HPLC法測定注射用阿奇霉素的有關(guān)物質(zhì)

1、論著HPL C 法測定注射用阿奇霉素的有關(guān)物質(zhì) 作者簡介:易秋艷(1972,女,主管藥師易秋艷1,范時根2,楊梁1(1.四川省食品藥品檢驗所,四川成都610036;2.四川百利藥業(yè)有限責(zé)任公司,四川成都610045摘要目的:建立注射用阿奇霉素有關(guān)物質(zhì)的新檢測方法。方法:采用高效液相色譜法(HPL C 檢測注射用阿奇霉素中有關(guān)物質(zhì)。液相色譜條件為色譜柱:Waters XBridge TM Sheild RP18;流動相:乙腈2磷酸鹽緩沖液(取0.05mol/L 磷酸氫二鉀溶液,用20%磷酸溶液調(diào)節(jié)p H 值至8.6,流動相(5842;流速:1ml min -1;檢測波長為210nm ,柱溫:30

2、。結(jié)果:高效液相色譜法阿奇霉素的檢測限為4.6ng ,阿奇霉素主峰與雜質(zhì)峰分離完全。結(jié)論:高效液相色譜法靈敏度高,可量化,更適用于注射用阿奇霉素的有關(guān)物質(zhì)檢查。關(guān)鍵詞注射用阿奇霉素;高效液相色譜;有關(guān)物質(zhì)檢查中圖分類號R 927.1文獻(xiàn)標(biāo)識碼A 文章編號100420188(20080520656203Determination of related compounds in azithromycin for injection by HPLCYI Qiu 2yan 1,FAN Shi 2gen 2,YAN G Liang 11.Bureau of Food and Drug Inspectio

3、n of Sichuan Province ,Chengdu ,610036,China ;2.Sichuan Bai 2Li Pharmaceutical Co.,Ltd ,Chengdu ,610045,China.Abstract Objective :To establish a new met hod to detect t he related compounds in azit hromycin for injection.Methods :The relatedcompounds in azit hromycin for injection were determined by

4、 high performance liquid chromatography (HPLC .The isolation was executed by Waters XBridge TM Sheild RP18Column and t he mobile phase consisted of acetonitrile 2phosphate buffer.Detection was carried out at wave lengt h of 210nm ,flow rate of 1ml min -1and temperature of 30.R esults :The metered li

5、mit of azit hromycin was 4.6ng by HPL C.The main and impurity peak of azit hromycin for injection were divided completely.Conclusion :The HPLC is sensitive and can be used for t he determination of related compounds in azit hromycin for injection.K ey w ords :azit hromycin ;HPLC ;related compound ;m

6、easurement阿奇霉素是新一代大環(huán)內(nèi)酯類抗生素,它通過抑制蛋白質(zhì)的合成而起作用。以往的注射用阿奇霉素標(biāo)準(zhǔn)均采用T LC 法檢測有關(guān)物質(zhì),該方法靈敏度欠佳,不能準(zhǔn)確、有效的控制注射用阿奇霉素中的有關(guān)物質(zhì),考慮到廣大病員用藥的安全可靠,本文參考有關(guān)文獻(xiàn)1,2,建立了HPLC 法測定注射用阿奇霉素中有關(guān)物質(zhì)的方法。該方法準(zhǔn)確、靈敏、簡便,適用于注射用阿奇霉素的有關(guān)物質(zhì)檢測。1儀器與試劑美國Waters 公司2695液相色譜儀,2487檢測器,Empower 色譜工作站(美國Waters 公司,Milli 2Q 超純水儀(MILLIPORE 公司,電子天平:Sartorius BP 211D ,

7、p H 計:METTL ER TOL EDO MA235。注射用阿奇霉素由四川百利藥業(yè)有限責(zé)任公司提供(規(guī)格:0.125g ,共3批9個批號。阿奇霉素對照品和紅霉素對照品均來源于中國藥品生物制品檢定所。乙腈為色譜純,其它化學(xué)試劑均為分析純;超純水(電阻率18.2M .cm 。2方法與結(jié)果2.1色譜條件用硅膠表面經(jīng)雜化處理的十八烷基硅烷建合硅膠為填充劑Waters XBridge TM SheildRP18(規(guī)格:250mm 4.6mm ,5m ;以乙腈2磷酸鹽緩沖液(取0.05mol/L 磷酸氫二鉀溶液,用20%磷酸溶液調(diào)節(jié)p H 值至8.6,流動相(5842;檢測波長為210nm ;流速:1

8、ml min -1;柱溫:30。取阿奇霉素對照品適量,用流動相制成約含阿奇霉素2mg/ml 的溶液;取上述溶液適量,于水浴中加熱30min ,冷卻,加乙腈使溶液體積與取用量大致相等,濾過,取續(xù)濾液100l 注入液相色譜儀,記錄色譜圖,阿奇霉素峰的拖尾因子不得過2.5,阿奇霉素峰的保留時間約為11min ,阿奇霉素降解產(chǎn)物和阿奇霉素峰間的分離度均應(yīng)符合規(guī)定,見圖1。圖1阿奇霉素系統(tǒng)適應(yīng)性試驗色譜圖2.2空白試驗輔料干擾:取本品的空白輔料制備空白輔料供試品溶液,取100l 注入液相色譜儀,記錄色譜圖,結(jié)果輔料對阿奇霉素峰無干擾,見圖2。 圖2輔料空白試驗色譜圖2.3破壞性試驗使用高溫、強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、

9、氧化和光照條件加速本品的破壞,以考察本品色譜條件的專屬性。取注射用阿奇霉素樣品約20mg (5份,其中2份加流動相2ml 溶解,分別加0.1mol/L 鹽酸溶液2ml 、0.1mol/L氫氧化鈉溶液2ml ,放置1h ,中和后,用流動相稀釋至10ml ;取1份加流動相5ml 溶解,于水浴中加熱60min ,用流動相定容至10ml ;另2份加流動相2ml 溶解后其中1份加30%過氧化氫1滴放置1h 后用流動相稀釋至10ml ;另1份于4000lx 光照12h 后用流動相稀釋至10ml 。在上述HPLC 條件下進(jìn)樣100l ,記錄色譜圖結(jié)果說明本法可檢出阿奇霉素的降解產(chǎn)物,且降解產(chǎn)物與阿奇霉素主峰

10、分離良好。同時考察本品在該色譜條件下與紅霉素的分離度良好。2.4檢測限取阿奇霉素對照品依法配制阿奇霉素對照品溶液,逐步稀釋,進(jìn)樣,測定,結(jié)果當(dāng)進(jìn)樣量為4.6ng 時,信噪比為31;即在本方法中阿奇霉素的檢測限為:4.6ng 。2.5耐用性試驗因采用HPL C 法故對本方法的色表1注射用阿奇霉素樣品有關(guān)物質(zhì)測定結(jié)果規(guī)格(g 批號最大雜質(zhì)峰(%其他雜質(zhì)峰(%雜質(zhì)總量(%0.1250.91.01.70801080.91.0 1.70801090.9500 ml。膀胱底靠近左側(cè)輸尿管開口處見黏膜糾集,插管能順利通過,雙側(cè)輸尿管口顯示清晰。膀胱美藍(lán)試驗,糞便著藍(lán)色。診斷為乙狀結(jié)腸膀胱瘺。剖腹探查見膀胱內(nèi)

11、無結(jié)石、腫瘤、潰瘍,膀胱三角區(qū)見糞便殘渣沉淀,靠近左側(cè)輸尿管處見黏膜糾集,插入F8號導(dǎo)尿管能順利進(jìn)入乙狀結(jié)腸,乙狀結(jié)腸與膀胱底部緊密粘連形成疤痕,術(shù)中分離膀胱與乙狀結(jié)腸,分別可見(0.60.5cm瘺口,手術(shù)切除膀胱瘺口及其周圍疤痕組織后縫合修補(bǔ),術(shù)中未發(fā)現(xiàn)乙狀結(jié)腸和直腸腫瘤,切除乙狀結(jié)腸病灶段,遠(yuǎn)端閉合放回盆腔,近端行乙狀結(jié)腸單腔造口術(shù),膀胱置入T型管引流,病理報告炎性疤痕組織,術(shù)后再次發(fā)生結(jié)腸膀胱瘺,合并感染,經(jīng)搶救治療無效死亡。討論自發(fā)性乙狀結(jié)腸膀胱瘺罕見,臨床以膀胱直腸瘺多見。本例患者慢性結(jié)腸炎10余年,加上有長期濫用糖皮質(zhì)激素的病史,主要考慮為長期濫用糖皮質(zhì)激素使胃酸和胃蛋白酶分泌增多,抑制腸黏膜分泌,降低了胃腸道黏膜的抵抗力,從而造成消化道穿孔,乙狀結(jié)腸穿孔后因炎性組織侵入膀胱,與膀胱粘連,向膀胱穿透形成慢性瘺道。首發(fā)癥狀在乙狀結(jié)腸。病理切片報告排除了結(jié)