DNA片段凝膠回收試劑盒 (離心柱型)

1、北京三博遠志生物技術(shù)有限責(zé)任公司 Beijing Sunbiotech Co. , Ltd地 址:北京海淀區(qū)東北旺南路 26號電 話:010-6296125162976446傳真 址:陽光生物網(wǎng) Email:marketDNA片段凝膠回收試劑盒 (離心柱型用于瓊脂糖凝膠DNA回收, PCR反應(yīng)產(chǎn)物純化回收, 酶切產(chǎn)物DNA片斷純化回收, 探針標記后純化回收,DNA樣品濃縮等。目錄號:SE0105次 試目錄號:SE01150次目錄號:SE012100次目錄號:SE014500次使用手冊2010年12月,第5版北京三博遠志生物技術(shù)有限責(zé)任公司Beijing Sunbio

2、tech Co. Ltd【三博遠志生物】定貨熱線:010-6296125162976446Email:sunbio【三博遠志生物】定貨熱線:010-6296125162976446Email:sunbio-1-4-一、試劑盒組成、儲存、穩(wěn)定性 試劑盒組成 保存 5次 SE010試用裝50次 (SE011 100次 (SE012 500次 (SE014 溶膠結(jié)合液 BD 室溫 4ml 40ml 80ml 400ml 漂洗液 W 室溫 2.4ml24ml48ml120×2ml第一次使用前按說明加指定量乙醇洗脫液 EB 室溫 1ml 5ml 10ml 50ml 吸附柱 AC 室溫 5個 5

3、0個 100個 500個 收集管(2ml 室溫 5個 50個 100個 500個 說明書室溫1份1份1份1份本試劑盒在室溫儲存 12個月不影響使用效果。注意事項1. 第一次使用前 在漂洗液 W 中按 4:7的比例加入無水乙醇,如包裝為 24ml 漂洗液 W 中,應(yīng)加入 42ml 無水乙醇。 加入后請及時打鉤標記已加入乙醇,以免多次加入!2. 所有的溶液應(yīng)該是澄清的, 如果環(huán)境溫度低時溶液可能形成沉淀, 此時不應(yīng)該直接使用,可在 37水浴加熱幾分鐘,即可恢復(fù)澄清。使用前應(yīng)該恢復(fù)到室溫。3. 儲存于低溫(4或者-20會造成溶液沉淀,影響使用效果,因此運輸和儲存均在室溫下(15-25進行。4. 避免

4、試劑長時間暴露于空氣中產(chǎn)生揮發(fā)、氧化、PH 值變化,各溶液使用后應(yīng)及時蓋緊蓋子。2.溶膠液/結(jié)合液中含有刺激性化合物, 操作時要戴乳膠手套, 避免沾染 皮膚,眼睛和衣服。若沾染皮膚、眼睛時,要立即用大量清水或者生 理鹽水沖洗。3.回收的 DNA 量和起始 DNA 的量,洗脫體積, DNA 片斷大小有關(guān)。 一般回收的量為 5-25g ,大小為 100bp-10kb 的 DNA 片段,回收率可 達 85%-95%。更大或更小回收效率較低。特別是大于 50kb 或小于 10bp 效率更低。4. 切膠回收時, 紫外燈觀察對 DNA 片段有損壞作用, 應(yīng)該盡可能使用能 量低的長波紫外線,并且盡可能的縮短

5、紫外線下處理的時間。5. 洗脫液 EB (10mMTris-HCl,1mM EDTA,PH 8.0有可能影響下游酶 切、連接、測序等反應(yīng), 可以使用水洗脫 。用水洗脫 DNA 片段應(yīng)該保 存在 -20。五、操作步驟*第一次使用前 在漂洗液 W 中按 4:7的比例加入無水乙醇,如包裝為 2.4m 2.4ml l 漂洗液 W 中,應(yīng)加入 4.2ml 無水乙醇 !(一 、以下為瓊脂糖凝膠 DNA 回收操作步驟。1. 在長波紫外燈下, 用干凈刀片將所需回收的 DNA 條帶切下, 盡量切除 不含 DNA 的凝膠,得到凝膠體積越小越好。2.將切下含有 DNA 條帶凝膠放入 1.5ml 離心管,稱重。先稱一

6、個空 1.5ml 離心管重量,然后放入凝膠塊后再稱一次,兩次重量相減, 得到凝膠的重量。3. 加三倍體積溶膠/結(jié)合液 BD。如果凝膠重為 0.1g ,其體積可視為 100100l ,則加入 300300l 溶膠液。 如果凝膠濃度大于 2%,應(yīng)加入 6倍體積溶膠液。凝膠塊最大不能超過 400mg, 如果超過 400mg ,請用多個離心柱進行回收?！救┻h志生物】定貨熱線:010-6296125162976446Email:sunbio【三博遠志生物】定貨熱線:010-6296125162976446Email:sunbio-3-5-4.50-60水浴放置 10分鐘(或直至膠完全溶解 。每 2-3

7、分鐘渦旋振 蕩一次或顛倒離心管 2次幫助加速溶解。 5.將上一步所得溶液冷卻后加入吸附柱 AC 中(吸附柱放入收集管中 , 12,000rpm 離心 1分鐘,倒掉收集管中的廢液。如果總體積超過 750l,可分兩次將溶液加入同一個吸附柱 AC 中。6.加入550l 漂洗液 W , 12,000rpm 離心 1分鐘后,棄去廢液;(請先檢查是否已加入無水乙醇!7.重復(fù)步驟 6一次(小于 500bp 或濃度低的樣品,不重復(fù)此步驟。 一般樣品不需要此步驟純度完全可以 ; 8.將吸附柱 AC 放回空收集管中,12,000rpm 空離心 2分鐘,盡量除去 漂洗液, 以免漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應(yīng)。9. 取

8、出吸附柱 AC,放入一個干凈的離心管中, 在吸附膜的中間部位 加 50l 洗脫緩沖液 EB(洗脫緩沖液事先在 65-70水浴中加熱效果更 好 ,室溫放置 2分鐘, 12,000rpm 離心 1分鐘。 如果需要較多量 DNA , 可將得到的溶液重新加入離心吸附柱中,離心 1分鐘。洗脫體積越大,洗脫效率越高,如果需要 DNA 濃度較高,可以適當減少洗脫體 積, 但是最小體積不應(yīng)少于 30l,體積過小降低 DNA 洗脫效率,減少產(chǎn)量。(二 、以下為 PCR 產(chǎn)物或者酶切片段等 DNA 純化操作步驟。1. 每 100l PCR 擴增后體系或者酶切后體系加入 300l 溶膠/結(jié)合液 DB , 充分混勻。

9、 (如果初始體系小于 100l , 請事先用雙蒸水調(diào)整至 100l 。 2. 將上一步所得溶液加入吸附柱 AC 中 (吸附柱放入收集管中 ,室溫放 置 1分鐘,12,000rpm 離心 1分鐘,倒掉收集管中的廢液。 3-6.從此步驟開始和瓊脂糖凝膠 DNA 回收的操作步驟 6-9完全一致 ,請參見瓊脂糖凝膠 DNA 回收步驟 6-9。六、疑難解答(Trouble shooting 出現(xiàn)的問題 可能的原因建議解決方法核酸產(chǎn)量低或者純度 不高試劑盒儲存非最佳溫度 存放在室溫(15-20 洗脫液或者試劑暴露于減 少它們有效性的條件下 每次用完后立刻蓋緊蓋子,以免 溶液蒸發(fā),PH 改變和污染。 漂洗液

10、 W 中忘記加無水 乙醇第一次實驗時, 在漂洗液 W 中加 入指定量無水乙醇。 試劑沒有和 PCR 凝膠溶 液或其他要純化的溶液充 分混勻加入每個試劑后都要充分混勻洗脫后回收率低使用了非最佳的洗脫液, 洗脫液的高 PH 非常重要不要用水洗脫,用試劑盒帶的洗 脫液 EB.回收后 DNA 下游酶切 不能切開或者酶切不 完全忘記做空離心,乙醇抑制 了酶切反應(yīng)不要省去步驟 8空離心,在空氣 中晾幾分鐘,讓殘留乙醇揮發(fā)。 一些硅基質(zhì)膜成分一起洗 脫下來,抑制了酶切反應(yīng)將洗脫 的回收 DNA 溶液 13, 000rpm 再離心一分鐘,小心取上 清使用,純化的 DNA 產(chǎn)物 OD 260數(shù)值異常偏高 一些硅

11、基質(zhì)膜成分一起洗 脫下來,干擾了分光光度 計讀數(shù)將洗脫 的回收 DNA 溶液 13, 000rpm 再離心一分鐘,小心取上 清使用,洗脫液中不含 DNA在初始處理材料中沒有 PCR 產(chǎn)物開始回收前, 用瓊脂糖凝膠 /EB電 泳檢測 PCR 產(chǎn)物?！救┻h志生物】定貨熱線:010-6296125162976446Email:sunbio【三博遠志生物】定貨熱線:010-6296125162976446Email:sunbio-2-6二、原理簡介三博遠志自用瓊脂糖凝膠 DNA 回收試劑盒, 是經(jīng)過大量實驗得出的 最佳制品,該試劑盒回收差異小、得率高、操作簡便、質(zhì)量穩(wěn)定,三博 遠志 PCR 測序成功

12、率高有試劑盒的功勞!可大量供貨!Sunbiotech DNA 片段凝膠回收試劑盒,利用硅膠膜在低 pH 值高鹽 狀態(tài)下可特異性吸附 DNA , 在低鹽高 p H 值洗脫的原理, 可從 TA E 或 TB E 瓊脂糖凝膠中回收 DNA 片段,可去除 PCR 反應(yīng)中的 dNTPs 、引物、礦 物油和聚合酶等及 DNA 樣品中的其它雜質(zhì),得到的 DNA 片段可用于酶 切、連接、測序、 PCR 反應(yīng)模板等后續(xù)操作。三、試劑盒特點1. 離心吸附柱內(nèi)硅基質(zhì)膜全部采用進口世界著名公司特制吸附膜,柱與柱之間吸附量差異極小,可重復(fù)性好。 克服了國產(chǎn)試劑盒膜質(zhì)量不 穩(wěn)定的弊端。2. 使用了優(yōu)質(zhì)溶膠液,不含傳統(tǒng)溶膠液的碘化鈉和高氯酸鹽,不抑制回收后酶切、連接克隆等下游反應(yīng)。3. 獨特的溶膠液/結(jié)合液配方,將溶膠和結(jié)合兩種功能統(tǒng)一,因此一個試劑盒可以運用于瓊脂糖 DNA 回收,也可以 PCR 產(chǎn)物清潔純化,酶切 產(chǎn)物純化回收等多種功能。4. 快速、方便,不需要使用有毒的苯酚、氯仿等試劑,也不需要乙醇沉淀。四、注意事項(實驗前必須首先閱讀這部分! 1. 所有的離心步驟均在室溫完成,使用轉(zhuǎn)速可以達到13,000rpm的傳統(tǒng)臺式離心機,如Eppendorf 5415C 或者類似離心機。接前表出現(xiàn)的問題 可能的原因建議解決方法回收后 DNA 的濃度太 低起始的處理材料中 DNA 含量太低加大處理量和減少洗脫液的