口腔鱗狀細(xì)胞癌中單核細(xì)胞趨化蛋白-1表達(dá)與腫瘤血管生成的關(guān)系

1、口腔鱗狀細(xì)胞癌中單核細(xì)胞趨化蛋白-1表達(dá)與腫瘤血管生成的關(guān)系    作者：宋宇峰 楊建斌 馮紅超 【摘要】 目的 在其它腫瘤的研究中發(fā)現(xiàn)單核細(xì)胞趨化蛋白-1（monocyte chemoattractant protein-1，MCP-1）參與了腫瘤的血管生成，本研究探討口腔(鱗狀細(xì)胞癌，簡稱鱗癌)中MCP-1表達(dá)與腫瘤血管生成的關(guān)系。方法 應(yīng)用免疫組化方法檢測41例口腔鱗癌和10例正?？谇火つCP-1和CD34的表達(dá)，光鏡下進行MCP-1表達(dá)的分級和微血管的計數(shù)。結(jié)果 口腔鱗癌中MCP-1的表達(dá)和微血管計數(shù)較正?？谇火つぞ黾樱≒<0.01），

2、在鱗癌中隨MCP-1表達(dá)的增加，微血管計數(shù)增加（P<0.01）。結(jié)論 MCP-1在口腔鱗癌中參與了腫瘤的血管生成，但其具體機制和在臨床中的意義還需進一步的研究。    【關(guān)鍵詞】 口腔鱗狀細(xì)胞癌 腫瘤血管生成 單核細(xì)胞趨化蛋白-1    【Abstract】 Objective Many investigations have showed that monocyte chemoattractant protein-1(MCP-1)participated in tumor angiogenesis.To s

3、tudy the correlation between the expression of MCP-1 and angiogenesis by exploring the expression of MCP-1 and angiogenesis in oral squamous cell cancer(OSCC) and oral normal tissue.Methods The expression of MCP-1 and microvessel counts were detected by immunohistochemical methods in paraffin sectio

4、n of 41 OSCC and 10 normal oral tissues.Results The expression of MCP-1 in OSCC group was significantly higher than that in normal group(P<0.01)：Microvessel counts in OSCC group was also higher than that in normal group(P<0.01).The expression of MCP-1 was significantly correlated with the micr

5、ovessal counts（P<0.01）.Conclusion MCP-1 plays a crucial role in angiogenesis of OSCC，but its mechanism and clinical significance need further investigation.    【Key words】 oral squamous cell cancer angiogenesis monocyte chemoattractant protein-1    腫瘤的形成是一個

6、多因素參與并相互作用的復(fù)雜過程，新血管形成是腫瘤生長和轉(zhuǎn)移的重要環(huán)節(jié)。腫瘤血管在細(xì)胞組成、組織結(jié)構(gòu)及功能特點上同正常血管均有不同，其形成過程極其復(fù)雜，有許多因子在其中發(fā)揮著作用。在其它腫瘤的研究中發(fā)現(xiàn)單核細(xì)胞趨化蛋白-1（monocyte chemoattractant protein-1，MCP-1）和腫瘤的血管生成有關(guān)，但在口腔癌中少見報道。本文通過免疫組化方法對41例口腔鱗狀細(xì)胞癌(簡稱鱗癌)和10例正?？谇火つそM織中MCP-1表達(dá)和微血管計數(shù)進行檢測，探討MCP-1在口腔鱗癌血管生成中的作用。    1 材料和方法  

7、0; 1.1 材料 搜集19982004年本院口腔頜面外科手術(shù)切除標(biāo)本51例?？谇击[癌41例，其中男29例，女12例，年齡3476歲，平均56.27歲；舌癌15例，牙齦癌13例，口底癌8例，頰癌5例；高分化癌25例，中分化癌16例，無低分化癌。正?？谇火つそM織10例，其中男5例，女5例；年齡1058歲，平均32歲。腫瘤標(biāo)本術(shù)前未經(jīng)針對腫瘤的治療，標(biāo)本均經(jīng)病理證實。所有標(biāo)本均經(jīng)常規(guī)脫水、10%中性福爾馬林固定、包埋、石蠟連續(xù)切片，切片厚度4cm。    1.2 免疫組織化學(xué)染色 鱗癌組和正常組均進行免疫組化常規(guī)SABC法染色?？筂CP-1抗體為兔

8、抗人單克隆抗體（購自武漢博士德生物工程有限公司），工作濃度1100?？笴D34抗體為鼠抗人單克隆抗體（購自北京金橋中杉生物技術(shù)公司），克隆系QBEnd/10，用于特異性地標(biāo)記微血管，工作濃度180。所有標(biāo)本均抗原熱修復(fù)，DAB顯色，蘇木素復(fù)染后脫水、透明、封片。以上步驟均按說明書進行操作，嚴(yán)格控制時間及溫度。每次染色均設(shè)陽性及陰性對照。用PBS代替一抗作為陰性對照。    1.3 結(jié)果評定 微血管計數(shù)參照Weidner1的方法：任何與鄰近的微血管、腫瘤細(xì)胞及其它相連組織有明顯分界的棕染內(nèi)皮細(xì)胞或內(nèi)皮細(xì)胞簇均視為一個血管計數(shù)，首先在低倍鏡（40和100倍）

9、下選取癌視野中微血管最密集的3個區(qū)域，然后在高倍鏡（400倍）下進行血管計數(shù)，取平均值進行統(tǒng)計分析。MCP-1表達(dá)值的評定參照Hisashi Saji2的方法進行：首先在低倍鏡（100倍）下選取陽性細(xì)胞最密集的5個區(qū)域，在高倍鏡（400倍）下計算陽性細(xì)胞占總細(xì)胞數(shù)的百分比，其平均值視為MCP-1的表達(dá)值，分為0級：05%，1級：5%50%，2級：>50%。    1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS10.0軟件包分別進行統(tǒng)計學(xué)分析。    2 結(jié)果    2.1 MCP-1

10、及CD34在口腔鱗癌及正常組織中的表達(dá) 41例鱗癌樣本中，MCP-1表達(dá)陽性者33例，MCP-1陽性表達(dá)主要分布于腫瘤細(xì)胞的胞漿，極少數(shù)細(xì)胞膜也有表達(dá)，呈棕色和棕褐色顆粒，細(xì)胞核無陽性表達(dá)，在間質(zhì)細(xì)胞如巨噬細(xì)胞中也可見較多的表達(dá)（見圖1）；正常組織內(nèi)陽性表達(dá)2例，主要在白細(xì)胞亞群和血管平滑肌細(xì)胞中表達(dá)。CD34陽性染色呈棕色和棕褐色顆粒，定位于血管內(nèi)皮細(xì)胞胞膜和胞漿，血管呈條索狀，或者血管內(nèi)皮細(xì)胞呈簇狀聚集，在癌組織內(nèi)可見大量的微血管存在（見圖2），對照組明顯減少。         圖1 口腔鱗癌中MCP-1的表達(dá)

11、(SABC法，400×)         圖2 口腔鱗癌中CD34的表達(dá)(SABC法，400×)    2.2 MCP-1表達(dá)及微血管計數(shù)與臨床指標(biāo)的關(guān)系 見表1。MCP-1表達(dá)在口腔鱗癌組和正常黏膜組之間存在差別，其差異有顯著性（P<0.01）；鱗癌組微血管計數(shù)高于正常組，差異有顯著性（P<0.01）?？谇击[癌中、高分化癌中MCP-1表達(dá)也有差別，差異有顯著性（P<0.05）；中、高分化癌微血管計數(shù)有差別，差異有顯著性（P<0.0

12、5）。     表1 MCP-1表達(dá)及微血管計數(shù)與臨床指標(biāo)的關(guān)系     2.3 口腔鱗癌中MCP-1表達(dá)與微血管計數(shù)的關(guān)系 見表2。由表2可見口腔鱗癌中MCP-1的表達(dá)和微血管的計數(shù)有關(guān)，隨MCP-1表達(dá)的增加，微血管計數(shù)增加，    P0.01.     表2 口腔鱗癌中MCP-1表達(dá)與微血管計數(shù)的關(guān)系     注：*兩兩比較：0級與1級差異無顯著性(P0.05)；0級與2級差異有顯著性(P0

13、.01)；1級與2級差異有顯著性(P0.01)    3 討論    實體腫瘤形成后，進入無血管的浸潤前期，腫瘤細(xì)胞主要靠周圍組織的彌散供給營養(yǎng)，此時腫瘤結(jié)節(jié)直徑一般小于23mm。一旦腫瘤直徑超過23mm，腫瘤組織內(nèi)開始有新血管生長，腫瘤生長加速，且極易發(fā)生浸潤和轉(zhuǎn)移。所以，腫瘤血管生成和由此建立的腫瘤微循環(huán)是實體瘤持續(xù)生長和浸潤轉(zhuǎn)移的先決條件3。    筆者的研究結(jié)果表明：口腔鱗癌中，MCP-1的表達(dá)明顯高于正?？谇火つそM織；口腔鱗癌中微血管計數(shù)也明顯高于正?？谇火つそM織；

14、MCP-1表達(dá)與微血管計數(shù)呈正相關(guān)。這就提示MCP-1與腫瘤血管生成有密切的相關(guān)性。MCP-1是化學(xué)介質(zhì)CC家族的成員，擁有對單核細(xì)胞、樹突細(xì)胞、NK細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞的趨化性。MCP-1主要被腫瘤細(xì)胞分泌，也可被間質(zhì)細(xì)胞分泌2。近期研究結(jié)果表明，在浸潤的巨噬細(xì)胞中可以觀察到MCP-1的豐富表達(dá)4，這與筆者在口腔鱗癌中免疫組化的研究結(jié)果相符。    MCP-1參與多種病理、生理過程。就其對腫瘤的作用而言，它可以通過2個方面發(fā)揮腫瘤血管生成作用：(1)MCP-1可以直接促進血管生成。在許多炎性疾病中，如動脈粥樣硬化和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，這些疾病的顯著特點就是有較

15、多的血管生成，而且MCP-1有著較高的表達(dá)5，6；Rosalba Salcedo7等應(yīng)用鼠主動脈環(huán)在沒有炎性存在的情況下進行細(xì)胞培養(yǎng)，研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)：MCP-1濃度在550ng之間可以刺激大量的毛細(xì)血管增生，顯示了MCP-1在血管生成中的直接作用。(2)MCP-1通過使腫瘤內(nèi)浸潤的巨噬細(xì)胞，即所謂腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞（Tumor-associated macrophages，TAMs）聚集、遷徙而發(fā)揮間接的血管生成作用。TAMs是腫瘤間質(zhì)的一個主要成分，可能在口腔鱗癌的生長和轉(zhuǎn)移中起著重要作用8。TAMs浸潤進入腫瘤被許多細(xì)胞素和化學(xué)介質(zhì)調(diào)節(jié)，MCP-1是主要的調(diào)節(jié)劑。本課題組先前的研究表明：口腔鱗

16、癌中TAMs計數(shù)與微血管計數(shù)呈正相關(guān)，TAMs可以分泌細(xì)胞素如VEGF、VEGF-C9，10，尤其是VEGF，已經(jīng)證實在口腔鱗癌中是一個重要的促血管生長因子，而且與口腔鱗癌發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)8。這提示了MCP-1在血管生成中的間接作用。同時本研究中還顯示口腔鱗癌中TAMs也可分泌MCP-1，這還說明TAMs還可能存在自分泌的情況，進一步促進巨噬細(xì)胞在口腔鱗癌中的浸潤和聚集?？傊?，本研究顯示口腔鱗癌組織中MCP-1有豐富的表達(dá)，而且與微血管計數(shù)密切相關(guān)，表明了MCP-1在促腫瘤血管生成中有一定的作用。但口腔鱗癌組織中MCP-1產(chǎn)生的機制仍需采用其它分析手段做進一步研究。  &

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