斯普瑞達(dá)（SPRIDA）對(duì)SMMC-7721肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)和粘附功能的影響

1、斯普瑞達(dá)（SPRIDA）對(duì)SMMC-7721肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)和粘附功能的影響         06-07-05 11:50:00     編輯：studa20       作者：劉培勛，周則衛(wèi)，徐文清，劉曉秋，劉正明，李松年   【摘要】  目的  使用SMMC-7721肝癌細(xì)胞株對(duì)SPRIDA-A、SPRIDA-B和SPRIDA-A+SPRIDA-B體外抑制腫瘤生長(zhǎng)和粘附功能進(jìn)行

2、研究。方法  采用MTT比色分析法觀察SPRIDA-A、SPRIDA-B、SPRIDA-A+SPRIDA-B對(duì)SMMC-7721肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)和粘附功能的影響，測(cè)定其生長(zhǎng)抑制率和粘附抑制率。結(jié)果  SPRIDA-A對(duì)SMMC-7721肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)抑制作用不明顯，SPRIDA-B和SPRIDA-A+SPRIDA-B對(duì)肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)有明顯抑制作用，并呈劑量依賴關(guān)系；SPRIDA-B對(duì)SMMC-7721肝癌細(xì)胞粘附功能有明顯抑制作用，并呈劑量依賴關(guān)系。SPRIDA-B作用于SMMC-7721肝癌細(xì)胞后，可見明顯的凋亡細(xì)胞形態(tài)出現(xiàn)。結(jié)論  SPRIDA-B對(duì)SMMC-7721

3、肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)和粘附功能有明顯抑制作用，并可誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，是一個(gè)極具研究?jī)r(jià)值的抗腫瘤及抗轉(zhuǎn)移的新藥。        【關(guān)鍵詞】  SPRIDA-A；SPRIDA-B；肝癌細(xì)胞；轉(zhuǎn)移；粘附；凋亡        Effects of SPRIDA on growth and adhesion of hepatoma cell SMMC-7721        【Abstract】  Objec

4、tive  Study on  SPRIDA-A，SPRIDA-B and SPRIDA-A+SPRIDA-B inhibit growth and adhesion of tumor in vitro by using hepatoma cell line SMMC-7721.Methods  MTT was used to investigate the effect of SPRIDA-A，SPRIDA-B，SPRIDA-A+SPRIDA-B on growth and adhesion of hepatoma cell SMMC-7721，and dete

5、ct the inhibition rate of growth and adhesion.Results  SPRIDA-A could not obviously inhibit the growth of hepatoma cell SMMC-7721，SPRIDA-B and SPRIDA-A+SPRIDA-B could obviously inhibit the growth and adhesion of hepatoma cell SMMC-7721 in a dose dependent manner.It was clear that SPRIDA-B could

6、 induce the apoptosis of the cells，when it was used on hepatoma cell SMMC-7721.Conclusion  SPRIDA-B that could obviously inhibit the growth and adhesion of hepatoma cell SMMC-7721 and induce the apoptosis of the cells，was an antitumor and antimetastasis drug with remarkable value for study.

7、0;       【Key words】  SPRIDA-A；SPRIDA-B；hepatoma cell；metastasis；adhesion；apoptosis        苦豆子Sophor  alopecuroides L為豆科槐屬植物，在我國(guó)西北地區(qū)分布廣泛。我們從其全草中提取、分離得到生物堿I，并經(jīng)半合成、純化制備得SPRIDA-A和SPRIDA-B，SPRIDA-A和SPRIDA-B為同分異構(gòu)體。SPRIDA-A為人工構(gòu)型，SPRIDA-B為天然構(gòu)

8、型。兩者由于構(gòu)型不同，生物活性也可能不同，為了驗(yàn)證其體外抗腫瘤和抗腫瘤轉(zhuǎn)移作用，我們利用SMMC-7721肝癌細(xì)胞進(jìn)行了其體外抗腫瘤及抗轉(zhuǎn)移作用的研究13。        1  材料與方法          材料          藥物  SPRIDA-A、SPRIDA-B，均為白色固體粉末，引吸濕性強(qiáng)，溶于水，純度大于95%，由本實(shí)驗(yàn)室自制。   

9、;       主要試劑  RPMI60培養(yǎng)基、小牛血清、胰蛋白酶、MTT、二甲基亞砜（DMSO）購(gòu)于中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院血液學(xué)研究所， ECMGEL購(gòu)自sigma公司。         細(xì)胞系  SMMC-7721肝癌細(xì)胞株，購(gòu)于中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所。          方法         細(xì)胞培養(yǎng)  SMMC-

10、7721肝癌細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)于10%小牛血清、100U/ml青霉素及100U/ml鏈霉素的RPMI60培養(yǎng)基中，置于37 CO2培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，23d傳代1次，以維持細(xì)胞處于對(duì)數(shù)成長(zhǎng)期。          SPRIDA-A、SPRIDA-B、SPRIDA-A+SPRIDA-B對(duì)SMMC-7721肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)的影響  采用噻唑氮藍(lán)（MTT）比色分析法。將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞接種于96孔培養(yǎng)板，細(xì)胞濃度為8×104/ml，每孔0.2ml，將SPRIDA-A、SPRIDA-B、SPRIDA-A+SPRIDA-B與細(xì)胞共培養(yǎng)

11、24h，加150l DMSO，全自動(dòng)酶標(biāo)儀測(cè)定波長(zhǎng)490nm光密度（A）值，每孔設(shè)6個(gè)復(fù)孔。試驗(yàn)重復(fù)三次，計(jì)算各組均值。試驗(yàn)組按下式計(jì)算細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率：        生長(zhǎng)抑制率（%）=（1-試驗(yàn)組A值/對(duì)照組A）×100%          SPRIDA-A、SPRIDA-B對(duì)SMMC-7721肝癌細(xì)胞粘附功能的影響  采用噻唑氮藍(lán)（MTT）比色分析法。96孔板每孔中分別鋪上ECM CEL各50l，4過(guò)夜。加入1%BSA150l/孔，37孵箱內(nèi)

12、孵育2h，倒置瀝干。9002與細(xì)胞共培養(yǎng)24h，調(diào)節(jié)細(xì)胞濃度為8×104/ml，每孔加0.2ml，吸附1h，用無(wú)血清培養(yǎng)液洗2次，加入200l完全培養(yǎng)液，加MTT 20l/孔，37孵箱內(nèi)孵育4h，加DMSO150l/孔。全自動(dòng)酶標(biāo)儀測(cè)定波長(zhǎng)490nm的光密度（A）值，每孔設(shè)4個(gè)復(fù)孔，試驗(yàn)重復(fù)二次，計(jì)算粘附抑制率：        粘附抑制率（%）=（1-加藥組A值/未加藥組A值）×100%         SPRIDA-A、SPRIDA-B對(duì)SMM

13、C-7721肝癌細(xì)胞形態(tài)的影響  將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞接種于預(yù)先置有蓋玻片的6孔培養(yǎng)板內(nèi)，細(xì)胞濃度為8×104/ml，每孔2ml，SPRIDA-A、SPRIDA-B終濃度分別為3.7879×10-4mol/L、1.1364×10-3mol/L、2.2727×10-3mol/L與細(xì)胞共培養(yǎng)24h，取出蓋玻片，Ciemsa染色后光鏡下進(jìn)行細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察4，5。        2  試驗(yàn)結(jié)果        SPRIDA-A、S

14、PRIDA-B單用SMMC-7721肝癌細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用  見表1。              表1  SPRIDA-A、SPRIDA-B單用SMMC-7721肝癌細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用                       由表1可見

15、，SPRIDA-B對(duì)SMMC-7221肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用大于SPRIDA-A。隨著SPRIDA-B藥物濃度增大，抑制率也明顯增加，并呈劑量依賴關(guān)系。當(dāng)藥物濃度為1.1364×10-3mol/L時(shí)，抑制率可達(dá)60%。兩組比較，差異有顯著性（P<0.05）。          SPRIDA-B、SPRIDA-A+SPRIDA-B對(duì)SMMC-7221肝癌細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用  見表2。            表2  SPRIDA-B、SPRIDA-A+SPRIDA-B對(duì)SMMC-7221 肝癌細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用                     由表2可見，SPRIDA-B，SPRIDA-A+SPRID