《DNA的粗提取與鑒定》活動單

1、優(yōu)選精品文檔歡迎下載選用DNA的粗提取和鑒定知識要點：1.DNA的物理化學(xué)性質(zhì)，尤其是DNA的溶解性;2.二苯胺法鑒定DNA的方法和原理。一、DNA的粗提取的原理思考1:DNA存在于真核生物細(xì)胞的哪些部位？思考2:提取生物大分子的一般思路是什么？1、DNA的性質(zhì):DNA和蛋白質(zhì)的溶解性、對酶、高溫和洗滌劑的耐受性在NaCl溶液中的溶解度對蛋白酶的耐受性對高溫的耐受性對洗滌劑的耐受性DNA蛋白質(zhì)溶解度DNA粗提取的原理有些哪些？i、DNA在mol/LNaCl溶液中溶解度最小ii、DNA不溶于溶液，而蛋白質(zhì)等能夠溶解2、DNA鑒定的原理：在的條件下，DNA遇會被染成。二、DNA粗提取的主要步驟：1

2、、材料選擇：適于作實驗材的材料：選用的生物材料；如雞（紅）血，其適宜作為實驗材料的原因：雞血（紅）細(xì)胞核的DNA含量豐富，材料易得；雞血細(xì)胞極易吸水脹破。哺乳動物紅細(xì)胞呢？2、主要實驗步驟（以雞血紅細(xì)胞為例）：方法：將510mL雞血細(xì)胞液加入20mL中；用玻棒同方1*向攪拌5min;用34紗布過濾，以除去顆粒較大的雜質(zhì)過濾；:破碎細(xì)胞，釋放J西徉；,收集°i*CNA.（格物質(zhì)？.*:目的：破壞細(xì)胞，釋放核物質(zhì)I注意：攪拌不能用力過大，以防止打碎DNA分子；方法：向濾液中加入2倍體積的mol/LNaCl溶液，攪拌1min;：溶解細(xì)胞核;過濾獲?。簝?nèi)DNAX目的：使與DNA結(jié)合的解聚，釋

3、放出;DNA溶解于高溶液N"NaCl溶液中、注意：按同一方向攪拌方法：沿?zé)谙驗V液中緩慢加入蒸儲水，并輕輕按同一方向攪拌，使DNA析 DNA :析出：出，直到;可以在玻棒上收集到黏稠物（或過濾或離心收集黏稠物）目的：降低NaCl溶液濃度達(dá)到mol/L左右，使DNA析出k注意：加入的蒸儲水不能過多，使NaCl溶液濃度過低，DN取會尸方法：向20mL2mol/LNaCl溶液中加入黏稠物，并按同一方向攪拌3min,使DNA充分溶解；過濾，收集濾液；向濾液中貼壁緩慢加入50mL冷凍的95%乙醇，并用玻棒按同一方向緩慢、均勻地攪拌，在玻棒上收集白色絲狀物（DNA）L原理：DNA不溶于中，而蛋

4、白質(zhì)能溶于史二歸納：本實驗中幾次過濾？過濾的目的是什么？過濾一：過濾二：過濾三：本實驗中幾次加入蒸儲水的目的各是什么？第一次：向雞血細(xì)胞液中加入蒸儲水，目的：第二次：向溶解DNA的2mol/LNaCl溶液中加入蒸儲水，目的:拓展：1、以菜花為材料進(jìn)行實驗時，如何獲得核物質(zhì)？取材、剪碎一加入洗滌劑、食鹽一研磨、過濾加洗滌劑的目的：加入食鹽的目的：2、分析教材中方案一、二、三的原理。萬案一：萬案一：方案二：3、探究不同方法、洗滌劑、食鹽用量對DNA粗提取量的影響（說說實驗思路）三、DNA的鑒定：1、方法：取甲、乙兩支試管，并向其中加入5mL（等量）的2mol/LNaCl溶液；向甲試管中加入粗提取的

5、DNA,并攪拌使DNA溶解；向兩支試管中各加入4mL（等量）二苯胺試劑，混勻，沸水中加熱5min,待試管冷卻后，比較兩支試管的顏色（藍(lán)色）變化。2、注意點：實驗中需要對照，目的：證明四、實驗結(jié)果分析與評價1、實驗結(jié)果評價：是否提取到DNA?觀察提取的DNA顏色：如果不是白色絲狀物，說明DNA中的雜質(zhì)較多；二苯胺鑒定：出現(xiàn)藍(lán)色說明實驗基本成功，如果不呈現(xiàn)藍(lán)色，可能所提取的DNA含量低，或是實驗操作中出現(xiàn)錯誤，需要重新制備。2、粗提取得到的絲狀物為什么略帶黃色？實驗提取的DNA粗制品有可能仍然含有核蛋白、多糖等雜質(zhì)。3、影響絲狀物總量的因素有哪些？實驗材料種類和數(shù)量、溶解核DNA時的NaCl溶液濃

6、度、實驗方法、攪拌方法（攪拌不當(dāng)可能破壞DNA）五、案例：（快速閱讀、理解步驟原理）以菜花為實驗材料進(jìn)行DNA的粗提取【實驗材料準(zhǔn)備】將新鮮菜花和體積分?jǐn)?shù)為95%的乙醇溶液放入冰箱冷凍室24h【提取DNA的具體步驟】1、取材稱取30g菜花，去梗取花，切碎。2、研磨將碎菜花放入研缽中，倒入10mL研磨液，充分研磨10min。教材中建議采用洗發(fā)香波、洗滌劑等一些去污劑，使植物細(xì)胞膜破碎，釋放DNA。學(xué)生可以設(shè)置對照實驗，比較哪一種方法可以提取到純度更高的DNA。一般實驗室提取高純度的DNA都采用一種陽離子去污劑一十六烷三甲基澳化俊分離緩沖液，使細(xì)胞膜破碎，同時將DNA與植物中多糖等雜質(zhì)分開，再用氯

7、仿一異丙醇混合液（體積比為24：1）抽提去除雜質(zhì)蛋白，得到高純度的DNA。3、過濾在漏斗中墊上尼龍紗布，將菜花研磨液過濾到燒杯中（有條件的學(xué)?？蓪V液倒入塑料離心管中進(jìn)行離心，用1000r/min的轉(zhuǎn)速，離心25min,取上清液放入燒杯中）。在4c冰箱中放置幾分鐘后，再取上清液。4、沉淀將一倍體積的上清液倒入兩倍體積的體積分?jǐn)?shù)為95%的預(yù)冷乙醇溶液中，并用玻璃棒緩緩、輕輕地攪拌溶液（玻璃棒不要直插到燒杯底部）。沉淀35min后，可見白色的DNA絮狀物出現(xiàn)。用玻璃棒緩緩旋轉(zhuǎn)，將絮狀物纏繞在玻璃棒上。六、訓(xùn)練題：1 .在DNA粗提取的過程中，兩次向燒杯中加入蒸儲水的作用分別是A.稀釋血液；沖洗樣品

8、B.使血細(xì)胞破裂；降低氯化鈉的濃度C.使血細(xì)胞破裂；增大DNA的溶解度D.使血細(xì)胞破裂；沖洗樣品2 .下列實驗中所用試劑錯誤的是A.在觀察植物細(xì)胞有絲分裂實驗中，使用醋酸洋紅溶液使染色體著色B.在提取葉綠體色素實驗中，使用丙酮提取色素C.在DNA的粗提取與鑒定實驗中，使用氯化鈉溶液析出DNAD.在蛋白質(zhì)的鑒定實驗中，使用蘇丹出染液鑒定蛋白質(zhì)3 .NaCl的物質(zhì)量為多少mol/L時，DNA的溶解度最小A.0.12B.0.13C,0.14D,0.154 .在提取的細(xì)胞核物質(zhì)的溶液中，加入2mol/L的NaCl溶液40ml目的是A.溶解雜質(zhì)B.溶解蛋白質(zhì)C.析出DNAD.溶解DNA5 .從細(xì)胞核中提

9、取DNA所用的提取溶液是A.NaCl溶液B.酒精C.蒸儲水D.檸檬酸鈉6 .提取含雜質(zhì)較少的DNA所用的溶液A.NaCl溶液B.冷卻90%的酒精C.加熱95%的酒精D.冷卻95%的酒精7 .DNA遇二苯胺(沸水浴)時，會染成A.磚紅色B.紅色C.紫色D,藍(lán)色8 .可以鑒定DNA的物質(zhì)是A.斐林試劑B.95%的酒精C.甲基綠溶液D.二苯胺溶液9 .破譯生物基因組DNA的遺傳信息或進(jìn)行基因操作，首先要提取細(xì)胞核DNA。下列不適宜彳乍為DNA提取的實驗材料是A.雞血細(xì)胞B.蛙的紅細(xì)胞C.人的成熟紅細(xì)胞D.菜花10 .(多選)下表是關(guān)于DNA粗提取與鑒定實驗中所使用的材料、操作及其作用的表述.正確的是

10、試齊操作作用A檸檬酸鈉溶液與雞血混合防止血液凝固B蒸儲水與雞血細(xì)胞混合保持細(xì)胞形狀C蒸儲水加入到溶解有DNA的NaCl中析出DNA絲狀物D冷卻的酒精加入到過濾后DNA的NaCl中產(chǎn)生特定的顏色反應(yīng)11 .(多選)下列關(guān)于DNA粗提取與鑒定的說法不正確的是A.洗滌劑能瓦解細(xì)胞膜，同時也能控制DNA在NaCl溶液中的溶解度B.在探究洗滌劑對植物細(xì)胞DNA提取的影響實驗中，需要控制的變量是洗滌劑和植物細(xì)胞C.常溫下，DNA遇二苯胺被染成藍(lán)色D.將濾液放在6075c的恒溫水浴箱中保溫1015分鐘能去除濾液中的雜質(zhì)，其原理是利用了DNA和蛋白質(zhì)對高溫耐受性的不同12 .如圖所示是關(guān)于“DNA的粗提取和物理性狀觀察”實驗:(1)實驗材料