藥學(xué)綜合實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)書(shū)

1、. . . . 藥學(xué)綜合實(shí)驗(yàn)教學(xué)指導(dǎo)書(shū) Separation Technology and exploitation of Natural Medical 課程編號(hào)：142015 學(xué)時(shí)/學(xué)分：一周/ 3.0一、指導(dǎo)書(shū)說(shuō)明本指導(dǎo)書(shū)根據(jù)理工大學(xué)2006年版生物工程專(zhuān)業(yè)培養(yǎng)計(jì)劃制定.先修課程：有機(jī)化學(xué)、分析化學(xué)、天然藥物提取分離與開(kāi)發(fā)利用、藥劑學(xué)二、教學(xué)對(duì)象生物工程專(zhuān)業(yè)學(xué)生三、課程性質(zhì)與總體要求1、課程性質(zhì)：必修課2、教學(xué)目的與要求：通過(guò)本課程實(shí)驗(yàn)的學(xué)習(xí)，檢驗(yàn)在課堂上所學(xué)的理論知識(shí)，使學(xué)生對(duì)理性知識(shí)的理解更加深入，掌握得更加牢固，通過(guò)實(shí)驗(yàn)訓(xùn)練學(xué)習(xí)的基本操作技能，培養(yǎng)學(xué)生分析問(wèn)題和解決問(wèn)題的能力，使學(xué)

2、生獲得從事天然藥物與藥劑學(xué)科研工作的基本訓(xùn)練。通過(guò)實(shí)驗(yàn)，要求學(xué)生掌握天然藥物經(jīng)典提取與分離純化方法與其制劑研制的基本原理與其應(yīng)用，熟悉運(yùn)用化學(xué)方法、色譜方法來(lái)鑒定化合物以與原料藥與制劑的分析測(cè)定方法等容。四、教學(xué)方式、重點(diǎn)1、教學(xué)方式：實(shí)驗(yàn)課2、重點(diǎn)容：天然藥物提取分離基本理論與技術(shù)，提取分離與分析方法;五、考核方式考查: 實(shí)驗(yàn)報(bào)告和出勤情況。一、前言藥學(xué)綜合實(shí)驗(yàn)是生物工程綜合實(shí)驗(yàn)的重要組成部分。其主要目的是：通過(guò)試驗(yàn)，檢驗(yàn)在課堂上所學(xué)的理論知識(shí)。使學(xué)生對(duì)理性知識(shí)的理解更加深入，掌握得更加牢固。通過(guò)試驗(yàn)，訓(xùn)練學(xué)生的基本操作技能，培養(yǎng)學(xué)生分析問(wèn)題和解決問(wèn)題的能力，使學(xué)生獲得從事天然藥物科研工作的

3、基本訓(xùn)練。在實(shí)驗(yàn)中，重點(diǎn)是要加強(qiáng)對(duì)學(xué)生基本操作技能的訓(xùn)練,要求學(xué)生掌握以下技能：要求掌握常用的經(jīng)典方法的原理與操作:其中包括液-固提取法:超臨界提取、超聲提取、回流提取等）、掌握柱色譜-吸附柱等的原理和基本操作和掌握常用的經(jīng)典分析方法的原理與操作。二、實(shí)驗(yàn)須知在天然藥物化學(xué)實(shí)驗(yàn)中，所用的藥品多數(shù)是揮發(fā)性、易燃、有毒、有腐蝕性、刺激性、甚至爆炸性藥品，試驗(yàn)操作又常在加溫加壓等情況下進(jìn)行，需要各種熱源、電器或其他儀器，操作不慎易造成火災(zāi)、爆炸、中毒、觸電等事故。但只要加強(qiáng)愛(ài)護(hù)國(guó)家財(cái)產(chǎn)和保障人民生民安全的責(zé)任心，提高警惕，消除隱患，注意實(shí)驗(yàn)規(guī)則，事故是可以避免的。一)實(shí)驗(yàn)規(guī)則1.試驗(yàn)前 必須先預(yù)習(xí)實(shí)

4、驗(yàn)容，了解原理和操作規(guī)程。試驗(yàn)前應(yīng)清點(diǎn)并檢查儀器是否完整，裝置是否正確，合格后方可進(jìn)行試驗(yàn)。2.試驗(yàn)時(shí) 不準(zhǔn)做與本實(shí)驗(yàn)無(wú)關(guān)的事情，嚴(yán)禁吸煙，不得擅自離開(kāi)，并應(yīng)隨時(shí)注意反應(yīng)情況，儀器有否漏氣，破裂等。隨時(shí)記錄試驗(yàn)應(yīng)記的項(xiàng)目，以作正式報(bào)告。藥品儀器都是國(guó)家財(cái)產(chǎn)，須節(jié)約愛(ài)護(hù)使用，公用物品，用完后立即放回原處。不可調(diào)錯(cuò)瓶塞，以免污染，儀器要洗刷干凈。操作易燃性有機(jī)溶劑，回流、蒸餾、減壓蒸餾時(shí)，不能明火直接加熱，要放沸石或一端封死的毛細(xì)管，若在加熱時(shí)發(fā)現(xiàn)無(wú)沸石則應(yīng)冷卻后再加，防止爆沸沖出。減壓系統(tǒng)應(yīng)裝有安全瓶。加液時(shí)應(yīng)?；鸹蜻h(yuǎn)離火源，一般無(wú)漏氣開(kāi)口，冷凝水要通暢。起封易揮發(fā)溶劑瓶蓋時(shí)，臉面要避免開(kāi)瓶口慢

5、慢啟開(kāi)，以防氣體沖臉上。有毒具腐蝕藥品應(yīng)妥善保管，操作后要立即洗手。勿粘與五官和創(chuàng)口，以免中毒。實(shí)驗(yàn)中，有毒氣或腐蝕性氣體發(fā)生時(shí)應(yīng)在通風(fēng)櫥中進(jìn)行操作。必要時(shí)可戴好防護(hù)用具進(jìn)行工作。若將玻管插入塞中時(shí)，可在塞孔中涂些水和甘油等潤(rùn)滑劑，用布包住玻管使其旋轉(zhuǎn)而入，防止折斷割傷。試驗(yàn)臺(tái)上不放無(wú)用的藥品、儀器，實(shí)驗(yàn)時(shí)做到水槽、儀器、桌面、地上清潔整齊。3.試驗(yàn)結(jié)束時(shí) 應(yīng)將門(mén)、窗、水、電、煤氣關(guān)好，室打掃干凈，清點(diǎn)儀器后方可離去。二)安全防火須知1.實(shí)驗(yàn)室存放易燃性有機(jī)溶劑時(shí)要遠(yuǎn)離火源，不得超過(guò)500ml。2.在進(jìn)行易燃性有機(jī)溶劑實(shí)驗(yàn)時(shí)，一定要按著操作規(guī)程進(jìn)行。不可將易揮發(fā)、易燃性有機(jī)溶劑倒入水槽或廢液缸

6、。3.烘箱不能烘盛有易燃性溶劑的器皿。4.消防器材，沙箱、石棉布、滅火器等應(yīng)放在方便固定的地點(diǎn)，不能隨意移動(dòng)，均應(yīng)處于備用狀態(tài)。5.萬(wàn)一不慎著火，要沉著冷靜積極搶救，應(yīng)立即切斷室電源和火源，用石棉布將著火部位蓋嚴(yán)，使其斷絕空氣而熄滅?；蚴腔饎?shì)情況選用適當(dāng)滅火器材進(jìn)行滅火。在實(shí)驗(yàn)室使用二氧化碳滅火器較好，它具有不腐蝕不導(dǎo)電之優(yōu)點(diǎn)。在實(shí)驗(yàn)室中常發(fā)生的事故如下，應(yīng)予以特別注意。6.蒸餾或回流加熱時(shí)，發(fā)現(xiàn)未放沸石，未等溶液冷卻就補(bǔ)加沸石，結(jié)果溶液沖出瓶外，于是引起火災(zāi)。7.蒸餾易燃物時(shí)，忘記通冷凝水，大量蒸汽逸出亦易引起火災(zāi)。8.蒸餾易燃物時(shí)塞子漏氣引起火災(zāi)。9.用三角燒瓶作減壓裝置的容器易引起炸裂。

7、10.加壓操作結(jié)束后，放氣太快，使壓力計(jì)沖破。11.使用真空干燥器時(shí)，用完就直接開(kāi)干燥器的放氣閥，結(jié)果使泵的機(jī)油被吸到干燥器中，樣品被污染。12.實(shí)驗(yàn)室水槽易發(fā)生用抹布和碎拖布條堵塞而造成水災(zāi)。三、實(shí)驗(yàn)教學(xué)容與學(xué)時(shí)冬凌草藥材的預(yù)處理一)、技術(shù)路線優(yōu)化工藝條件超臨界流體萃取回流與超聲提取減壓真空濃縮大孔樹(shù)脂柱層析與聚酰胺柱層析赤芍藥材的預(yù)處理減壓真空濃縮芍藥苷薄層分析與含量測(cè)定二)、實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目和學(xué)時(shí)序號(hào)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目名稱(chēng)學(xué)時(shí)數(shù)必/選開(kāi)1冬凌草甲素的超臨界流體萃取8選開(kāi)2芍藥苷的提取8必3芍藥苷的分離純化12必4冬凌草甲素與芍藥苷的薄層分析與含量測(cè)定分析12選開(kāi)備注：本次實(shí)驗(yàn)紅色不做四、綜合實(shí)驗(yàn)一、實(shí)驗(yàn)?zāi)?/p>

8、的：通過(guò)本課程實(shí)驗(yàn)的學(xué)習(xí)，使學(xué)生了解天然藥物/產(chǎn)物開(kāi)發(fā)利用的基本原理，熟悉運(yùn)用化學(xué)方法、色譜方法來(lái)鑒定化合物以與原料藥的分析測(cè)定方法等容，培養(yǎng)學(xué)生分析問(wèn)題和解決問(wèn)題的能力，要求學(xué)生掌握天然藥物經(jīng)典提取與超臨界萃取與分離純化方法與其分析的基本原理、基本操作技能與其應(yīng)用，使學(xué)生獲得從事天然藥物與藥劑學(xué)科研工作的基本訓(xùn)練。二、實(shí)驗(yàn)原理:一）提取中藥成分的提取通常是利用適當(dāng)?shù)娜軇┖瓦m當(dāng)?shù)姆椒?，盡可能地將所需要的成分提取完全提取出來(lái)。傳統(tǒng)的中藥提取方法有溶劑提取法、水蒸汽蒸餾提取法和升華法等。其中溶劑提取法使用最為廣泛，它是根據(jù)各種化學(xué)成分在溶劑中的溶解度差異，選用對(duì)所需有效成分溶解度大，對(duì)不需要成分溶

9、解度小的溶劑，進(jìn)而將有效成分從藥材組織溶解出來(lái)的方法，常用的溶劑主要有水、乙醇、甲醇、乙酸乙酯、乙醚、苯和石油醚等。提取的基本方法有浸漬法(常溫浸漬法、溫浸法、煎煮法)、滲瀝法、回流法?，F(xiàn)代提取方法主要有：超聲提取、微波萃取、超臨界流體萃取、酶法輔助提取等；超臨界流體萃取技術(shù)是近代化工分離中的一種新型分離技術(shù)，超臨界CO2萃取是采用CO2作溶劑，超臨界狀態(tài)下的CO2流體密度和介電常數(shù)較大，對(duì)物質(zhì)溶解度很大，并隨壓力和溫度的變化而急劇變化，因此，不僅對(duì)某些物質(zhì)的溶解度有選擇性，且溶劑和萃取物非常容易分離。超臨界CO2萃取特別適用于脂溶性，高沸點(diǎn)，熱敏性物質(zhì)的提取，同時(shí)也適用于不同組分的精細(xì)分離，

10、即超臨界精鎦。用超臨界CO2作溶劑對(duì)生物、食品、藥物等許多產(chǎn)物的提取和純化。芍藥苷溶于70%乙醇，經(jīng)加熱其溶解性更好，芍藥苷在60-80從藥材中溶出進(jìn)入70%乙醇溶液，經(jīng)1-2小時(shí)提取回流，可以將其提取出來(lái)，為了提取徹底，一般提取2-3次；第1次一般用藥材重量8-10倍體積溶劑，2-3次一般用藥材重量4-6倍體積溶劑即可提取干凈。二）分離純化有時(shí)用合適的方法和溶劑，將中藥提取液稍加濃縮，特定的有效成分就會(huì)結(jié)晶析出，但大多數(shù)情況下，仍然是混合物，還需要進(jìn)一步除去大分子雜質(zhì)如糖類(lèi)、蛋白和色素等成分，用特定的方法和技術(shù)經(jīng)分離、純化(精制)才能得到所需要的成分或單體。具體的方法與技術(shù)線路則隨所需要的成

11、分或單體理化性質(zhì)不同而異。常用的分離純化方法有系統(tǒng)溶劑分離法、兩相溶劑萃取法等，系統(tǒng)溶劑分離法是研究成分不明的中藥的最常用的方法，兩相溶劑萃取法有簡(jiǎn)單萃取法、連續(xù)萃取法和液滴逆流分配法，常用的分離純化方法還有沉淀法、結(jié)晶法、層析法、分餾法、色譜法等，但一些新的技術(shù)在分離、純化方面比傳統(tǒng)方法具有更大的優(yōu)越性。中藥提取分離純化技術(shù)種類(lèi)繁多，特別是近20年以來(lái)，隨著科學(xué)技術(shù)的進(jìn)步，出現(xiàn)了許多新的高效分離純化方法，如大孔樹(shù)脂吸附分離法、離子交換法、有機(jī)溶劑萃取法、柱層析色譜法、薄層層析法、凝膠色譜法、聚酰胺色譜法等。大孔樹(shù)脂是一類(lèi)有機(jī)高聚物吸附劑，是一種非凝膠型，注有致孔劑，不含交換基團(tuán)，有含空隙結(jié)構(gòu)

12、的“純聚合物”。依據(jù)樹(shù)脂的結(jié)構(gòu)、孔徑和比表面積的不同，可分為不同的類(lèi)型和型號(hào)。其平均孔徑在30-100A，具有比表面積大、附容量大、擇性好、生處理方便、附速度快等特點(diǎn)，特別適合于從水溶液中分離化合物，大孔樹(shù)脂的吸附原理，主要分為分子間力、氫鍵和機(jī)械截留。中藥中所含成分不同，與樹(shù)脂結(jié)合的方式也不同。在中藥提取中，因同一工藝，不同型號(hào)的樹(shù)脂將會(huì)有不同的提取效果。近年來(lái)在中草藥有效成分的提取分離中受到普遍重視。一般酸性化合物在酸性條件下的吸附作用較強(qiáng)；堿性化合物在堿性條件下吸附作用較強(qiáng)。中藥化學(xué)成分在吸附柱中常形成吸附梯度。一般來(lái)說(shuō)，柱子的直徑與長(zhǎng)度之比應(yīng)不低于1:20才能達(dá)到比較好的吸附效果。大孔

13、樹(shù)脂的用量要足量，使中藥成分能充分吸附。一般樹(shù)脂與藥材用量比應(yīng)不低于1:0.6。樹(shù)脂吸附時(shí)，應(yīng)控制適度的流速，使藥物成分吸附充分。洗脫條件主要依據(jù)樹(shù)脂的特性和中藥中所含化學(xué)成分以與需要的有效成分極性而定。對(duì)中極性的樹(shù)脂或中藥所需要有效成分極性較大者，選用極性較大的洗脫劑；對(duì)非極性樹(shù)脂和所需有效成分極性較小者，選用極性較小的洗脫劑。一般選用60-80的乙醇，可洗脫吸附的大部分成份，如苷類(lèi)、生物堿、黃酮、蒽醌等,我們選用20的乙醇洗脫芍藥苷。三）分析測(cè)定天然藥物有效成份的分析方法很多，主要有：定性分析-薄層色譜、定量分析-紫外可見(jiàn)分光光度法和高效液相色譜法等，其中薄層色譜法和紫外可見(jiàn)分光光度法操作

14、簡(jiǎn)單，靈敏度較高，重現(xiàn)性較好，是天然藥物/產(chǎn)物常用的分析方法。三、實(shí)驗(yàn)材料、儀器和試劑：1、實(shí)驗(yàn)材料：芍藥和冬菱草2、儀器：植物粉碎機(jī)、藥物篩、CO2超臨界萃取設(shè)備、CO2鋼瓶、紫外/可見(jiàn)分光光度計(jì)、烘箱、電爐、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、回流冷凝裝置、500mL磨口圓底燒瓶、研缽、50、5mL容量瓶、刻度吸管、層析柱、三角瓶等。3、試劑：（1）CO2 （2）芍藥苷對(duì)照品 （3）醋酸乙酯（4）薄層硅膠G （5）二氯甲烷（6）乙醇 （7）大孔樹(shù)脂 （8）NaOH （9）氯仿（10）5香草醛硫酸溶液 ：5g香草醛用10%硫酸乙醇100mL溶解。 （11）0.2%羥甲基纖維鈉水溶液（12）冬菱草甲素對(duì)照品（13）三

15、氯甲烷-甲酸（5：1）(14)萘酚酒精溶液四、實(shí)驗(yàn)步驟一、冬菱草甲素的超臨界流體萃取要求學(xué)生學(xué)習(xí)和掌握冬凌草甲素的超臨界萃取方法，要求熟悉超臨界萃取設(shè)備、工藝流程與操作規(guī)程，了解超臨界萃取在天然產(chǎn)物提取方面應(yīng)用。1、系統(tǒng)組成與工藝流程（1)系統(tǒng)組成:該裝置主要由萃取釜、分離釜、精鎦柱、CO2高壓泵、副泵、制冷系統(tǒng)、CO2貯罐、換熱系統(tǒng)、凈化系統(tǒng)、流量計(jì)、溫度、壓力控制（保護(hù)）系統(tǒng)等組成。(2)超臨界流體萃取過(guò)程簡(jiǎn)介被萃取原料裝入萃取釜。采用CO2為超臨界萃取溶劑。CO2氣體經(jīng)熱交換器冷凝成液體，用加壓泵把壓力提升到工藝過(guò)程所需的壓力（應(yīng)高于CO2的超臨界壓力）同時(shí)調(diào)節(jié)溫度，使其成為超臨界CO2

16、流體 。CO2流體作為溶劑從萃取釜底部進(jìn)入，與被萃取物料充分接觸，選擇性溶解出所需的化學(xué)成分。含溶解萃取物的高壓CO2流體經(jīng)節(jié)流閥降壓到底于CO2臨界壓力以下，進(jìn)入分離釜（又稱(chēng)解析釜）。由于CO2溶解度急劇下降而析出溶質(zhì)，自動(dòng)分離成溶質(zhì)和CO2氣體二部分。前者為過(guò)程產(chǎn)品，定期從分離釜底部放出，后者為循環(huán)氣體，經(jīng)熱交換器冷凝成CO2液體再循環(huán)使用，整個(gè)分離過(guò)程是利用CO2流體在超臨界狀態(tài)下對(duì)有機(jī)物有特殊增加的溶解度，而低于臨界狀態(tài)下對(duì)有機(jī)物基本不溶解的特性，將CO2流體不斷在萃取釜和分離釜間循環(huán)，從而有效地將需要分離提取的組分從原料中分離出來(lái)。CO2萃取釜分離分離回路；2、超臨界二氧化碳萃取冬菱

17、草甲素最佳條件萃取壓力為24 MPa、溫度為55、萃取時(shí)間為2.5 h、分離溫度為40。3、操作步驟二、芍藥苷的提取、分離純化與分析一) 藥材處理1. 藥材的預(yù)處理 藥材先洗去泥沙,再切片3-5mm,最后曬干,收藏于干燥處。2. 藥材的粉碎取干燥的藥材片經(jīng)植物粉碎機(jī)粉碎,再過(guò)篩二)藥物提取、分離與分析1、藥物的提取-回流提取取一定量的藥材粗粉置圓底于燒瓶中,加入一定體積的提取溶劑在80左右進(jìn)行提取;1.1 正交設(shè)計(jì) 考察提取溶劑乙醇濃度、體積、提取時(shí)間、提取次數(shù)對(duì)芍藥苷得率的影響，每因素設(shè)計(jì)3水平 ，因此采用四因素三水平表 L9(34)。表 1 因素水平表因素溶劑濃度A溶劑體積B提取時(shí)間(h/

18、min)C提取次數(shù)D160%乙醇61.0/301270%乙醇81.5/452380%乙醇102.0/6031.2 正交提取每次實(shí)驗(yàn)取赤芍飲片20g用一定濃度乙醇回流提取,實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)如下:表2 正交實(shí)驗(yàn)表N0.ABCD得率111112122231333421235223162312731328321393321R1R2R3R合并提取液，過(guò)濾，計(jì)算濾液體積,60-70以下真空濃縮至糖漿狀的浸膏，再用熱水溶解至50mL。 2、分離純化大孔吸附樹(shù)脂是一類(lèi)不含離子交換基團(tuán)的交聯(lián)聚合物，理化性質(zhì)穩(wěn)定，不受無(wú)機(jī)鹽類(lèi)與強(qiáng) 離子、低分子化合物的干擾，為一類(lèi)吸附和篩選性能相結(jié)合的分離材料，已廣泛用于分離、純化中藥有

19、效成分。芍藥苷為具有一定極性的單萜苷類(lèi)化合物，考慮洗脫劑為乙醇，選擇弱或非極性樹(shù)脂較為合適。2.1樹(shù)脂柱預(yù)處理 使用前干燥大孔樹(shù)脂置于95%乙純中浸泡過(guò)夜,再用蒸餾水洗至無(wú)醇味備用。2.2上樣干膏，以適量水加熱溶解后，緩慢加到處理好的樹(shù)脂柱(干膏和樹(shù)脂 比1:15)上，平衡 2 h。2.3水洗除雜先用水洗至還原糖反應(yīng)成陰性 (Molisch反應(yīng)檢測(cè)：在糖的水溶液中加入萘酚酒精溶液，然后沿試管壁小心注入濃硫酸，不要震動(dòng)試管，則在兩層液面之間就能形成一個(gè)紫色環(huán)。)且洗脫液無(wú)色澄清。2.4洗脫芍藥苷用 20乙醇洗至芍藥苷量很少(uV檢測(cè))。uV定性檢測(cè)芍藥苷并確定收集含芍藥苷洗脫液，減壓濃 縮得浸膏

20、，置真空干燥箱，干燥 24 h即 得。制得 (總)芍藥苷性狀為淡黃、疏松粉末，味苦。2.5大孔吸附樹(shù)脂再生使用后大孔樹(shù)脂用 95乙醇洗脫至呈灰白色，用蒸餾水沖洗至無(wú)乙醇味，或加稀堿浸泡 24 h，蒸餾水沖洗至中性，顯淺灰色即可備用。3、分析測(cè)定3.1薄層分析3.1.1薄層板制作在研缽中加入一定量0.2%羥甲基纖維素鈉水溶液,再加入適量硅膠G粉（固液比為1：3）,調(diào)和均勻成黏稠狀且無(wú)氣泡,取一定量置于載玻片上震動(dòng)鋪開(kāi)攤平厚約0.2到0.3mm,晾干,再置于105-110烘箱中活化2-3小時(shí),置于干燥器中冷卻備用。3.1.2薄層分析對(duì)照品溶液配制精密稱(chēng)定對(duì)照品約10 mg，置 5 mL量瓶中，加

21、20乙醇溶解 ，稀釋至刻度 ，搖勻 ，密塞，即得。 薄層層析鑒定用點(diǎn)樣微量進(jìn)樣器吸取取赤芍總苷樣品供試液 、芍藥苷對(duì)照品(含芍藥苷約 2 mgmL)溶液各510L（分3-5次點(diǎn)完，每點(diǎn)一次吹干再點(diǎn)，點(diǎn)同心園）分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，點(diǎn)樣的直徑不超過(guò)5mm，。點(diǎn)樣距離一般為1-1.5cm，以氯仿/二氯甲烷一醋酸乙酯-甲醇-甲酸(40：5：10：0.2)或者氯仿-甲醇5:1為展開(kāi)劑展開(kāi)，薄板浸入深度約為0.5cm。當(dāng)展開(kāi)劑前緣離頂端1cm時(shí)取出晾干，噴以5香草醛硫酸溶液 ，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰 ，則供試品與對(duì)照品在相應(yīng)的位置上顯一樣的藍(lán)紫色斑點(diǎn)，計(jì)算比移值Rf并畫(huà)圖。3.2含量測(cè)定(芍藥總苷)3.2.1測(cè)定波長(zhǎng)的選擇 對(duì)照品溶液和供試品溶液在 200nm700nm進(jìn)行掃描，找出在什么波長(zhǎng)下有最大吸收峰(陰性對(duì)照溶液無(wú)吸收峰)，試驗(yàn)選擇測(cè)定波長(zhǎng)(230nm)。3.2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱(chēng)取干燥恒重芍藥苷對(duì)照品20mg于 100 ml量瓶中，加20%乙醇完全溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得0.2mgml標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液