Western+Blotting試驗(yàn)試劑配制

1、Western Blotting試驗(yàn)試劑配制1.74mg/ml (10mmol/L)PMSF PMSF 異丙醇 100ml 溶解后，分裝于離心管中，-20保存。 （神經(jīng)毒，注意防護(hù)）10SDS SDS 10g 蒸餾水至 100ml 50水浴下溶解，室溫保存。如在長(zhǎng)期保存中出現(xiàn)沉淀，水浴溶化后，仍可使用。 10過(guò)硫酸胺（AP） 過(guò)硫酸胺 1g 超純水 10ml 溶解后，分裝于200 ul薄壁管中，20保存，灌膠前取出，用后即廢棄。 分離膠緩沖液 1.5mol/L Tris·HCl（） Tris (MW121.14) 先溶于三蒸水或超純水40 ml，1N HCl調(diào)pH至，最后用三蒸水或超

2、純水定容至100ml，4保存。 濃縮膠緩沖液 0.5mol/L Tris·HCl（） Tris (MW121.14) 先溶于三蒸水或超純水40 ml，1N HCl調(diào)pH至，最后用三蒸水或超純水定容至100ml，4保存。30Acr/Bic 丙稀酰胺（Acr） 甲叉雙丙稀酰胺（Bic） 超純水至 100ml 溶解后4避光保存。使用時(shí)恢復(fù)至室溫且無(wú)沉淀。 單去污劑裂解液（PMSF）： 1mol/L Tris·HCl（） 2.5ml NaCl TritonX-100 0.5ml 蒸餾水至 50ml 混勻后4保存。使用時(shí)，加入PMSF至終濃度為100 g/ml（ ml裂解液加入 mg

3、/ml PMSF50 l）。 RIPA裂解液：RIPA裂解液終濃度母液母液使用量（100 ml）50 mM100 mM50 mlNaCl150 mM固體0.8766 g脫氧膽酸鈉1%固體1 gTriton x-1001%液體1 mlSDS0.1%101 mlEDTA1 mM100 mM1 mlH2O37 ml-20保存。用前按每90 ml加入10 mM PMSF 10 ml（神經(jīng)毒，注意防護(hù)）。Dulbeccos磷酸鹽緩沖液（DPBS）NaCl 20g, KCl , KH2PO4 , Na2HPO4 蒸餾水至2500ml考馬斯亮蘭染液 考馬斯亮蘭R250 g先溶于450 ml甲醇中，再加入45

4、0 ml蒸餾水，100 ml冰乙酸，攪拌溶解后，用孔徑1.2 µm的濾紙過(guò)濾，可檢出的蛋白條帶。還原型2XSDS上樣緩沖液 0.5 mol/L Tris·HCl（） ml 二硫叔糖醇（DTT，） mg （1ml）10SDS 4ml溴酚藍(lán) 0.5ml 甘油 2ml 蒸餾水混勻后，分裝，-20保存。 用時(shí)解凍完全溶解后使用。10×電泳液緩沖液 Tris（） 30 g 甘氨酸（） 144 g SDS 10 g 先加蒸餾水至 800 ml，調(diào)pH至，再定容至1000 ml，4保存。用時(shí)10倍稀釋。轉(zhuǎn)移緩沖液 甘氨酸（） g Tris（） g 甲醇 500 ml 蒸餾水至2

5、500 ml 溶解后4保存。 （先用蒸餾水溶解甘氨酸和Tris，然后再加入甲醇，最后補(bǔ)足液體。如果先加入甲醇，溶解甘氨酸和Tris等比較困難） 考馬斯亮蘭染色脫色液甲醇 75 ml冰乙酸 75 ml加蒸餾水至1000 ml。1×麗春紅S染液 麗春紅S g先溶于1 ml的冰乙酸中，加水至100 ml?？苫厥罩貜?fù)使用。10×麗春紅S染液 麗春紅S 2 g 三氯乙酸 30 g 磺基水楊酸 30 g蒸餾水至 100 ml 使用時(shí)將其稀釋10倍。 可回收重復(fù)使用。封閉液 5脫脂牛奶脫脂奶粉 5 g DPBS 100ml 最好現(xiàn)用現(xiàn)配。浸洗液PBST100 µl Tween-

6、20加入200 ml DPBS溶液中混勻。洗脫抗體緩沖液 14.4 mol/L 2- Mercaptoethanol(-巰基乙醇) 700 l（通風(fēng)櫥里加）SDS 2 g 0.5mol/L Tris·HCl（） ml 超純水至 100ml 配制時(shí)，在通風(fēng)櫥內(nèi)進(jìn)行。4保存?？芍貜?fù)使用1次。 （可用可不用） 顯影液（5X） 自來(lái)水（加熱至50） 375 ml （以下藥品加到溫水中） 米吐?tīng)?g 亞硫酸鈉（無(wú)水） g 碳酸鈉（無(wú)水） g 溴化鉀 g 補(bǔ)水至 500 ml 配制時(shí)，上述藥品應(yīng)逐一加入，待一種試劑溶解后，再加入后一種試劑。4保存。使用時(shí)用自來(lái)水稀釋至1倍。 （不需要自己配制，可買柯達(dá)的顯影液，或到專業(yè)的照相器材市場(chǎng)購(gòu)買） 定影液 自來(lái)水（5060） 700 ml （以下藥品按順序加入前者溶解后再加后者） 硫代硫酸鈉 240 g 亞硫酸鈉（無(wú)水） 15 g 冰乙酸 ml 硼酸 g 鉀明礬 15 g（水溫冷至30以下時(shí)再加入） 加水定容至1000 ml，室溫保存。 （不需要自己配制，可買柯達(dá)的定影液，或到專業(yè)的照相器材市場(chǎng)購(gòu)買） 抗體 用一抗稀釋液（可使用封閉液或購(gòu)買碧云天等公司的一抗稀釋液或自己配制其它抗體稀釋液）稀釋至一定濃度使用，建議使用雜交袋（使用之前先檢查一下雜交袋的完整性）。 DAB顯色液DPBS 30 mlNiCl 10 m