細(xì)菌DNA提取試劑盒-柱式

1、細(xì)菌DNA提取試劑盒-柱式Column Bacterial DNAout貨號: M090075產(chǎn)品及特點(diǎn) 本產(chǎn)品是在本公司在本公司細(xì)菌DNAOUT基礎(chǔ)上開發(fā)的柱式升級產(chǎn)品，可以用于絕大多數(shù)革氏陽性和陰性細(xì)菌基因組DNA的快速提取。1. 操作簡單，整個過程不到20分鐘。2. 產(chǎn)率一般在5-20 ug/mL過液培養(yǎng)的飽和菌液（108-109個細(xì)胞）。3. OD260/280一般在以上，可直接用于PCR、酶切、雜交等實(shí)驗(yàn)。4. DNA片段長度一般在40-50 Kb左右。5. 每次提取可以處理0.1-1.5 mL的細(xì)菌，也可以使用菌落。6. 價廉物美，與國外同類產(chǎn)品相比質(zhì)量相當(dāng)，但價格便宜。7. 安全

2、無毒，本試劑盒對人體無害，無腐蝕性和刺激性氣味。規(guī)格及成分 成份50次包裝溶菌酶600 mg溶液A15 mL溶液B7.5 mL溶液C30 mL溶液D5 mL離心吸附柱50套通用洗柱液50 mL通用洗脫液5 mL使用手冊1份運(yùn)輸及保存常溫運(yùn)輸，4保存，有效期一年。使用方法注意：溶液A和溶液B容易產(chǎn)生沉淀，溶液B十分粘稠，均需要放置在65預(yù)熱使沉淀溶解、粘稠度降低，用前充分搖勻。一: 對革氏陰性細(xì)菌樣品1. 將0.1-1.5 mL過夜培養(yǎng)的菌液轉(zhuǎn)移到1.5 mL塑料離心管中， 12,000 rpm室溫離心1分鐘沉淀細(xì)菌，棄上清。2. 加入300 uL預(yù)熱的溶液A到細(xì)菌沉淀中，充分吹打均勻。3. 再

3、加入150 uL 預(yù)熱的溶液B到離心管中，顛倒數(shù)次混勻。此時溶液中可能有白色絲狀懸浮物產(chǎn)生。由于溶液B比較粘稠，可以采取稱量方法取用，150 uL 約等于150-160 mg。也可以將1 mL 槍頭剪去一截再吸取。4. 65放置3-5分鐘。如果室溫放置，DNA產(chǎn)量會降低10-20%。5. 加入200 uL自備氯仿，震蕩混勻10-30秒，此時溶液將呈乳白色。6. 12,000 rpm室溫離心2分鐘。此時上清液將變得透明，中間層有白膜。小心轉(zhuǎn)移上清液到一個新的1.5 mL塑料離心管中，避免觸及中間層的白膜。7. 加入倍體積(約0. 7 mL)的溶液C+溶液D的新鮮混合液（0.6 mL溶液C加0.1

4、 mL溶液D），顛倒混勻后全部轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中，室溫放置至少2分鐘。 8. 12,000 rpm室溫離心1分鐘，DNA將吸附在離心吸附柱的膜上，倒棄收集管中的穿透液。9. 將0.5 mL通用洗柱液加入離心柱中，12,000 rpm室溫離心1分鐘，棄穿透液。10. 重復(fù)上步操作一次。11. 空甩半分鐘去除殘留液體,將離心吸附柱轉(zhuǎn)移到新的1.5 mL離心管中。12. 加50-100 uL通用洗脫液，室溫放置3-5分鐘。13. 12,000 rpm室溫離心1分鐘即得DNA溶液。14. 由于本產(chǎn)品使用的離心吸附柱吸附DNA的能力較強(qiáng)，可以重復(fù)上步操作一次以便得到更多的DNA。15. 直接取5-10

5、uL電泳檢測DNA，其余放冰箱備用。二: 對革氏陽性細(xì)菌樣品1. 將0.1-1.5 mL過夜培養(yǎng)的革氏陽性細(xì)菌12,000 rpm室溫離心1分鐘后, 重懸于0.6 mL溶菌液中（溶菌液配制:30 mL無菌水+600 mg溶菌酶，配制后最好分裝成小管并放-20長期保存，每次只用一小管)，顛倒混勻5-10次后放37保溫至少30分鐘(有的革氏陽性菌種可能需更長時間，需要自己根據(jù)不同的細(xì)菌摸索)。2. 12,000 rpm室溫離心10分鐘，小心棄上清。3. 后續(xù)處理接上面的革氏陰性細(xì)菌提取步驟中的第2步。三: 其他注意事項1. 可以直接使用細(xì)菌菌落提取DNA，操作時直接將細(xì)菌菌落挑入到溶液A中，后續(xù)操作同上。2. 從單個菌落中提取到的DNA較少，所以只用30 uL通用洗脫液洗脫。使用效果圖注:用本產(chǎn)品提取1.0 mL 過夜培養(yǎng)的 Tg1細(xì)菌，DNA最后溶于100 uL TE中，取20 uL上樣。M表示全長的 l DNA,其余均為提取的樣品DNA。背景資料G+和G-細(xì)菌細(xì)胞壁比較細(xì)胞壁特性革氏陰性菌 革氏陽性菌 厚度 10 nm20-80 nm細(xì)胞膜層數(shù) 21肽聚糖（Peptidoglycan）含量 10-20%>50%磷壁酸（Teichoic