IL1及TNF在關(guān)節(jié)炎大鼠模型血清中表達的實驗研究

1、中國中醫(yī)急癥年月第卷第期，···實驗研究·IL-1及TNF-在關(guān)節(jié)炎大鼠模型血清中表達的實驗研究肖金魚王炳勝王書杰解放軍第二五一醫(yī)院（河北張家口075000）【摘要】文獻標志碼：A文章編號：1004-745X（2011）04-0607-02目的檢測白細胞介素1（IL-1）、腫瘤壞死因子-（TNF-）在佐劑性關(guān)節(jié)炎（AA）大鼠模型血清中的水平。方法建立AA大鼠模型，根據(jù)X線片及組織病理學(xué)的特點證實造模成功。用ELISA法檢測AA大鼠模型血清中炎性細胞因子IL-1、TNF-的水平。結(jié)果與對照組大鼠比較，模型組大鼠血清中IL-1、TNF-水平明顯升高。結(jié)論模型

2、組大鼠血清中含有大量的IL-1、TNF-，提示IL-1、TNF-在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的發(fā)病過程中起著重要作用?！娟P(guān)鍵詞】類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎佐劑性關(guān)節(jié)炎細胞因子白細胞介素-1腫瘤壞死因子-ExpressionofIL-1andTNF-inAdjuvantArthritisRatsModlesXIAOJin-yu，WANGBing-sheng，WANGShu-jieNo.251HosptalofPLA（Zhangjiakou075000，Hebei）【Abstract】Objective：TodetecttheexpressioncharacteristiceofIL-1andTNF-inadjuvantar

3、thritis（AA）ratsmodel.Methods：AAratsmodelwasestablished，thetheserumlevelofIL-1andTNF-weredeterminedbyELISAandthedegreeofpathogenicityaswellasthepathologicalcharacteristicewereassayedbyhistopathologicaltechniquesandjointroentgenography.Results：Comparedwiththecontrolgroup，theIL-1andtheTNF-wereincreased

4、obviouslyinthemodelgroup.Conclusion：TheserumlevelofIL-1andTNF-mightinvolveinthepathogenesisofrheumatoidarthritis.【Keywords】Rheumatoidarthritis；Adjuvantarthritis；Cellfactor；IL-1；TNF-類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（RA）的典型病理學(xué)特征為滑膜組織異常增生，其中細胞因子網(wǎng)絡(luò)失調(diào)持續(xù)作用于病變部位是導(dǎo)致病變侵蝕進展的主要原因之一。細胞因子通過介導(dǎo)細胞與細胞之間的相互作用引起組織損傷酶的釋放，從而導(dǎo)致關(guān)節(jié)損傷，是RA炎癥和關(guān)節(jié)損傷的重要介質(zhì)

5、。其中白細胞介素-1（IL-1）和腫瘤壞死因（TNF-）在RA滑膜炎及軟骨和骨的破壞中起著非常關(guān)鍵的作用1-2。本實驗基于IL-1和TNF-的上述特性，采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測佐劑性關(guān)節(jié)炎（AA）大鼠模型血清中1.3模型制備30只大鼠隨機分成空白對照組（10只）、模型組（20只），每組雌雄各半。根據(jù)文獻3方法加以改進，正常條件飼養(yǎng)10d后，將弗氏完全佐劑搖勻后，按0.1mL/只將弗氏完全佐劑注于大鼠右后肢足跖內(nèi)造模。造模20d后取5只大鼠（用苦味酸做標記），每只大鼠腹腔注射10%水合氯醛3.5mL/kg待大鼠麻醉后，拍攝大鼠四肢關(guān)節(jié)X線攝片，觀察關(guān)節(jié)破壞情況。30d后取相同大鼠重復(fù)

6、操作，觀察關(guān)節(jié)破環(huán)情況。造模30d后取模型組5只大鼠的踝關(guān)節(jié)，經(jīng)固定、脫鈣石蠟包埋、切片后行蘇木精-伊紅（HE）染色。光鏡下觀察局部組織病理學(xué)變化。IL-1和TNF-，以探討其在動物模型中的表達特點。20只wistar大鼠，雌雄各半，體質(zhì)量（150±30）g，模型評價大鼠生長情況評價：造模前稱體質(zhì)量1次，造1.1實驗動物模后每2日測量1次，記錄動物生長情況。同時仔細觀察動物的毛色、精神狀態(tài)及關(guān)節(jié)癥狀的變化，模型組動物表現(xiàn)為體質(zhì)量減輕，精神萎靡，帶有病態(tài)，伴輕微脫毛等。對照組大鼠體質(zhì)量略有增長，其他方面沒有明顯明顯變化。大鼠關(guān)節(jié)足腫脹評價：注射弗氏完全佐劑后，用容積法排水法測量雙后肢的

7、足腫脹度。造模前觀察1次，后每周觀察1次，觀察足爪腫脹情況。同時對其他合格證號：0172808，購于河北北方學(xué)院動物室；飼養(yǎng)條件：SPF動物實驗室，全年溫度2124，相對濕度40%67%，換氣次數(shù)14.417.2次/h，空氣潔凈度600012000級，梯度壓差19.831.6Pa，噪聲37.245.0dB，菌落數(shù)1.02.1個/皿，氨濃度3.24.5mg/m3。1.2試藥與儀器TDL80-2B離心機，EL301stripreader酶標儀3只足爪炎癥進行評分。采用4分制的評分標準，每只大鼠的最高分為16分，記錄并比較20d時，對照組和造模組關(guān)節(jié)炎指數(shù)和雙后肢足腫脹度平均值差異。購于自美國Bio

8、Tek公司。756MC型紫外可見分光光度計，上海精密科學(xué)儀器有限公司。1.5標本采集10%的水合氯醛以3.5mL/對大鼠進行麻醉，通信作者開胸使心臟暴露，進行心臟取血，全血2500r/min離心20min，取·608·中國中醫(yī)急癥年月第卷第期，血清-20保存?zhèn)溆?。檢測細胞因子具體操作按ELISA試劑盒說明進行。協(xié)調(diào)、促進，在多數(shù)情況下表現(xiàn)協(xié)同性生物學(xué)效應(yīng)，是炎癥、組織損傷及免疫反應(yīng)的主要介質(zhì)，在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的發(fā)病機制中占重要地位。IL-1和TNF-可激活血管內(nèi)皮細胞、增強內(nèi)皮細胞黏附分子的表達，使血液中的白細胞通過與黏附分子相互作用被匯集到關(guān)節(jié)腔而誘發(fā)炎癥。IL-1和TNF

9、-可促進滑膜細胞和軟骨細胞合成并釋放前列腺素E2和膠原酶，引發(fā)滑膜炎癥反應(yīng)、軟骨基質(zhì)的崩解，而局部免疫復(fù)合物和游離的膠原等分解產(chǎn)物刺激IL-1和TNF-的合成，以致形成一個惡性循環(huán)。IL-1和TNF-促進人軟骨細胞分泌纖維蛋白溶酶原激活劑，使纖維蛋白溶酶原轉(zhuǎn)換成纖維蛋白溶酶而降解纖維蛋白，加速膠原的分解代謝，這些作用均可造成類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的軟骨損傷。IL-1也能抑制膠原及堿性磷酸酶的合成，增加破骨細胞數(shù)量及骨吸收面積，刺激纖維母細胞增生，增加破骨細胞活性，促進骨的吸收而致類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎骨的破壞4。筆者通過對大鼠AA模型的制備及對照組和模型組大鼠關(guān)節(jié)炎癥積分、影像學(xué)、病理學(xué)等相關(guān)指標的評估，進一步探

10、討了統(tǒng)計學(xué)處理應(yīng)用SPSS13.0軟件進行統(tǒng)計。結(jié)果以（±s）表示，組間比較采用t檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果模型組大鼠與對照組大鼠比較，體質(zhì)量明大鼠一般情況顯減輕，模型組關(guān)節(jié)表現(xiàn)為紅、腫、以對稱性后肢關(guān)節(jié)為主，累及踝關(guān)節(jié)、膝關(guān)節(jié)、趾間關(guān)節(jié)等。20d左右出現(xiàn)第1個炎癥高峰后紅腫有一定程度消退；30d達到第2個高峰，進入慢性期，紅腫逐漸消退逐漸出現(xiàn)關(guān)節(jié)強直、畸形以至功能障礙，表明慢性、對稱性、多發(fā)性關(guān)節(jié)炎發(fā)生。2.2兩組大鼠雙后肢足腫脹度比較實驗第14日，大鼠關(guān)節(jié)開始出現(xiàn)腫脹，而后足首先出現(xiàn)紅腫，后逐漸延伸至前足并日趨嚴重，20d腫脹達到最高值后逐漸減輕，模型組與對

11、照組大鼠比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05），見表1。表1組別對照組模型組兩組大鼠雙后肢足腫脹度比較（±s)n1010關(guān)節(jié)炎指數(shù)關(guān)節(jié)體積（cm3）IL-1和TNF-在AA模型中的表達特點。本實驗結(jié)果表明IL-1和TNF-大鼠模型大量增長與表達，這與其在RA患者中的相關(guān)表達特點相類似，說明在AA造模過程中IL-1和TNF-發(fā)揮了重要作用。作為在RA中大量存在的T細胞來源的細胞因子0.90±0.737.29±1.82*7.15±0.2313.81±1.63*與對照組比較，*P<005。下同。IL-1和TNF-可能成為評價RA病情和治療療效的兩個

12、最重要免疫學(xué)指標?？傊瑢L-1和TNF-的深入研究必將有助于對改變?yōu)橹鳎?0d時隱約可見骨質(zhì)疏松，關(guān)節(jié)間隙模糊，30d時可見明確的關(guān)節(jié)間隙模糊、變窄。而對照組大鼠雙踝關(guān)節(jié)同時點比較，變化不大，無明顯骨質(zhì)疏松、關(guān)節(jié)間隙清晰、未見骨質(zhì)破壞。RA發(fā)生機制的進一步認識，合理地評價RA的病情進展，為RA治療，包括藥物及免疫治療提供更加科學(xué)的實驗依據(jù)。參1考文獻2.4大鼠炎性足爪組織病理學(xué)改變造模30d后，模型組大鼠節(jié)腔滑膜層次增多可達68層，甚至十余層且排列不規(guī)整，滑膜內(nèi)有大量炎性細胞浸潤，以單核細胞和淋巴細胞為主，且在關(guān)節(jié)軟骨附近有血管翳形成，引起關(guān)節(jié)軟骨和骨組織破壞。StrandV，Kavana

13、ughAF.Theroleofinterleukin-1inboneresorp-tioninrheumatoidarthritisJ.Rheumatology，2004，43（Suppl3）：220-226.2ZwerinaJ，HayerS，Tohidast-AkradM，etal.Singleandcombinedin-hibitionoftumornecrosisfactor，interleukin-1，andRANKLpathwaysintumornecrosisfactor-inducedarthritis：effectsonsynovialinflam-mation，boneero

14、sion，andcartilagedestructionJ.ArthritisRheum，2004，50（1）：277-290.較對照組均明顯升高，兩組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05）。見表2。表2兩組大鼠炎性細胞因子水平比較（ng/L，±s)組別對照組模型組3n1010IL-1109.40±9.81228.46±29.62*TNF-148.43±15.19220.68±20.62*DelwigA，AltmannDM，IsaacsJD，etal.TheimpactofglycosylationonHLA-DR1-restrictedTcell

15、recognitionoftypeIIcollageninamousemodelJ.ArthritisRheum，2007，54：482-491.4YinT.InvolvementofIL-6signaltransducergp130inIL-11-mediat-edsignaltransductionJ.JImmunol，1993，15（3）：2555-2561.3討論IL-1和TNF-主要由單核細胞及巨噬細胞分泌，二者相互（收稿日期2010-11-21）(上接第565頁)陰增液，通利膈咽。方用麥門冬湯合益胃湯加減。藥用沙參、麥冬、法半夏、白芍、陳皮、甘草、蒲公英、木蝴蝶、麥芽。若陰傷較重，病史較久，則用一貫煎加味；若大便干結(jié)難解，則加瓜蔞仁、火麻仁；夜寐不安加酸棗仁、夜交藤；疼痛較著，則加金鈴子散、失笑散；呃逆嘔吐，則合橘皮竹茹湯。噯