乙型肝炎病毒的基因工程與疫苗_圖文

1、 種方式， 一種是 等把 ， 基因取 代 的晚期基因之大部， 包裝成 病 毒的形式感染猴腎細(xì)胞。用一早期基因溫度敏 感的 病毒突變株為晚期基因供體。 在溫 度高的情況下，幫助病毒由于早期基因缺乏而 不會(huì)生長(zhǎng)。 只有當(dāng)重組 也存在的 情況下， 二種病毒表達(dá)產(chǎn)物發(fā)生互補(bǔ)而能繁殖， 結(jié)果用此法得到了 的 表達(dá)。 表達(dá) 的 一起種到培養(yǎng)基中進(jìn)行同源重 組， 在 選 擇培養(yǎng)基上篩選出含有肝炎基因的克隆。對(duì)此 克隆的牛痘病毒經(jīng) 分析， 證明在原來(lái)野 生型的牛痘病毒 基因部位變長(zhǎng)了， 此長(zhǎng)出 的部位即為帶 的重組基因。 將此 重組肝炎一 牛痘病毒在細(xì)胞中培養(yǎng) 小時(shí)，可 以從 毫升的培養(yǎng)液 （ 個(gè)細(xì)胞）中得

2、到 微克 ， 并形成 毫微米顆粒，用 甲硫氨酸標(biāo)記法發(fā)現(xiàn)，分泌的 中已糖 化。 約一半糖化并裝配成 毫微米顆粒分 泌到培養(yǎng)液中。 產(chǎn)量達(dá) 微克 ， 細(xì)胞。 這種形式表達(dá)的優(yōu)點(diǎn)是除了糖化及裝配外，出 結(jié)果快， 只要 天。缺點(diǎn)是 有嚴(yán)格的 包裝規(guī)格， 故對(duì)插人的外源 分子大小有 限制。同時(shí)由于有完整的溶源性病毒存在，實(shí) 驗(yàn)周期短，影響對(duì)一些結(jié)果的分析。 等及何葆光等 進(jìn)行的另一種即把 的 復(fù)制起點(diǎn)及啟動(dòng)子切出，克隆到一去毒性順序 切 的 中，接到 基因之 前，促進(jìn) 表達(dá)。然后用一染色體中原已整合 抗原基因的猴腎細(xì)胞株來(lái)供應(yīng)抗原，促 進(jìn)它復(fù)制。 這樣盡管沒(méi)有包裝好的病毒存在， 仍能很好地進(jìn)行復(fù)制及表

3、達(dá)。 表達(dá)量與 乙肝基因工程的應(yīng)用和評(píng)價(jià) 綜上所述 ， 乙型肝炎病毒基因工程的發(fā)展 ， 除使人們對(duì)該病毒結(jié)構(gòu)功能的 理 解 迅 速 深 化 外，在實(shí)用科學(xué)上也帶來(lái)直接的好處。用基因 工程的方法制備乙型肝炎疫苗， 可把 基因 改造成只產(chǎn)生有保護(hù)性而無(wú)感染 性的 疫苗材 料，從而可以避免從 攜帶者血中提取 時(shí)制備疫苗所帶來(lái)的乙型肝炎或其他人 類(lèi)病原體感染的危險(xiǎn)性，也可避免從帶毒者采 血對(duì)獻(xiàn)血員健康可能造成的不利因素。從原料 來(lái)源方面，基因工程的優(yōu)點(diǎn)尤為顯著。所以現(xiàn) 在認(rèn)為基因工程是有可能解決全民的乙肝預(yù)防 問(wèn)題的。此外， 它還可用于發(fā)展診斷用品。 產(chǎn)量相似。 表達(dá)的 也能進(jìn)行糖化及分泌 等。 由于

4、在接人的 基因中可不 含前 ， 故說(shuō)明 的生成過(guò)程中前 基因在大腸桿菌中由于表達(dá)不理 是不需要的， 也說(shuō)明 不需切去信號(hào)膚就 想， 故應(yīng)用前景不大， 但它對(duì) 的表達(dá)是 可通過(guò)質(zhì)膜從細(xì)胞分泌出去，這種情況并不多 成功的，可用作診斷。開(kāi)展核心及 。 抗原體系 見(jiàn)。 統(tǒng)的檢測(cè)。作為疫苗的 其實(shí)際應(yīng)用需 ， 以上所述的 在傳代細(xì)胞、 細(xì)胞、 依靠其他表達(dá)系統(tǒng)。 現(xiàn) 基因能在細(xì)胞 ， 細(xì)胞等組織培養(yǎng)中的表達(dá)，均未完 培養(yǎng)或酵母中進(jìn)行表達(dá)，今就其制成乙型肝炎 全脫離可能有致癌因子系統(tǒng)，表達(dá)產(chǎn)物不能作 基因疫苗時(shí)存在不同程度的優(yōu) 缺點(diǎn) 進(jìn) 行 初步 為乙型肝炎疫苗。到目前為止，在組織培養(yǎng)中 評(píng)價(jià)。 最有希望

5、的是用牛痘病毒作為繁 殖 的 組織培養(yǎng)基因疫苗由于其表達(dá)好，可分泌 運(yùn)載病毒。 牛痘病毒是非致癌病毒。 由于此病毒 到細(xì)胞外， 容易糖化，抗原性強(qiáng)， 產(chǎn)量又高，故 分子量較大， 其重組技術(shù)與一般的不同。 在國(guó)外發(fā)展很快。幾家著名的公司如 ， 等 在這方面做了出色的工作。他們把 等 都愿意發(fā) 展組織培養(yǎng) 基因 基因連接到牛痘病毒某早期基因啟動(dòng) 子之 后， 疫苗。但對(duì)組織培養(yǎng)基因疫苗看法有分歧，因 成為肝炎一 牛痘 病毒重組基因。 將 此重組基因 為至今利用細(xì)胞培養(yǎng)表達(dá)尚無(wú)完全脫離癌特性 插入到牛痘病毒 基因中， 基因就會(huì)失 的系統(tǒng)。有的認(rèn)為有癌特性的組織培養(yǎng)細(xì)胞可 活。 等把野生型的牛痘病毒和重

6、組基因 一 以作為疫苗 生產(chǎn)原料，只要把疫苗中的致癌基 成鋁佐劑疫苗，取不同劑量注人小鼠腹腔后檢 因（ 去除， ） 即可上人體； 有的則不同意 這種觀點(diǎn)。作者認(rèn)為必須采取謹(jǐn)慎的態(tài)度。因 查其免疫原性。結(jié)果表明重組疫苗引起 外 小 為至今我們對(duì)人類(lèi)致癌的原因本質(zhì) 還不 清楚。 鼠血清陽(yáng)轉(zhuǎn)的 微 克蛋 白質(zhì) ，人 微克蛋白質(zhì)。給 僅是近幾年才分離出來(lái)，幾乎在機(jī)體 血漿來(lái)源的疫苗為 中廣泛存在。 關(guān)鍵是 在何種情況下 猴肌肉接種 次疫苗，兩種疫苗均可誘發(fā)維持 年以上的高滴度抗體。這說(shuō)明重組疫苗在免 可以活化， 目前我們還不太清楚。 藥品或疫苗中 沒(méi)有 不等于不致癌， 前還沒(méi)有靈敏 。 目 的檢測(cè)方法

7、加以鑒定。對(duì)人體的致癌表現(xiàn)往往 要在數(shù)十年后才能見(jiàn)分曉。 例如七十年代末， 美 國(guó)突然發(fā)現(xiàn)不少十七、 八歲的女子患子宮頸癌， 經(jīng)周密調(diào)查后才知道，這些女子的子宮透明細(xì) 疫原性 與人血漿疫苗無(wú)明顯區(qū)別。將酵母基因 疫苗接種黑猩猩， 進(jìn)行保護(hù)性試驗(yàn)， 結(jié)果表明 斗 只黑猩猩都產(chǎn)生了高效價(jià)抗體，對(duì)靜脈內(nèi)注人 不同亞型的感染性人血漿， 均有防御作用， 而未 接種疫苗的對(duì)照組，受感染性的人血漿攻擊后 。 胞癌系由于母親懷孕時(shí)曾使用雌激素 均發(fā)病 將酵母基因乙型肝炎疫苗接種人體 （ 針后 個(gè)月抗一 陽(yáng)性率為 ， 個(gè)月 所引起。 不含 ， ） 它可 第 個(gè)月達(dá) 幾何平均滴度 （ 多， ） 能是 的活化因子。

8、 若將有癌特性的 多， 組織培養(yǎng)細(xì)胞作為制備疫 苗的 材 料，即使 把 于初免后 個(gè)月達(dá)高峰， ， 為 ： 在個(gè)月加 增達(dá) ： 。人體免疫試 去除，并不等于已將目 前還不清楚的 強(qiáng)注射后 的活化因子也同時(shí)去掉。因此不宜輕 驗(yàn)及對(duì)新生兒的保護(hù)試驗(yàn)，效果均很滿意。如 今千個(gè)以上已接種酵母基因乙型肝炎疫苗，未 易下結(jié)論認(rèn)為沒(méi)有 就不會(huì)致癌。 關(guān)于痘苗肝炎重組病毒基本上也屬于組織 見(jiàn)有任何嚴(yán)重的不良反應(yīng)。盡管在酵母中所產(chǎn) 培養(yǎng)的范疇。 它作為疫苗的優(yōu)點(diǎn)在于接種方便， 生的乙型肝炎表面抗原糖化率較低，但它不像 價(jià)格低廉， 免疫力較好。 ”將痘苗肝炎重 血漿疫苗需加尿素、 胃蛋白酶進(jìn)行滅活處理， 因 免疫

9、原性、 抗原性均不下 組病毒作為疫苗注射家兔皮內(nèi)，只家兔中有 此其抗原結(jié)構(gòu)較完整， 于血漿疫苗，故酵母基因乙型肝炎疫苗是目前 最為理想的安全有效的疫苗，發(fā)展前景廣闊。 利用基因工程除可制備乙 型肝 炎核 心 抗 升。 美國(guó)還將此痘苗基因乙肝疫苗接種黑猩猩， 原、 抗原外，也可制備表面抗原的診斷試劑。 未見(jiàn)有抗體應(yīng)答， 但有保護(hù)效果， 現(xiàn)在正進(jìn)一 這些試劑的原材料原先均取自人的血液或肝臟 只抗體持續(xù)性上升， 免疫夭， 抗體 滴度達(dá) 毫國(guó)際單位 ， 毫升， 另 只家兔抗 體一時(shí)性上升， 滴度達(dá) 毫國(guó)際單位 毫 步改良中。痘苗病毒作為載體可重組其他多種 基因， 因此可制造多聯(lián)的疫苗制品， 從理論上是

10、 很吸引人的，但接觸到實(shí)際應(yīng)用時(shí)就會(huì)碰到具 體問(wèn)題，其中特別是接種痘苗可引起很少量的 致死性副反應(yīng)， 何況由于天花已消滅， 世界衛(wèi)生 組織已制定停止種痘的條例， 一時(shí)還未開(kāi)禁， 尚 組織，如今利用基 因工程技術(shù)可充分解決其原 料的來(lái)源問(wèn)題， 因此可以大幅度地提高產(chǎn)量， 降 低成本。 由于基因工程能表達(dá)純系的抗原成分， 因此其特異性強(qiáng)，這是作為一個(gè)診斷用品必須 具備的先決條件。除抗原外，核酸也可直接用 難上人體。此外在痘苗肝炎重組病毒中曾使用 傳代細(xì)胞， 具有致癌因子。 又由于廣大人群 已種過(guò)牛痘， 新生兒血液中帶有母親抗體， 種痘 后不發(fā)， 影響免疫效果， 這些均為其不足之處。 酵母作為乙肝基因工程疫苗是目前最有希 望的預(yù)防乙型肝炎的疫苗。此疫苗產(chǎn)量高，免 于發(fā)展