反相高效液相色譜法測定蔬菜鮮樣中硝酸鹽_圖文

1、楊華梅摘要:目的采用反相高效液相色譜一二極管陣列檢測器法測定蔬菜鮮樣中硝酸鹽含量?！痉椒ㄟx擇四丁基澳化銨(TBA.Br作為離子對試劑,與硝酸根陰離子形成中性締合物,在甲醇一1.25mmol/L混合磷酸鹽流動相中,被非極性鍵合相桂(ODS分離并定量檢出。結(jié)果在此檢測條件下。硝酸鹽有很好的線性(r=0.9999,最小檢出限為0.01ms:L。相對標(biāo)準(zhǔn)差小于5%,回收率在87.6%-99.4%之間。結(jié)論該法適用于不同硝酸鹽量的蔬菜樣品測定。美鍵詞:反相高效液相色譜;蔬菜鮮樣;硝酸鹽,.DETERMINATION OF N盯RATE IN FRESH VEGETABLES BY HPLC yAG Hl

2、比a-m2i.(Taizhou Center fID話et2se Control and P他vention。Taizhou225300。ChinaAbstract:ObjectiveTo determinate the contents of nitrate in舶sh vegetables by us血g diode array detector and high performance liqaid chromatography.Methodsr11le separation was performed with tetrabutyl ammonium dissolved in meth

3、and-mixed phosphate(18:82buffer鵝mobile phase at a flow rate of1.Oml/min and accomplished witll0DSC18c01.nrnn.ResultsUnder the detection conditions,the results OR nitrate got a good linear(r=0.9999,the detection limit Wag0.01mL The relative standard deviation Wills less th明5%.The recovery w鵲between87

4、.6%一99.4%.ConclusionJ11圮method is simple,rapid and accurate。and it is suitable tO detect various contents of nitrate in vegetables.Key words:High performance liquid chromatography;Fresh vegetables;Nitrate眾所周知,日攝入硝酸鹽含量超過正常負(fù)荷時,將會危害人體健康.人體攝入的硝酸鹽大約80%來自蔬菜【1。因此研究準(zhǔn)確方便的蔬菜硝酸鹽含量的分析方法非常有意義。目前。我國尚未對蔬菜中硝酸鹽的測定方法

5、作出統(tǒng)一規(guī)定.國內(nèi)外文獻(xiàn)報道的檢測方法主要有:酚二磺酸法“、鎘柱還原分光光度法嘲、紫外分光光度法口】、離子色譜法【4、毛細(xì)管電泳間接測定法伽、電化學(xué)法【6】和快速測定法【7】等。本實驗采用反相高效液相色譜一二極管陣列檢測器法對新鮮蔬菜樣品進(jìn)行了定性定量檢測?；厥章?、精密度、檢出限均得到較滿意的結(jié)果。l實驗部分1.1主要試劑與儀器甲醇:光譜純:去離子水:18.36MQ/em飽和硼砂溶液:50.0r/L,稱取5.O硼酸鈉(Na2B.0710H.,O,溶于100ml熱水中,冷卻后備用;島津LCIOA液相色譜儀(ClassVP5.0型二極管陣列檢測器、LC一10A溶劑輸送泵、HS色譜數(shù)據(jù)工作站V6.2

6、:0.45Ixm微孔濾膜;艾科浦U系列純化水機(jī)(AWJ2b-10_U1.2色譜條件色譜柱:Shimpack CLCODSm6x150mill;預(yù)柱:Shimpack C一0DS:流動相:甲醇+1.25mmol/L混合磷酸鹽.含3mmol/L四丁基溴化銨,配比為18+82;流速:1.0ml/min;柱溫:25;檢測波長220am;進(jìn)樣量:20山;保留時間定性,峰面積外標(biāo)法定量。1.3樣品預(yù)處理1.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作用硝酸鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液配制含硝酸鹽分別為1.0、2.0、4.0、8.0、10.0、20.O、40.O、60.0、80.0“s/ml系列標(biāo)準(zhǔn)工作液。以上述色譜條件,對系列標(biāo)準(zhǔn)工作液進(jìn)行分析,采用

7、多點(diǎn)線性校正,建立峰面積一硝酸鹽濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線,回歸方程為y=5.5x104x+4.5x104線性相關(guān)系數(shù)r=0.9999。根據(jù)UPAC的規(guī)定3倍噪音為樣品檢出限,本方法的檢出限為O.Ol mS/L。見圖1。1.5樣品測定采集市場售賣的6種蔬菜采用本法做平行試驗。實驗結(jié)果見表1。當(dāng)稱取量為10g時,最低檢出濃度為5.130mg/kg。由表l 測定結(jié)果可見,反相高效液色譜一二極管陣列檢測器法對含硝酸鹽高的樣品(如青菜、芹菜等監(jiān)測效果更好。3(102(01000I2345678mm400=200Orain圈1硝酸鹽標(biāo)準(zhǔn)的色譜圖(保留時間:6.45血圖2樣品中硝酸鹽的色譜圖(保留時同:6.50miII

8、表1樣品中硝酸鹽含量測試結(jié)果(/'l=6.mg瓜g本方法用飽和硼砂溶液和水從待測樣品中提取硝酸鹽,無須用沉淀劑去除蛋白質(zhì),用吸附劑去除色素,因為樣品中蛋白質(zhì)和色素在5rain之前出峰,對硝酸鹽的檢測不構(gòu)成干擾,因此大大縮短了樣品前處理的時間。2.2精密度和回收試驗表2硝酸鹽加標(biāo)回收率試驗結(jié)果I lag.xlff2精密度試驗配制1.0、5.0、20.0讎,/mi3種標(biāo)準(zhǔn)溶液,各進(jìn)行7次測定,硝酸鹽RSD為0.36%一2.0%,結(jié)果見表3。表3硝酸鹽精密度試驗結(jié)果(1ag/m12.3與鎘柱還原法對照試驗將采集的卷心菜洗凈、涼干、絞碎。制成勻漿6份,分別用反相高效液相色譜法、鎘柱還原法作對照

9、試驗,測定其硝酸鹽含量。結(jié)果見表4。裹4樣品中硝酸鹽含量的測定結(jié)果比對(尢=6.mg,l【g由表4可見.兩種分析方法對同-樣品的測定結(jié)果通過,檢驗和t檢驗證明,無顯著性差異。高效液相法的平行性和重現(xiàn)性都比常規(guī)鎘柱還原法好,且操作簡便。易于掌握。3小結(jié)本法測定新鮮蔬菜中硝酸鹽含量,具有快速、準(zhǔn)確、靈敏、線性范圍大等優(yōu)點(diǎn),蔬菜中的其他組分如色素、植物性蛋白等對其檢測不構(gòu)成干擾。與經(jīng)典的鎘柱還原法比較,測定結(jié)果差異無統(tǒng)計學(xué)意義。對已裝備了液相色譜儀的實驗室,本方(下轉(zhuǎn)第554頁林麗卿摘要:【目的為提高及延長姬氏染色標(biāo)本的使用壽命和質(zhì)量。方法用中性樹膠對姬氏染色的瘧原蟲血膜涂片標(biāo)本加蓋玻片身片。結(jié)果經(jīng)

10、教學(xué)實驗使用觀察,標(biāo)本顏色不褪,形態(tài)不變,結(jié)構(gòu)清晰,效果滿意。【結(jié)論用中性樹膠對姬氏染色的瘧原蟲血膜涂片標(biāo)本加蓋玻片封片,可提高及延長姬氏染色標(biāo)本的使用壽命和質(zhì)量。關(guān)鍵詞:中性樹膠;封片;瘧原蟲,.,一,。,.,一,:,!l7。r/.??！眧。姬氏染色法是觀察血液及骨髓細(xì)胞之原蟲常用的染色方法之一。隨著醫(yī)療水平的不斷提高.寄生蟲病的減少,使標(biāo)本的來源日益困難。因此,提高及延長姬氏染色標(biāo)本的使用壽命和質(zhì)量就更具有現(xiàn)實意義。為此.作者對姬氏染色的部分瘧原蟲標(biāo)本用中性樹膠加蓋玻片封片。經(jīng)教學(xué)實驗使用觀察,獲取了較滿意的效果?，F(xiàn)介紹如下。1試劑和方法1.1中性樹膠(Neutralbalsam,為國產(chǎn)天

11、然樹膠,市售的均為液態(tài)成品,購買后即可使用,一般濃度應(yīng)適中。若濃度過高,可加入二甲苯稀釋;濃度過低時打開瓶蓋置室溫中幾天即可。1.2方法瘧原蟲薄血膜玻片標(biāo)本.由熱帶醫(yī)學(xué)研究所陳沛泉教授提供。將血膜涂片標(biāo)本常規(guī)姬氏染色。徹底干燥后。用上述中性樹膠直接滴一小滴到涂片上染色的血膜區(qū)域。并用蓋玻片蓋上,輕輕加壓,保證中性樹膠呈一薄層,同時使蓋玻片與載玻片緊緊粘牢fl】。放于室內(nèi)通風(fēng)處,待樹膠干燥后方可使用。2結(jié)果作者單位:廣州中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院西醫(yī)基礎(chǔ)實驗中一tL,廣州.5l蝴用以上方法封片后,標(biāo)本經(jīng)實驗教學(xué)使用達(dá)50多次,顏色不褪,形態(tài)不變,結(jié)構(gòu)清晰,不會發(fā)生未封片保存的標(biāo)本那種褪色、霉變等現(xiàn)象。

12、3討論中性樹膠是一種天然樹脂.二甲苯溶解后是淺黃色透明油狀液體,呈中性反應(yīng),不溶于水。折光率1.57%(玻璃折光率1.51%,干燥后結(jié)成透明無色固體.不會出現(xiàn)收縮,變黃紋裂等現(xiàn)象。中性樹膠中的二甲苯是一種透明劑,可使涂片標(biāo)本的結(jié)構(gòu)更加透亮,清晰。由于中性樹膠封片牢固.蓋玻片與載玻片間膠合干固后難以分離,可保證被封周的血膜染色區(qū)域與外界隔絕,不易受外界各種有害的理化、生物因素侵入的影響。所以標(biāo)本不會發(fā)生褪色、霉變等現(xiàn)象。參考文獻(xiàn):【l】韋雅英.中性樹膠封固保存血液與骨髓染色涂片J.實用醫(yī)技雜志.2004,(01:53.要J】.青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院學(xué)報。1998,(01:“.【收稿日期:200r705l

13、(上接第544頁法擴(kuò)展了儀器的檢測范圍,并且大大提高工作效率.很值得推廣。參考文獻(xiàn):1王亮.王朝衣,潘璃。等.酚二磺酸分光光度法測定葉菜類硝酸2】食品衛(wèi)生檢驗方法(理化部分,Isl.北京:中國標(biāo)準(zhǔn)出版社.2004,259264.鹽J.理化檢驗一化學(xué)分冊。2004.40(5,288289.4蔣蓉.金玉娥,汪國權(quán).離子色譜法測定蔬菜、水果中的亞硝酸鹽和硝酸鹽J】.分析儀器,2003(4:2931.5】Nevin ztekJn,M,Said Nulku and F.Beclia Erim.Simultaneous&-termination of nitrite and nitrate in meat products and vegetables by capillary dectrophoresisJ.Food Chemistry.2002,76(1:103-106.【6】Micanla Badea,AzlzAmine,Giuseppe Palleseh,i DanilaMoscone。GiuliaVolpe.AntoneIla Cumll.i