目的 ：保持良好的工作環(huán)境，以確保檢測(cè)結(jié)果的可靠性，防止交叉污染，防止差錯(cuò)、事故

3、 及糾紛的發(fā)生。2. 適用范圍：所有本實(shí)驗(yàn)室人員。3. 負(fù)責(zé)人：4.細(xì)則：4 1 本實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行臨床基因擴(kuò)增檢測(cè)及相關(guān)實(shí)驗(yàn)工作，不得進(jìn)行其它實(shí)驗(yàn)操作。4 2 各區(qū)的用品不得混用。4 3 在各區(qū)的實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程中，操作者必須戴手套和帽子，嚴(yán)格按照操作規(guī)程。44 試劑準(zhǔn)備區(qū)只能進(jìn)行試劑的貯存及配制等相關(guān)操作（見相關(guān)SOP 文件）。4 5 標(biāo)本處理區(qū)只能進(jìn)行臨床標(biāo)本的保存，核酸提取、保存及其加入至擴(kuò)增反應(yīng)管和測(cè)定 RNA 時(shí) cDNA的合成（見相關(guān) SOP 文件）。4. 6 擴(kuò)增分析區(qū)只能進(jìn)行 DNA 或 cDNA 的擴(kuò)增、實(shí)時(shí)熒光 PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物的分析（見相關(guān) 文件）。4. 7 進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí)嚴(yán)格執(zhí)行本

4、實(shí)驗(yàn)室的各項(xiàng)操作規(guī)程，及時(shí)做好各種操作記錄，力求準(zhǔn)確、可 靠。實(shí)驗(yàn)完畢，做好清潔、整理及分析統(tǒng)計(jì)等工作。4. 8 室內(nèi)儀器由專人負(fù)責(zé)，未經(jīng)許可，不得隨意使用或挪用；愛護(hù)使用儀器，定期進(jìn)行保養(yǎng) 與維修。4. 9 愛護(hù)科室財(cái)產(chǎn)，注意安全；離開實(shí)驗(yàn)室前應(yīng)關(guān)好門窗，檢查水、電等。三、PCR實(shí)驗(yàn)室內(nèi)務(wù)管理制度1. 目的：保證實(shí)驗(yàn)室日常內(nèi)務(wù)管理及清潔工作順利進(jìn)行。2. 適用范圍：實(shí)驗(yàn)室相關(guān)人員及相關(guān)清潔工人。3. 負(fù)責(zé)人：4.細(xì)則：4. 1 非本室工作人員未經(jīng)允許不得進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室。4. 2 各區(qū)的用品不得混用。4. 3 實(shí)驗(yàn)人員要有強(qiáng)烈的時(shí)間觀念，按時(shí)上下班，不遲到、早退。4. 4 進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室的工作人員必須

5、遵守實(shí)驗(yàn)室的單一流向的規(guī)定，禁止逆向走動(dòng)。4. 5 所有儀器（如 PCR 擴(kuò)增儀）須有專人負(fù)責(zé)，并有使用維護(hù)記錄；實(shí)驗(yàn)人員必須熟悉儀器 性能后方允許操作，并嚴(yán)格遵守操作規(guī)程。4. 6 所有試劑進(jìn)購(gòu)、配制、質(zhì)檢、使用均要有記錄，未經(jīng)允許不得隨意帶出本實(shí)驗(yàn)室。4. 7 每天了解儀器運(yùn)轉(zhuǎn)情況及試劑使用情況，確保儀器整潔安全，試劑合格使用。4. 8 各區(qū)的各種清潔消毒均應(yīng)有記錄，工作衣消毒時(shí)注意各區(qū)應(yīng)分開進(jìn)行處理。4. 9 注意保持實(shí)驗(yàn)室衛(wèi)生整潔，嚴(yán)禁在室內(nèi)抽煙、吃零食，非實(shí)驗(yàn)操作人員應(yīng)盡量少入。4. 10 下班前檢查門、窗、水、電，節(jié)假日應(yīng)指定人員負(fù)責(zé)檢查實(shí)驗(yàn)室的儀器、設(shè)備。SOP四、PCR實(shí)驗(yàn)室人

6、員的配置及管理1目的：保證實(shí)驗(yàn)室有足夠數(shù)量的合格的具備開展該類實(shí)驗(yàn)?zāi)芰Φ膶?shí)驗(yàn)人員。2適用范圍：適用于實(shí)驗(yàn)室人員配置、管理、培訓(xùn)及考核。3負(fù)責(zé)人：4細(xì)則：4 1 人員要求41 1 本實(shí)驗(yàn)室工作人員應(yīng)為醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)專業(yè)或相關(guān)專業(yè)畢業(yè)，具有中級(jí)以上技術(shù)職稱或?qū)？?以上學(xué)歷。412 實(shí)驗(yàn)室工作人員應(yīng)參加衛(wèi)生部或省臨檢中心舉辦的PCR 技術(shù)培訓(xùn)，并取得合格證。41 3 對(duì)于新進(jìn)入本室的人員，如尚未取得PCR 技術(shù)培訓(xùn)合格證，應(yīng)在實(shí)驗(yàn)室有培訓(xùn)合格證的上級(jí)技術(shù)人員的指導(dǎo)下進(jìn)行實(shí)驗(yàn)工作，實(shí)驗(yàn)報(bào)告由有資格人員出具，并應(yīng)在最短的時(shí)間內(nèi) 取得上崗培訓(xùn)合格證。4 2 人員配置42 1 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)根據(jù)工作需要配備足夠的工作人

7、員。42 2 各級(jí)技術(shù)人員履行相應(yīng)的工作職責(zé)。4 3 人員培訓(xùn)及考核43 1 實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人或負(fù)責(zé)人指定人員參加每年衛(wèi)生部PCR 室間質(zhì)評(píng)總結(jié)會(huì)。4. 3. 2 實(shí)驗(yàn)室工作人員每 12 年至少參加 1 次 PCR 技術(shù)的省級(jí)或國(guó)家級(jí)繼續(xù)教育項(xiàng)目， 參加相關(guān)學(xué)術(shù)交流會(huì)議。433 安排未取得上崗培訓(xùn)合格證的工作人員在合適的時(shí)間內(nèi)參加技術(shù)培訓(xùn)。434 科室不定期組織實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部實(shí)驗(yàn)人員學(xué)習(xí)、更新核酸擴(kuò)增方面的相關(guān)知識(shí)，提升自身 的理論學(xué)習(xí)水平。特別是在標(biāo)本接收區(qū)采血、接收標(biāo)本的人員，需定期對(duì)其進(jìn)行有關(guān)核酸擴(kuò)增 技術(shù)，標(biāo)本采集、保存、運(yùn)輸?shù)戎R(shí)的培訓(xùn)。一些科室的送檢標(biāo)本由該科室的人員送到標(biāo)本接 收區(qū)，對(duì)這

8、些臨床醫(yī)護(hù)人員也要定期進(jìn)行有關(guān)核酸擴(kuò)增技術(shù)，標(biāo)本采集、保存、運(yùn)輸?shù)戎R(shí)的 培訓(xùn)。435 本實(shí)驗(yàn)室工作人員每年進(jìn)行考核一次,考核內(nèi)容:a) 日常工作質(zhì)量b) 室內(nèi)質(zhì)控測(cè)評(píng)c) 室間質(zhì)控測(cè)評(píng)d) 在抱怨處理中的表現(xiàn)436 本實(shí)驗(yàn)室工作人員實(shí)行嚴(yán)格獎(jiǎng)懲制度, 有下列表現(xiàn)者可受獎(jiǎng) :a) 工作質(zhì)量高 , 質(zhì)控測(cè)評(píng)成績(jī)優(yōu)秀者b) 有科研能力 , 并有一定數(shù)量和質(zhì)量的論文發(fā)表c) 有獨(dú)創(chuàng)性工作成果,經(jīng)鑒定認(rèn)可者d) 受到有關(guān)部門或群眾嘉獎(jiǎng)?wù)?有下列情況者將受到懲處 :a) 工作質(zhì)量問(wèn)題較多，質(zhì)控測(cè)評(píng)成績(jī)不合格；b) 不遵守規(guī)章制度并造成一定影響；c) 不求上進(jìn)。43 7 本實(shí)驗(yàn)室工作人員獎(jiǎng)懲方法分精神及物

9、質(zhì)兩類, 經(jīng)實(shí)驗(yàn)室上報(bào)及有關(guān)部門批準(zhǔn)后執(zhí)行。43 8 本實(shí)驗(yàn)室工作人員均建立業(yè)績(jī)檔案, 實(shí)行能進(jìn)能出制度 , 不斷吸收高質(zhì)量人員 , 加強(qiáng)培訓(xùn)和提高 , 對(duì)于不適合本室工作的人員要及時(shí)調(diào)離。4 4 人員管理44 1 實(shí)驗(yàn)室建立所有工作人員的技術(shù)檔案，包括：學(xué)歷、任職資格、發(fā)表論文、研究成 果、培訓(xùn)等相關(guān)材料復(fù)印件。44 2 技術(shù)檔案分文本檔案和電子檔案，文本檔案每年更新1 次，電子檔案隨時(shí)更新。五、PCR實(shí)驗(yàn)室清潔程序1目的：保證實(shí)驗(yàn)室環(huán)境的整潔，防止污染。2適用范圍：適于實(shí)驗(yàn)室工作環(huán)境、實(shí)驗(yàn)臺(tái)面、工作服、移液器等的清潔消毒工作。 3負(fù)責(zé)人：操作人：4細(xì)則：4 1 實(shí)驗(yàn)室地面必須平整、干凈，通

10、道要利于通行，沒(méi)有無(wú)用的物品阻礙。4 2 合理規(guī)劃實(shí)驗(yàn)室內(nèi)物品，做到擺放整齊、有序，無(wú)用的或使用效率低的物品放置到儲(chǔ)存 處，常用的物品要容易尋找到。4 3 抽屜、柜子、文件類物品要作好標(biāo)記，以方便識(shí)別。4 4 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后用 2%戊二醛對(duì)臺(tái)面進(jìn)行清潔，并用移動(dòng)紫外燈進(jìn)行消毒。4 5 每天對(duì)使用過(guò)的移液器用 75%酒精進(jìn)行擦拭。每周 1 次對(duì)移液器咀進(jìn)行 75%酒精浸泡 15 分鐘左右，若使用過(guò)程中發(fā)生污染應(yīng)隨時(shí)浸泡處理。4 6 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中如發(fā)生標(biāo)本或試劑外濺，應(yīng)立即用2%戊二醛滴上，濾紙蓋上半小時(shí)，然后用酒精擦洗，并用移動(dòng)紫外燈消毒。4 7 每天實(shí)驗(yàn)前開啟各區(qū)的通風(fēng)系統(tǒng)，各區(qū)實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，分別打開

11、傳遞窗紫外燈、移動(dòng)紫外燈（對(duì)實(shí)驗(yàn)臺(tái)面消毒）、天花板紫外燈消毒實(shí)驗(yàn)室，每次開啟3060 分鐘。4 8 待紫外燈消毒時(shí)間足夠后，依次關(guān)閉各區(qū)紫外燈并記錄。49 依次清潔三個(gè)區(qū)的實(shí)驗(yàn)臺(tái)面和地面，各區(qū)清潔消毒工具均專用，不可混用，注意按照單 一方向流程的原則來(lái)進(jìn)行清潔。4 10 處理好各區(qū)廢棄物。4 11 每周將工作服洗滌消毒，不同實(shí)驗(yàn)區(qū)的工作服隔開洗滌。六、PCR標(biāo)本唯一標(biāo)識(shí)編號(hào)規(guī)則1目的：保證標(biāo)本編號(hào)的唯一性，也是準(zhǔn)確發(fā)放報(bào)告的基礎(chǔ)。 2適用范圍：使用核酸擴(kuò)增熒光檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室所開展的病毒以及基因檢測(cè)項(xiàng)目：3負(fù)責(zé)人： 操作人：4程序：4 1 按檢測(cè)日期分類標(biāo)記 根據(jù)標(biāo)本送檢的日期，每天的標(biāo)本對(duì)應(yīng)標(biāo)記一

12、種唯一的代號(hào)。4 2 按檢測(cè)類型分類標(biāo)記 根據(jù)檢測(cè)項(xiàng)目的不同，每種檢測(cè)項(xiàng)目對(duì)應(yīng)標(biāo)記一種唯一的代號(hào)。4 3 按驗(yàn)單接收順序編號(hào) 在同種檢測(cè)類型的驗(yàn)單中，按驗(yàn)單順序編號(hào)。4 4 特殊標(biāo)本的編號(hào) 如有特殊情況，應(yīng)在標(biāo)記前面增加特異字母區(qū)別開。4 5 編號(hào)步驟a）對(duì)當(dāng)天送來(lái)的標(biāo)本，根據(jù)編號(hào)的基本原則編號(hào)，每個(gè)樣本的每個(gè)檢測(cè)項(xiàng)目對(duì)應(yīng)一個(gè)唯一的 編號(hào)。b） 用筆在每張檢驗(yàn)申請(qǐng)單和對(duì)應(yīng)的樣品管上作好相同的標(biāo)記。c） 做好標(biāo)本的接收記錄，每個(gè)樣本的記錄都應(yīng)包括以下信息：接收時(shí)間、醫(yī)院、科室、送檢 醫(yī)生、患者姓名、性別、年齡、標(biāo)本類別、標(biāo)本狀態(tài)、送標(biāo)本者、接收人、檢驗(yàn)單號(hào)、標(biāo)本唯 一統(tǒng)編號(hào)等。d）處理好樣品、點(diǎn)

13、樣后，將反應(yīng)管放入擴(kuò)增儀上開始擴(kuò)增。f ）擴(kuò)增得到結(jié)果后，先在統(tǒng)計(jì)簿上填入結(jié)果，作好記錄，再一一把實(shí)驗(yàn)結(jié)果填入相應(yīng)申請(qǐng)單。g）發(fā)放檢驗(yàn)報(bào)告單。七、PCR基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室的要求1目的：規(guī)定在各區(qū)內(nèi)所進(jìn)行的工作及其操作。 2適用范圍：所有在本區(qū)內(nèi)進(jìn)行的工作。3負(fù)責(zé)人： 操作人：4程序：一、臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的設(shè)計(jì)（一）臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室區(qū)域設(shè)計(jì)原則。原則上臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)當(dāng) 設(shè)置以下區(qū)域：試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)、擴(kuò)增區(qū)、擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)。這4 個(gè)區(qū)域在物理空間上必須是完全相互獨(dú)立的，各區(qū)域無(wú)論是在空間上還是在使用中，應(yīng)當(dāng)始終處于完全的 分隔狀態(tài)，不能有空氣的直接相通。根據(jù)使用儀器

14、的功能，區(qū)域可適當(dāng)合并。例如使用實(shí)時(shí)熒 光 PCR 儀，擴(kuò)增區(qū)、擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)可合并；采用樣本處理、核酸提取及擴(kuò)增檢測(cè)為一體的自 動(dòng)化分析儀，則標(biāo)本制備區(qū)、擴(kuò)增區(qū)、擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)可合并。各區(qū)的功能是：1. 試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)：貯存試劑的制備、試劑的分裝和擴(kuò)增反應(yīng)混合液的準(zhǔn)備，以及 離心管、吸頭等消耗品的貯存和準(zhǔn)備。2. 標(biāo)本制備區(qū)：核酸（RNA DNA 提取、貯存及其加入至擴(kuò)增反應(yīng)管。對(duì)于涉及臨床樣本的操作，應(yīng)符合生物安全二級(jí)實(shí)驗(yàn)室防護(hù)設(shè)備、個(gè)人防護(hù)和操作規(guī)范的要求。3. 擴(kuò)增區(qū)：cDNA 合成、DNAT增及檢測(cè)。4. 擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)：擴(kuò)增片段的進(jìn)一步分析測(cè)定，如雜交、酶切電泳、變性高效液相 分

15、析、測(cè)序等。(二)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的空氣流向。臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的空氣流向可 按照試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)T標(biāo)本制備區(qū)T擴(kuò)增區(qū)T擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)進(jìn)行，防止擴(kuò)增產(chǎn)物順空氣氣 流進(jìn)入擴(kuò)增前的區(qū)域。可按照從試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)T標(biāo)本制備區(qū)T擴(kuò)增區(qū)T擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)方 向空氣壓力遞減的方式進(jìn)行?？赏ㄟ^(guò)安裝排風(fēng)扇、負(fù)壓排風(fēng)裝置或其他可行的方式實(shí)現(xiàn)。(三)工作區(qū)域儀器設(shè)備配置標(biāo)準(zhǔn)。1. 試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)。(1) 28C和-20C以下冰箱。( 2)混勻器。(3)微量加樣器(覆蓋 0.2- 1000 卩 I )。( 4)可移動(dòng)紫外燈(近工作臺(tái)面)。( 5)消耗品：一次性手套、耐高壓處理的離心管和加樣器吸頭。(6)專

16、用工作服和工作鞋 (套) 。( 7)專用辦公用品。2. 標(biāo)本制備區(qū)。(1) 2-8C冰箱、-20C或-80C冰箱。( 2)高速離心機(jī)。( 3)混勻器。( 4)水浴箱或加熱模塊。(5)微量加樣器(覆蓋 0.2- 1000 卩 I )。( 6)可移動(dòng)紫外燈(近工作臺(tái)面)。( 7)生物安全柜。( 8)消耗品：一次性手套、耐高壓處理的離心管和加樣器吸頭(帶濾芯)。(9)專用工作服和工作鞋 (套) 。( 10)專用辦公用品。(11)如需處理大分子 DNA 應(yīng)當(dāng)具有超聲波水浴儀。3. 擴(kuò)增區(qū)。( 1 )核酸擴(kuò)增儀。(2) 微量加樣器(覆蓋 0.2- 1000 卩 I ),(視情況定)。( 3)可移動(dòng)紫外燈

17、(近工作臺(tái)面)。( 4)消耗品：一次性手套、耐高壓處理的離心管和加樣器吸頭(帶濾芯)。（5）專用工作服和工作鞋。（6）專用辦公用品。4. 擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)。視檢驗(yàn)方法不同而定，基本配置如下：（1）微量加樣器（覆蓋 0.2- 1000 卩 I ）。（ 2）可移動(dòng)紫外燈（近工作臺(tái)面）。（ 3）消耗品：一次性手套、加樣器吸頭（帶濾芯）。（ 4）專用工作服和工作鞋。（ 5）專用辦公用品。上述各區(qū)域儀器設(shè)備配備為基本配備，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)當(dāng)根據(jù)自己使用的擴(kuò)增檢測(cè)技術(shù)或試 劑的特點(diǎn)，對(duì)儀器設(shè)備進(jìn)行必要的增減。二、臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室工作基本原則（一）進(jìn)入各工作區(qū)域應(yīng)當(dāng)嚴(yán)格按照單一方向進(jìn)行，即試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)T標(biāo)本

18、制備區(qū)T擴(kuò)增區(qū)T擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)。（ 二）各工作區(qū)域必須有明確的標(biāo)記，不同工作區(qū)域內(nèi)的設(shè)備、物品不得混用。（ 三） 不同的工作區(qū)域使用不同的工作服（例如不同的顏色）。工作人員離開各工作區(qū) 域時(shí)，不得將工作服帶出。（四）實(shí)驗(yàn)室的清潔應(yīng)當(dāng)按試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)T標(biāo)本制備區(qū)T擴(kuò)增區(qū)T擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū) 的方向進(jìn)行。不同的實(shí)驗(yàn)區(qū)域應(yīng)當(dāng)有其各自的清潔用具以防止交叉污染。（ 五）工作結(jié)束后，必須立即對(duì)工作區(qū)進(jìn)行清潔。工作區(qū)的實(shí)驗(yàn)臺(tái)表面應(yīng)當(dāng)可耐受諸如 次氯酸鈉的化學(xué)物質(zhì)的消毒清潔作用。實(shí)驗(yàn)臺(tái)表面的紫外照射應(yīng)當(dāng)方便有效。由于紫外照射的 距離和能量對(duì)去污染的效果非常關(guān)鍵，因此可使用可移動(dòng)紫外燈（254nm 波長(zhǎng)），在工作

19、完成后調(diào)至實(shí)驗(yàn)臺(tái)上 6090cm 內(nèi)照射。由于擴(kuò)增產(chǎn)物僅幾百或幾十堿基對(duì)（bp），對(duì)紫外線損傷不敏感，因此紫外照射擴(kuò)增片段必須延長(zhǎng)照射時(shí)間，最好是照射過(guò)夜。（ 六）實(shí)驗(yàn)室的安全工作制度或安全標(biāo)準(zhǔn)操作程序，所有操作符合實(shí)驗(yàn)室生物安全通 用要求（ GB19489-2008）。三、臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室各區(qū)域工作注意事項(xiàng)（ 一 ） 試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)。貯存試劑和用于標(biāo)本制備的消耗品等材料應(yīng)當(dāng)直接運(yùn)送至試 劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)，不能經(jīng)過(guò)擴(kuò)增檢測(cè)區(qū)，試劑盒中的陽(yáng)性對(duì)照品及質(zhì)控品不應(yīng)當(dāng)保存在該區(qū)， 應(yīng)當(dāng)保存在標(biāo)本處理區(qū)。（ 二 ） 標(biāo)本制備區(qū)。由于在樣本混合、核酸純化過(guò)程中可能會(huì)發(fā)生氣溶膠所致的污染， 可通過(guò)在本

20、區(qū)內(nèi)設(shè)立正壓條件，避免從鄰近區(qū)進(jìn)入本區(qū)的氣溶膠污染。為避免樣本間的交叉污 染，加入待測(cè)核酸后，必須蓋好含反應(yīng)混合液的反應(yīng)管。對(duì)具有潛在傳染危險(xiǎn)性的材料，必須 在生物安全柜內(nèi)開蓋，并有明確的樣本處理和滅活程序。（ 三 ） 擴(kuò)增區(qū)。為避免氣溶膠所致的污染，應(yīng)當(dāng)盡量減少在本區(qū)內(nèi)的走動(dòng)。必須注意的 是，所有經(jīng)過(guò)檢測(cè)的反應(yīng)管不得在此區(qū)域打開。（四） 擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)。核酸擴(kuò)增后產(chǎn)物的分析方法多種多樣，如膜上或微孔板或芯片上探 針雜交方法（放射性核素標(biāo)記或非放射性核素標(biāo)記）、直接或酶切后瓊脂糖凝膠電泳、聚丙烯 酰胺凝膠電泳、Southern 轉(zhuǎn)移、核酸測(cè)序方法、質(zhì)譜分析等。本區(qū)是最主要的擴(kuò)增產(chǎn)物污染 來(lái)源，

21、因此必須注意避免通過(guò)本區(qū)的物品及工作服將擴(kuò)增產(chǎn)物帶出。在使用PCR-ELISA 方法檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物時(shí)，必須使用洗板機(jī)洗板，廢液必須收集至1 mol/L HCl 中，并且不能在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)傾倒，而應(yīng)當(dāng)至遠(yuǎn)離 PCR 實(shí)驗(yàn)室的地方棄掉。用過(guò)的吸頭也必須放至1 mol/L HCI 中浸泡后再放到垃圾袋中按程序處理，如焚燒。由于本區(qū)有可能會(huì)用到某些可致基因突變和有毒物質(zhì)如溴化乙錠、丙烯酰胺、甲醛或放 射性核素等，故應(yīng)當(dāng)注意實(shí)驗(yàn)人員的安全防護(hù)。八、PCR廢棄物的處理程序1目的：保證實(shí)驗(yàn)室、實(shí)驗(yàn)人員和外部環(huán)境的安全。2.適用范圍：核酸擴(kuò)增熒光檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室常用化學(xué)試劑（NaOH EDTA 乙醇、生理鹽水等）、 實(shí)驗(yàn)

22、室廢棄物的處理；3.負(fù)責(zé)人：操作人：4.細(xì)則：4.1科室職責(zé)應(yīng)對(duì)本室工作人員講明本程序在預(yù)防交叉、實(shí)驗(yàn)室污染及切斷傳播途徑中的重 要性，并要求嚴(yán)格執(zhí)行。4.2實(shí)驗(yàn)室所有垃圾，裝入專用污物袋內(nèi)，各區(qū)備有：生活垃圾袋（黑色）及生物污染垃圾 袋（黃色）。使用過(guò)的一次性消耗品 （ 如試管、吸頭、離心管、等 ） ，先放入 10%次氯酸鈉溶 液中浸泡 24 小時(shí)后，再放入黃色垃圾袋內(nèi)，使用過(guò)的手套、鞋套等直接放入黃色垃圾袋 內(nèi)集中處理。4.3夾取標(biāo)本的工具，如鉗、鑷、接種環(huán)、吸管等，用后均應(yīng)消毒清潔，進(jìn)行微生物檢驗(yàn)時(shí)，應(yīng)重新滅菌，金屬工具可燒灼滅菌或消毒液浸泡；玻璃制品干熱或壓力蒸汽滅菌。4.4一次性塑料

23、痰盂，用 2%戊二醛液浸泡 24 小時(shí)后，放入黃色垃圾袋內(nèi)集中處理。4.5廢棄標(biāo)本如血、尿、胸水、腹水、腦脊液、唾液、胃液、腸液、關(guān)節(jié)腔液等用10%的 84液浸泡 24 小時(shí)后，集中處理。4.6盛標(biāo)本的容器，若為一次性使用的紙質(zhì)容器及其外面包被的廢紙，放入污物袋里 處理；對(duì)可再次使用的玻璃、塑料或搪瓷容器，煮沸 15 分鐘或加入 10%次氯酸鈉溶液浸泡 2 4 小時(shí)，消毒液每日更換，消毒后用洗滌劑及流水刷洗，瀝干，用于微生物培養(yǎng)采樣者， 用壓力蒸汽滅菌后備用。4.7廢棄標(biāo)本及其容器裝入黃色垃圾袋內(nèi)、封閉，污物處理中心處理。九、基因擴(kuò)增檢測(cè)實(shí)驗(yàn)及結(jié)果分析1、目的：保證擴(kuò)增及結(jié)果分析的標(biāo)準(zhǔn)化、規(guī)范

24、化。2適用范圍： 適用于本室使用的普通離心機(jī)。3負(fù)責(zé)人：操作人：4、標(biāo)準(zhǔn)程序：4.2.8 發(fā)放報(bào)告：及時(shí)登記檢測(cè)結(jié)果記錄，發(fā)放臨床報(bào)告。4.3實(shí)驗(yàn)結(jié)果無(wú)效的判斷標(biāo)準(zhǔn)： 出現(xiàn)下述四種情況中的任何一種或多種， 當(dāng)次實(shí)驗(yàn)結(jié)果不可 發(fā)， 查找原因，重做實(shí)驗(yàn)。4.3.1陰性對(duì)照出現(xiàn)擴(kuò)增。4.3.2陽(yáng)性對(duì)照無(wú)擴(kuò)增。4.3.3大批甚至所有的標(biāo)本都擴(kuò)增了。4.3.4室內(nèi)質(zhì)控血清檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)失控情況，實(shí)驗(yàn)失控的具體標(biāo)準(zhǔn)詳見室內(nèi)質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)操作程 序。4.4實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效的判斷標(biāo)準(zhǔn)：達(dá)到下列要求后，當(dāng)次實(shí)驗(yàn)有效，可以發(fā)放結(jié)果。4.4.1 陰性對(duì)照沒(méi)有擴(kuò)增，陽(yáng)性對(duì)照擴(kuò)增。4.4.2陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)品梯度曲線平滑均勻，斜率、截距和

25、相關(guān)系數(shù)三個(gè)參數(shù)的數(shù)值均在范圍內(nèi)。4.4.3室內(nèi)質(zhì)控血清檢測(cè)結(jié)果處于在控狀態(tài)，具體標(biāo)準(zhǔn)詳見十、臨床標(biāo)本的保存操作程序1目的：臨床標(biāo)本正確保存，以便必要時(shí)復(fù)查。2適用范圍：分子診斷室的所有臨床檢測(cè)標(biāo)本。3負(fù)責(zé)人：操作人：4程序：4 1 處理前的標(biāo)本保存a）全血標(biāo)本可 4C下短期（24h 內(nèi)）保存，長(zhǎng)期保存則需分離出血清（血漿），保存于 -20C下。b） 咽拭子、痰或胸腹水、腦脊液、膿液標(biāo)本短保存于-70C下。42 報(bào)告發(fā)出后的標(biāo)本保存：a） 提取的核酸標(biāo)本當(dāng)天檢測(cè)可置 4C保存，如當(dāng)天不檢測(cè)應(yīng)置 -20C保存。報(bào)告發(fā)出后第二 天丟棄。b） 原始血清/血漿樣本在報(bào)告發(fā)出后放入低溫冰箱-20C保存

26、1 個(gè)星期，以備復(fù)查。超過(guò) 1 個(gè)星期保存期的標(biāo)本由室負(fù)責(zé)人酌情處理，一般按生物傳染性物品統(tǒng)一處理。c）血清/血漿標(biāo)本放置低溫冰箱保存時(shí)須有記錄，按編號(hào)順序存放，并由專人負(fù)責(zé)管理。43 特殊標(biāo)本的處理： 對(duì)暫不檢測(cè)的項(xiàng)目和規(guī)定時(shí)間外收到的零散樣本，要隨時(shí)登記和交班，以免漏檢，遺失和延誤 檢驗(yàn)。對(duì)特殊樣本或特殊病人的樣本，實(shí)行“首接”負(fù)責(zé)制，所謂特殊樣本是指難于采集的樣本，以及特殊病人的樣本一律實(shí)行“首接”負(fù)責(zé)制，無(wú)論那位工作人員，一旦收到樣本后，均 須負(fù)其責(zé)任，不得以任何借口推托，及時(shí)和正確保管和轉(zhuǎn)送樣本到有關(guān)實(shí)驗(yàn)室或有關(guān)人員，同 時(shí)作交班記錄和雙簽名。十一、臨床標(biāo)本的采集、運(yùn)送、接收程序1

27、目的：規(guī)范臨床待檢標(biāo)本的正確采集、送檢和處理。2適用范圍：分子診斷室的所有臨床檢測(cè)標(biāo)本。3負(fù)責(zé)人： 操作人：4程序：4 1 標(biāo)本的采集41 1 標(biāo)本由臨床各科室接受過(guò)臨床基因擴(kuò)增檢測(cè)有關(guān)標(biāo)本采集、保存、運(yùn)輸知識(shí)培訓(xùn)的醫(yī) 護(hù)人員采集并送至實(shí)驗(yàn)室。41 2 標(biāo)本采集要求a）血液標(biāo)本：用 2ml 真空采集管或 1.5ml 高壓滅菌離心管采集血液標(biāo)本，血標(biāo)本采集后在 2 小時(shí)內(nèi)送達(dá)實(shí)驗(yàn)室。離心（檢驗(yàn)單與標(biāo)本一道）后用一次性吸管吸取血清或血漿加入經(jīng)消毒的1.5ml 的離心管中，編號(hào)。b）痰標(biāo)本：用帶蓋的無(wú)菌一次性塑料瓶收集清晨第一口痰標(biāo)本送檢。（對(duì)于無(wú)痰或少痰的患者，可用 45C加溫的 100g/L N

28、aCl 水溶液霧化吸入或改變體位以使痰液易于咳出；對(duì)于小兒 可以輕壓胸骨柄上方以誘導(dǎo)咳痰，用消毒棉拭子刺激喉部引起咳嗽反射，用棉拭子采集標(biāo) 本。）標(biāo)本在室溫下保存不能超過(guò) 24 小時(shí)。42 標(biāo)本的運(yùn)送 標(biāo)本采集后，密閉、標(biāo)（貼）姓名，應(yīng)盡可能快的送至檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室，如運(yùn)送時(shí)間需2小時(shí)以上，必須用冰盒送至實(shí)驗(yàn)室。4 5 接收451 嚴(yán)格對(duì)各類樣本的查對(duì)和雙簽制度，對(duì)病房各樣本及時(shí)進(jìn)行驗(yàn)收，查對(duì)，不符合要求 的樣本一律退回，并有書面記錄。十二、PCR生物安全防護(hù)措施1 目的：預(yù)防工作人員在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中被感染或污染。2適用范圍：適用于本室所有工作人員。3負(fù)責(zé)人：操作人：4細(xì)則：41 實(shí)驗(yàn)人員在實(shí)施生物防護(hù)

29、措施時(shí)，應(yīng)嚴(yán)格遵守各項(xiàng)相應(yīng)的規(guī)章制度，建立起強(qiáng)烈的生物 防護(hù)意識(shí)。42 每天更換廢液缸的 2%戊二醛溶液，并保證 2%戊二醛溶液用量為廢液缸內(nèi)總液量的五分之 一左右。配置消毒液時(shí)，正確量取足量的消毒劑（用量杯，保證濃度），水的用量也要正確，缸體密封 性良好。4 3 實(shí)驗(yàn)臺(tái)面日常清潔時(shí)使用 75%的酒精擦拭。4. 4 每區(qū)每次實(shí)驗(yàn)后紫外燈照射 3060 分鐘，如有需要可延長(zhǎng)照射時(shí)間。4 5 所有來(lái)自病人的血液或體液標(biāo)本均應(yīng)視作傳染源，因此在標(biāo)本的采集、運(yùn)輸過(guò)程中，標(biāo) 本容器應(yīng)完好無(wú)泄漏。4. 6 處理標(biāo)本時(shí)應(yīng)穿工作服、戴手套，以免沾上皮膚。如手或其它部位的皮膚沾上血液或體 液標(biāo)本以及試劑，應(yīng)立即

30、沖洗干凈。有下列情況之一者，需另外消毒：手接觸有傳染性的微生 物，水龍頭、水池肥皂可能被污染，工作服可能被大量細(xì)菌污染。消毒劑可用“84”消毒液。4. 7 在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，病人標(biāo)本（血液、體液）或試劑不慎濺入眼內(nèi)應(yīng)立即用清水洗。4. 8 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中在使用針具等銳器時(shí)，盡量小心防止受傷。若被銳器刺破時(shí)，應(yīng)立即脫下手 套，盡量擠壓傷處，使血流出，然后用碘酒、酒精消毒，必要時(shí)進(jìn)行預(yù)防補(bǔ)救措施。4. 9 在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中病人標(biāo)本（血液、體液）外漏時(shí)，應(yīng)立即用2%戊二醛滴上，濾紙或紗布蓋上半小時(shí)，然后用酒精擦洗，并用紫外燈消毒。4. 10 實(shí)驗(yàn)完畢離開時(shí)，應(yīng)脫下所有該實(shí)驗(yàn)區(qū)個(gè)人防護(hù)裝備。4. 11 實(shí)驗(yàn)完畢后

31、應(yīng)對(duì)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行紫外消毒。4. 12 遇有意外事故應(yīng)立即報(bào)告科室負(fù)責(zé)人，當(dāng)事人應(yīng)立即注射相關(guān)疫苗或進(jìn)行預(yù)防性治療， 并進(jìn)行醫(yī)學(xué)觀察，嚴(yán)重者應(yīng)報(bào)告技術(shù)負(fù)責(zé)人。十三、PCR實(shí)驗(yàn)室化學(xué)試劑配制程序1. 目的：保證實(shí)驗(yàn)中用到的各種溶液符合實(shí)驗(yàn)要求。2.適用范圍：核酸擴(kuò)增熒光檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室常用溶液：4%NaOH 溶液、75%酉精、消毒劑（三氯異氰尿酸或 二氯異氰尿酸鈉）、2%戊二醛溶液等。3.負(fù)責(zé)人：操作人：4. 程序：4. 4 化學(xué)試劑的配制：4. 4. 1 用具：干燥潔凈的 250ml 量桶一只， 1000ml 量桶一只， 1000ml 燒杯一只，三角燒 瓶?jī)芍?，天平一架?100ml 塑料試劑瓶、 20

32、00ml 廣口瓶各一只。4. 4. 2 配制步驟：4. 4. 2. 1 配制 4%NaOH 溶液：a）用天平稱取 4 克分析純的 NaOH 固體，置于一只三角燒瓶中。b）用 250ml 量桶準(zhǔn)確取 100ml 水，緩緩注入盛放 NaOH 固體的三角燒瓶中。c）搖蕩三角燒瓶使 NaOH 固體充分溶解。d）然后緩緩傾倒入 100ml 塑料試劑瓶中密封保存?zhèn)溆谩?4 2 2 配制消毒劑 :a） 般桌面、器具和地面的消毒只要使有效氯達(dá)到500mg/L,即可達(dá)到消毒作用。b） 消毒劑為粉狀（20 克/袋），如配制一升的消毒劑溶液，則取500g，倒入燒杯中，緩緩加 入1000ml 水充分溶解，備用。c）如

33、需加大消毒力度，則有效氯濃度加大。44 2 3 配制 2%戊二醛溶液 :a）準(zhǔn)確量取戊二醛原液 20ml 倒入 1000ml 燒杯中。b） 量取 980ml 水，緩緩倒入 1000ml 燒杯中，混勻，加至 2000ml 廣口瓶中備用。注意事 項(xiàng)：每份配制好的溶液保質(zhì)期為 14 天十四、PCR應(yīng)急處理程序1目的：在實(shí)際工作中，儀器設(shè)備發(fā)生故障、試劑盒發(fā)生質(zhì)量問(wèn)題時(shí)，為保證檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn) 確性、及時(shí)，應(yīng)正確采取應(yīng)急措施，最大程度上避免或減輕不利影響。2適用范圍：適用于滿足核酸擴(kuò)增熒光檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)需要并可能對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果造成誤差的儀器設(shè)備和試劑盒。3負(fù)責(zé)人：4細(xì)則：41 核酸擴(kuò)增熒光檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室工作人員在

34、職責(zé)范圍內(nèi)均有責(zé)任熟悉各種儀器和相關(guān)設(shè)備的性 能、要求、維護(hù)和保養(yǎng)、常見故障的排除、尤其要嚴(yán)格按照操作規(guī)程操作。4 2 工作人員在職責(zé)范圍內(nèi)均有責(zé)任有意識(shí)地注意以求及時(shí)發(fā)現(xiàn)并報(bào)告儀器設(shè)備和試劑盒的 異常情況。43 作為應(yīng)急處理，潛在著一定的可能影響檢測(cè)質(zhì)量的不確定因素。室負(fù)責(zé)人負(fù)責(zé)在第一時(shí) 間檢查核實(shí)應(yīng)急措施的有效性。4 4 儀器設(shè)備故障44 1 室負(fù)責(zé)人接到異常情況報(bào)警后，立即現(xiàn)場(chǎng)確認(rèn)異常情況的性質(zhì)：觀察有誤、誤操作、 偶發(fā)現(xiàn)象或確屬不能立即排除的故障。44 2 用紅牌故障標(biāo)志標(biāo)示故障儀器，以防被錯(cuò)誤使用。44 3 有滿足要求的替用設(shè)備的，啟用替用設(shè)備（準(zhǔn)用儀器）。借用其他部門儀器設(shè)備時(shí)，

35、及時(shí)聯(lián)系借用并核實(shí)該設(shè)備的使用狀態(tài)。替用、借用或備用設(shè)備的使用在滿足質(zhì)量要求的同 時(shí)，必須同時(shí)滿足實(shí)驗(yàn)室管理措施（特別是防污染）的要求。44 4 不能解決的問(wèn)題，應(yīng)及時(shí)與供應(yīng)方會(huì)同解決。根據(jù)雙方合同約定，及時(shí)通知供應(yīng)方。 供應(yīng)方技術(shù)支持人員將在規(guī)定的時(shí)間內(nèi)隨身攜帶備用設(shè)備到達(dá)現(xiàn)場(chǎng)。44 5 儀器維修后，必須經(jīng)驗(yàn)收合格并供需雙方簽字，調(diào)試實(shí)驗(yàn)通過(guò)后才能重新啟用。取下 紅色故障標(biāo)示（暫停使用），換上藍(lán)色正常標(biāo)示（正常使用）。44 6 科室主任須檢查并隨時(shí)跟蹤所采取措施的有效性。44 7 對(duì)未能及時(shí)排除故障時(shí)，必須及時(shí)上報(bào)科室，在科主任批準(zhǔn)下，應(yīng)積極聯(lián)系附近的其 他已得到衛(wèi)生部臨檢中心認(rèn)證的臨床基因

36、擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)，以滿足病人和臨床或科研需 求。4 5 試劑盒質(zhì)量發(fā)生問(wèn)題，經(jīng)核實(shí)后，及時(shí)通知供貨商迅速更換另一批次試劑，使用前需先 作質(zhì)量檢測(cè)，合格后方可使用。4 6 儀器設(shè)備故障或試劑質(zhì)量問(wèn)題不能得到解決，預(yù)期將會(huì)影響到檢測(cè)報(bào)告的及時(shí)發(fā)出，可 將標(biāo)本送至其它已得到衛(wèi)生部臨檢中心認(rèn)證的臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室檢。4 7 影響到檢測(cè)報(bào)告發(fā)出的情況，應(yīng)在應(yīng)急處理記錄表作記錄。十五、試劑的質(zhì)檢標(biāo)準(zhǔn)操作程序1目的：保證每批用于臨床實(shí)驗(yàn)的試劑的質(zhì)量良好，符合要求。2適用范圍：各種用于臨床實(shí)驗(yàn)的核酸擴(kuò)增熒光檢測(cè)試劑。3負(fù)責(zé)人：操作人：4程序：4 1 收到試劑后，目測(cè)試劑是否處在凍存狀態(tài)。4 2 核對(duì)試劑

37、品種和數(shù)量并檢查包裝：外包裝（廠名廠址、批準(zhǔn)文號(hào)、批號(hào)和有效期 等）；內(nèi)包裝（試劑瓶完整性、試劑配備品種完整性、使用說(shuō)明書有否等）。4.3 及時(shí)將試劑轉(zhuǎn)入-20C冰箱保存。將上述檢測(cè)核對(duì)情況在記錄本上登記。4 4 最遲在前批次試劑存量尚可維持常規(guī)實(shí)驗(yàn)一周時(shí)，按如下要求對(duì)新批號(hào)試劑進(jìn)行效驗(yàn)實(shí)驗(yàn)。4.5 效驗(yàn)實(shí)驗(yàn)：4.5. 1 要求設(shè)置：空白對(duì)照、陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照、室內(nèi)質(zhì)控各一，陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)品梯度 （104、105、 106、108）。4.5. 2 出現(xiàn)如下情況中任何一種的，判斷為試劑不合格，不能用于臨床檢測(cè)：a） 空白對(duì)照出現(xiàn)擴(kuò)增。如擴(kuò)增曲線CT 值大于 25,需重復(fù)實(shí)驗(yàn)確證試劑污染。b）陽(yáng)性對(duì)照

38、和陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)品均未檢出，或陽(yáng)性對(duì)照未檢出而陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)品檢出率大幅下降，表示 試劑失效或檢測(cè)靈敏度大幅下降。4.5. 3 陽(yáng)性對(duì)照未檢出,陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)品檢測(cè)正常,提示樣品提取液可能存在問(wèn)題。重復(fù)新舊提 取液陽(yáng)性對(duì)照實(shí)驗(yàn),確定提取液失效問(wèn)題。更換提取液后該批試劑方可使用。4. 5. 4 空白對(duì)照無(wú)擴(kuò)增,陰性對(duì)照有擴(kuò)增,排除其他污染可能性后,提取液存在污染可能。單獨(dú)用提取液點(diǎn)樣上機(jī),出現(xiàn)擴(kuò)增,需更換提取液后方可使用該批試劑。4. 5. 5 陽(yáng)性對(duì)照檢出,陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)品未檢出或擴(kuò)增曲線明顯系統(tǒng)性CT 值偏大 5 個(gè)循環(huán)以上。提示陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)品存在問(wèn)題。更換陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)品后該批試劑方可投入使用。4. 5. 6 空白對(duì)照、陰

39、性對(duì)照無(wú)擴(kuò)增,陽(yáng)性對(duì)照正常檢出,陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)品導(dǎo)出的標(biāo)準(zhǔn)曲線之斜率（-2.93.9 ）、截距（2634）、相關(guān)性（0.99 ）均在使用范圍內(nèi)，表明該批試劑良 好,可以投入臨床使用。4. 6 將實(shí)驗(yàn)結(jié)果歸入記錄。十六、離心機(jī)操作維護(hù)程序1.目的：保證離心機(jī)的正常使用。2.適用范圍：適用于本室使用的普通離心機(jī)。3.負(fù)責(zé)人：操作人：4.性能參數(shù) : 見說(shuō)明書。5程序：5 1 離心機(jī)應(yīng)放置在水平堅(jiān)固的地板或平臺(tái)上，并力求使儀器處于水平位置以免離心時(shí)造成 儀器振蕩。5 2 打開電源開關(guān)，將預(yù)先平衡好的樣品對(duì)稱放置于轉(zhuǎn)頭的樣品架上，關(guān)閉機(jī)蓋。5 3 旋動(dòng)定時(shí)旋鈕設(shè)定離心時(shí)間，緩慢旋轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)速調(diào)節(jié)旋鈕使儀器轉(zhuǎn)速達(dá)到

40、預(yù)定要求。5 4 離心完畢后，將轉(zhuǎn)速調(diào)節(jié)旋鈕調(diào)回零位，關(guān)閉電源開關(guān)。5 5 待離心機(jī)完全停止轉(zhuǎn)動(dòng)時(shí)打開機(jī)蓋，取出離心樣品，再次關(guān)閉機(jī)蓋結(jié)束離心。5 6 離心室的清潔：為了避免樣本等殘留物的污染，應(yīng)經(jīng)常對(duì)離心機(jī)外殼和離心室進(jìn)行清潔 處理。對(duì)離心室清潔，應(yīng)先打開離心機(jī)蓋，撥掉電源線，用專用設(shè)備將離心機(jī)轉(zhuǎn)子旋下，再用 中性去污劑( 70%的異丙醇 / 水混合物或乙醇去污染)清潔離心室；離心室內(nèi)的橡膠密封圈經(jīng)去 污劑處理后，用水沖洗，再用甘油潤(rùn)滑。5 7 轉(zhuǎn)子的清潔：轉(zhuǎn)子會(huì)被樣本殘留物污染，也可能會(huì)被某些化學(xué)試劑腐蝕，因此應(yīng)對(duì)轉(zhuǎn)子 每月進(jìn)行清潔維護(hù)。每月用中性的清潔劑清潔轉(zhuǎn)子一次，并在儀器維護(hù)記錄本上

41、作好記錄，以 延長(zhǎng)轉(zhuǎn)子的壽命。6.儀器維護(hù)(1)為確保安全和離心效果 , 儀器必須放置在堅(jiān)固水平的臺(tái)面上 , 塑料蓋門上不得放置任何物品 樣品必須對(duì)稱放置 , 并在開機(jī)前確保已擰緊螺母。(2)應(yīng)經(jīng)常檢查轉(zhuǎn)頭及試驗(yàn)用的離心管是否有裂紋 , 老化等現(xiàn)象 , 如有須及時(shí)更換 .(3)試驗(yàn)完畢后 , 需將儀器擦拭干凈 , 以防腐蝕 .如樣品比重超過(guò) 1.2g/cm3,最高轉(zhuǎn)速 n 按下式計(jì)算：n=nmax*V-1.2/樣呂比重.(5)當(dāng)電機(jī)碳刷長(zhǎng)度小于 6mm 時(shí),必須及時(shí)更換.(6)在離心機(jī)未停穩(wěn)時(shí)不得開蓋 .(7)儀器必須有可靠接地 .(8)實(shí)驗(yàn)結(jié)束后 , 請(qǐng)關(guān)閉后面的電源開關(guān) , 撥掉電源插頭時(shí)

42、 , 請(qǐng)不要忘了打開后面的電源開關(guān)(9)該儀器在日常使用中請(qǐng)注意符合“ 5.6,5.7 ”要求。(10) 嚴(yán)格按照儀器的開關(guān)機(jī)程序關(guān)機(jī)。7.期間核查(1)本儀器不需要特別的周期間隔。(2)校準(zhǔn)物均為與 ICSH 之標(biāo)準(zhǔn)相符合的校準(zhǔn)物，測(cè)定值偏差均不超過(guò)其規(guī)定值。十七、冰箱操作維護(hù)規(guī)程1目的：對(duì)冰箱進(jìn)行適當(dāng)?shù)木S護(hù)，以確保冰箱的正常使用。2適用范圍：本實(shí)驗(yàn)室使用的各種品牌、型號(hào)的冰箱。3負(fù)責(zé)人： 操作人：4. 性能參數(shù) : 見說(shuō)明書。5程序：4. 1 開、關(guān)機(jī)：冰箱按說(shuō)明書要求放好后，插上電源線，冷藏室溫度開關(guān)置于4C,冷凍室溫度開關(guān)置于-20C,2 小時(shí)后用溫度計(jì)確認(rèn)。系統(tǒng)進(jìn)入正常運(yùn)行狀態(tài)后即可

43、使用。4. 2 外冰箱應(yīng)放置于水平地面并留有一定的散熱空間。外接電源電壓必須匹配，并要求有良 好的接地線。4. 3 冰箱內(nèi)禁止存放與本實(shí)驗(yàn)室無(wú)關(guān)的物品。4. 4 放入冰箱內(nèi)的所有試劑、樣品、質(zhì)控品等必須密封保存。4. 5 保持冰箱出水口通暢；非自動(dòng)除霜冰箱應(yīng)在每月底除霜；月底清潔冰箱，清潔時(shí)切斷電 源，用軟布蘸水擦拭冰箱內(nèi)外，必要時(shí)可用中性洗滌劑。4. 6 每日觀察冰箱內(nèi)溫度并記錄于冰箱的質(zhì)控圖上。4. 7 若溫度超出規(guī)定范圍，調(diào)節(jié)溫控使其回到正常范圍，并進(jìn)行記錄。4. 8 若溫控調(diào)節(jié)無(wú)效，報(bào)請(qǐng)?jiān)O(shè)備科維修，修理后須驗(yàn)收合格并簽字后方能正常使用。6.儀器維護(hù)(1)使用注意。該儀器在日常使用中請(qǐng)注

44、意符合“ 4. 注意事項(xiàng)”要求(2)廢液瓶滿要及時(shí)倒掉廢液，切勿強(qiáng)行扯動(dòng)紅黃兩根管來(lái)打開瓶蓋，檢查廢液瓶是否漏氣， 防止低真空出現(xiàn)。(3)當(dāng)出現(xiàn)堵孔時(shí)，按自動(dòng)沖洗鍵沖洗管道。(4)嚴(yán)格按照儀器的關(guān)機(jī)程序關(guān)機(jī)。7.期間核查(1 冰箱不需要特別的周期間隔。(2) 校準(zhǔn)物均為與 ICSH 之標(biāo)準(zhǔn)相符合的校準(zhǔn)物，測(cè)定值偏差均不超過(guò)其規(guī)定值。八、生物安全柜操作維護(hù)規(guī)程1目的：正確使用生物安全柜。2適用范圍：本 SOP 適用于本實(shí)驗(yàn)室使用的生物安全柜。3負(fù)責(zé)人：操作人：4. 性能參數(shù) : 見說(shuō)明書。5程序：5 1 新安裝或長(zhǎng)期未使用的生物安全柜，使用前必須用超凈真空吸塵器或不產(chǎn)生纖維的物品 認(rèn)真進(jìn)行清潔工

45、作。5.2 接通電源，使用前應(yīng)提前1530 分鐘同時(shí)開啟紫外燈和風(fēng)機(jī)組工作。53 當(dāng)需要調(diào)節(jié)風(fēng)機(jī)風(fēng)速時(shí)，用生物安全柜操作面板上的風(fēng)速調(diào)節(jié)鈕進(jìn)行調(diào)節(jié)。風(fēng)機(jī)、照明 均由指示燈指示其工作狀態(tài)。5.4 工作臺(tái)面上禁止存放不必要的物品，以保持工作區(qū)的潔凈氣流不受干擾。5.5 禁止在工作臺(tái)面上記錄書寫，工作時(shí)應(yīng)盡量避免作明顯擾動(dòng)氣流的動(dòng)作；禁止在預(yù)過(guò)濾 進(jìn)風(fēng)口部位放置物品，以免擋住進(jìn)風(fēng)口造成進(jìn)風(fēng)量減少，降低凈化能力。5.6 使用結(jié)束后，用消毒液清理工作臺(tái)面后打開紫外燈，1530 分鐘后關(guān)閉紫外燈，關(guān)閉生物安全柜電源。每次使用生物安全柜后，均需對(duì)其進(jìn)行清潔。5.7 根據(jù)環(huán)境潔凈程度，定期將預(yù)過(guò)濾器中的濾料拆

46、下清洗，一般間隔時(shí)間為3 6 個(gè)月。5.8 定期(一般每半年 1 次)計(jì)測(cè)工作區(qū)風(fēng)速，如發(fā)現(xiàn)不符合技術(shù)參數(shù)要求，則可調(diào)大風(fēng)機(jī)供電電壓。當(dāng)風(fēng)機(jī)組電壓調(diào)到最大時(shí)，工作區(qū)風(fēng)速仍達(dá)不到0.3m/s ，則必須更換高效空氣過(guò)濾器(由廠家或院儀器維修人員進(jìn)行)。4. 9 有相應(yīng)的維護(hù)記錄，長(zhǎng)期不使用的生物安全柜撥下電源插頭。6.儀器維護(hù)(1) 使用注意。該儀器在日常使用中請(qǐng)注意符合“ 4. 注意事項(xiàng)”要求(2) 廢液瓶滿要及時(shí)倒掉廢液，切勿強(qiáng)行扯動(dòng)紅黃兩根管來(lái)打開瓶蓋，檢查廢液瓶是否漏氣， 防止低真空出現(xiàn)。(3) 當(dāng)出現(xiàn)堵孔時(shí)，按自動(dòng)沖洗鍵沖洗管道。(4) 嚴(yán)格按照儀器的關(guān)機(jī)程序關(guān)機(jī)。7.期間核查(1)PE-5700 基因擴(kuò)增儀的定標(biāo)不需要特別的周期間隔，本實(shí)驗(yàn)室 生部臨床檢驗(yàn)中心的指定校準(zhǔn)。（2） 校準(zhǔn)物均為與 ICSH 之標(biāo)準(zhǔn)相符合的校準(zhǔn)物，測(cè)定值偏差均不超過(guò)其規(guī)定值。十九、移液器操作維護(hù)規(guī)程1目的：確保移液的精確性，正確使用移液器。 2適用范圍：本實(shí)驗(yàn)室使用的可調(diào)式移液器。3負(fù)責(zé)人： 操作人：4程序：4 1 移液器的使用41 1 轉(zhuǎn)動(dòng)旋鈕設(shè)定移液量，設(shè)定的移液量不可超出該移液器規(guī)定的范圍。PE-5700 基因擴(kuò)增儀執(zhí)行