高效液相色譜法測定烏龍丹中人參皂苷Rg1的含量

1、高效液相色譜法測定烏龍丹中人參皂苷Rg1的含量【摘要】目的建立測定烏龍丹中人參皂苷Rg1含量的方法。方法應(yīng)用高效液相色譜法測定人參皂苷Rg1的含量。色譜條件：流動相為乙腈0.2%磷酸（8317），檢測波長為203 nm，流速1.0 ml/min。結(jié)果人參皂苷Rg1在0.4044.040 g范圍之內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，r=0.999 6。平均回收率96.34%，RSD=2.37%。結(jié)論 此法簡便、準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，可用于測定烏龍丹中人參皂苷Rg1的含量。 【關(guān)鍵詞】 烏龍丹 人參皂苷Rg1 高效液相色譜Determination of Ginsenoside Rg1 in Wulongdan by

2、HPLCGUO Jiansheng，CHEN Shiwei，WANG Xiaogen1.Air Focre Sanatorium, Hangzhou Sanatorium, Hangzhou 310007，China；2.Guangdong Professional Institute of Chemical and Pharmaceutical Engineering，Guangzhou 510500，ChinaAbstract：Objective To estabish a method for determination of ginsenoside Rg1 in Wulongdan.

3、MethodsGinsenoside Rg1 was determined by HPLC.The mobile phase was acetonitrile- 0.2 moL/L phosphoric acid (8317) at a flow of 1.0 ml/min, and detection wavelength was 203nm. ResultsThe determination method for ginsenoside Rg1 had a good linear relationship in the range of 0.4044.04 g, r=0.999 6. Th

4、e average recovery was 96.34%, RSD=2.37%. ConclusionThis method is simple, accurate and reliable, which can be used for determination of the contents of ginsenoside Rg1 in Wulongdan.Key words：Wulongdan; Ginsenoside Rg1; HPLC 烏龍丹系南方醫(yī)科大學(xué)臧堃堂教授臨床經(jīng)驗方，由黃芪、生曬參、首烏、葛根、當(dāng)歸、川芎等多味中藥組成，具有益氣活血、補(bǔ)腎填髓、化淤通絡(luò)等功效，臨床用于治療缺

5、血性心腦血管疾病，療效肯定1,2。本課題組前期已在其質(zhì)量控制方面做了大量工作3。考慮到本品組方復(fù)雜，生曬參是其主要藥物，為了更好地控制該藥品的內(nèi)在質(zhì)量，確保用藥安全有效，本實驗進(jìn)一步采用高效液相色譜法對該制劑中主要成分人參皂苷Rg1進(jìn)行含量測定。1 材料與儀器 烏龍丹流浸膏及各陰性對照品。烏龍丹處方：黃芪30 g，生曬參10 g，白術(shù)10 g，當(dāng)歸10 g，川芎10 g，丹參20 g，水蛭3 g，地龍10 g，葛根30 g，制首烏20 g，女貞子20 g，石菖蒲10 g，全蝎6 g，僵蠶10 g（由南方醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)藥學(xué)院中藥房提供）。以上方藥共煎，濃縮成流浸膏(1ml浸膏2.5 g原藥材)。陰

6、性對照品自制。人參皂苷Rg1（批號：0703-200015），所用試劑乙腈為色譜純（美國Fisher公司）；甲醇為色譜純(天津市康科德科技有限公司)，其他試劑均為分析純，水為純凈水。日本島津公司Shimadzu高效液相色譜儀,ALS 自動進(jìn)樣器，DAD紫外檢測器，Millennium 32 色譜工作站。2 方法與結(jié)果2.1 人參皂苷Rg1對照品溶液的制備精密稱定人參皂苷Rg1 5.05 mg，用甲醇溶解定容至25 ml量瓶中，即得。2.2 樣品溶液的制備精密吸取烏龍丹14 g，置50 ml具塞三角瓶中，精密加入70%乙醇至量，稱重，立即超聲30 min，靜置10 min，補(bǔ)足原重量，濾過，精密

7、吸取續(xù)濾液25 ml，減壓回收乙醇至干，殘渣以水10 ml溶解，水溶液置50 ml分液漏斗中，水溶液過大孔樹脂（15 cm，1 cm，干法裝柱），以水100 ml，30%甲醇100 ml，甲醇100 ml洗脫，收集甲醇液，并減壓回收至干，再用甲醇定容至5 ml量瓶中，即得樣品溶液。2.3 缺生曬參溶液的制備取缺生曬參樣品，按樣品溶液的制備方法制成缺生曬參陰性溶液。2.4 色譜條件色譜柱為Kromail C18色譜柱（4.6 mm150 mm，5 m），流動相為乙腈：0.2%磷酸（8317），檢測波長203 nm，流速1.0 ml/min，進(jìn)樣量10 l。在此色譜條件下，取人參皂苷Rg1對照品溶

8、液、供試品溶液、缺生曬參陰性對照品溶液各10 l，進(jìn)行HPLC測定，結(jié)果見圖13?？梢娕c對照品保留時間一致，并且人參皂苷Rg1與其他組分達(dá)到較好地分離。而陰性未出現(xiàn)該峰，不干擾此成分的測定。2.5 人參皂苷Rg1標(biāo)準(zhǔn)曲線制備分別精密吸取人參皂苷Rg1對照品溶液(0.202 mg/ml)2，4，8，10，15，20 l進(jìn)樣，按上述方法測定，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積積分值為縱坐標(biāo)，繪制工作曲線?；貧w方程為：Y=122 262X+1 330.2，r=0.999 1，r=0.999 6，線性范圍為0.4044.040 g。2.6 精密度實驗以同一對照品溶液連續(xù)重復(fù)進(jìn)樣5次，以人參皂苷Rg1峰面積的RS

9、D=0.23%（n=5）。結(jié)果表明精密度良好。2.7 重現(xiàn)性實驗按前文所述“含量測定”方法，對同一批樣品，分別制備5份供試品溶液，各吸取10 l，進(jìn)行HPLC法測定，結(jié)果人參皂苷Rg1含量為0.159 3 mg/g，RSD1.57%。表明本法重現(xiàn)性良好。2.8 穩(wěn)定性實驗取同一供試品溶液照含量測定方法，每隔2 h進(jìn)樣測定，共5次，結(jié)果表明，供試品溶液在8 h內(nèi)基本穩(wěn)定，RSD為0.27%（n=5）。2.9 回收率實驗采用加樣回收實驗，精密稱取已知含量的樣品（人參皂苷Rg1含量為0.1593 mg/g），精密加入一定量的對照品，分別為人參皂苷Rg1對照品溶液（0.202 mg/ml）4，5.5，

10、6.5 ml按樣品含量測定方法測定含量，計算加樣回收率，平均加樣回收率為96.34%，RSD為2.37%（n=9）。結(jié)果見表1。表1 回收率實驗結(jié)果（略）2.10 樣品的含量測定取對照品溶液和供試品溶液各10 l，分別注入液相色譜儀，按外標(biāo)法以峰面積計算，5批樣品含量的測定結(jié)果見表2。表2 人參皂苷Rg1的含量測定結(jié)果（略） 根據(jù)上述測定結(jié)果，暫定供試品每g含人參皂苷Rg1不得少于0.15 mg。3 討論 實驗中曾用多種流動相對烏龍丹流浸膏組分的分離情況進(jìn)行考察，結(jié)果以乙腈0.2%磷酸（8317）為流動相時，人參皂苷Rg1的峰型較好，分離效果好，雜質(zhì)干擾少，故選用其為本法的流動相。 烏龍丹流浸膏采用水提取法，比較切合臨床實際，但可能影響了人參皂苷Rg1的提取率，因此，該制劑的提取工藝有賴臨床使用情況最后確定。本實驗采用HPLC法測定烏龍丹流浸膏中人參皂苷Rg1的含量，證明此方法簡便、準(zhǔn)確，重現(xiàn)性、回收率均較好?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】 1鐘