丹參注射液關(guān)節(jié)內(nèi)注射預(yù)防關(guān)節(jié)粘連的實(shí)驗(yàn)研究

1、丹參注射液關(guān)節(jié)內(nèi)注射預(yù)防關(guān)節(jié)粘連的實(shí)驗(yàn)研究         09-08-29 16:19:00     編輯：studa20                 作者：段戡袁長深姚弘毅劉宇翔劉政治【摘要】  目的為探討預(yù)防性關(guān)節(jié)內(nèi)注射丹參注射液對關(guān)節(jié)粘連的影響。方法將24只日本雄性大耳白兔隨機(jī)分為3組，每組8只，

2、分別為鹽水對照組（A組）、玻璃酸鈉對照組（B組）、丹參治療組（C組）。手術(shù)切開右后膝關(guān)節(jié)，搔刮髕上囊前壁，切除大部分髕上囊后壁滑膜和髕下脂肪墊，術(shù)畢用長腿管形石膏固定右后肢膝關(guān)節(jié)于伸直位。每只動物采用的藥物品種及劑量分別是：A組注生理鹽水0.3 ml、B組注玻璃酸鈉0.3 ml、C組注丹參注射液0.3 ml，共4次。4周后空氣栓塞處死動物，行關(guān)節(jié)活動度測量、關(guān)節(jié)腔行大體觀察、髕上囊滑膜組織的組織學(xué)觀察和總膠原含量檢測。結(jié)果關(guān)節(jié)活動度B、C組大于A組（P<0.01），B、C組之間差異無顯著性（P>0.05）；關(guān)節(jié)粘連計(jì)分B、C組均于小A組（P<0.01），B、C組之間差異無顯著

3、性（P>0.05）；髕上囊前壁滑膜病變組織學(xué)計(jì)分B、C組均小于A組（P<0.01），B、C組之間差異無顯著性（P>0.05）；髕上囊前壁滑膜組織總膠原含量B、C組小于A組（P<0.01），C組小于B組（P<0.01）。結(jié)論丹參注射液關(guān)節(jié)內(nèi)注射能有效預(yù)防關(guān)節(jié)粘連，且與玻璃酸鈉的效果類似。 【關(guān)鍵詞】  膝關(guān)節(jié)粘連；丹參注射液；兔Abstract：ObjectiveTo investigate the prophylactic effects of repeated intraarticular injection of Salvia miltiorrhiz

4、a on joint adhesion.Methods24 Japanese rabbits were divided randomly into 3 groups. All right hind knees were made like this: the anterior wall of suprapatellar bursae was scraped, the posterior wall of suprapatellar bursae and the infrapatellar fat pad were cut off. Each knee was injected with phys

5、iological saline 0.3 ml for group A, sodium hyaluronate injection 0.3 ml for group B, and Salvia miltiorrhiza injection 0.3 ml for group C. All right hind knees were immobilized in the extension position with a long leg plaster cast for 4 weeks, and injected weekly. ResultsAfter 4 weeks, the joint m

6、ovement range in group B or C was larger than that in group A (P<0.01), and between group B and group C there had no significant difference （P>0.05）. The scoring of joint adhesions in group B or C was smaller than that in group A (P<0.01),  between group B and group C there had no sign

7、ificant difference（P>0.05）. The scoring of histological change of the synovial membrane in group B or C was smaller than that in group A (P<0.01), and there had no significant difference  between group Band group C（P>0.05）. Total collagens content of the synovial membrane in group B or

8、 C was less than that in group A (P<0.01), while that of group C was less than of group B(P<0.01). ConclusionSimilar to sodium hyaluronate, salvia miltiorrhiza can effectively prevent joint adhesions.Key words：Joint (Intraarticular) adhesions/Prevention;    Salvia  miltiorr

9、hiza Intraarticular  injection;    Rabbits    關(guān)節(jié)粘連是關(guān)節(jié)附近創(chuàng)傷、手術(shù)后或關(guān)節(jié)制動后的常見并發(fā)癥，是造成纖維性關(guān)節(jié)僵硬的關(guān)節(jié)內(nèi)原因。關(guān)節(jié)粘連一旦形成，治療極為棘手，甚至造成患者終生殘廢，故其預(yù)防尤顯重要1。我們在初步研究發(fā)現(xiàn)丹參注射液有預(yù)防關(guān)節(jié)粘連作用2的基礎(chǔ)上，改進(jìn)造模方法、增加用藥頻次和調(diào)整觀測指標(biāo)，開展了進(jìn)一步的研究。1 動物與分組    選擇成年健康日本雄性大耳白兔24只（廣西中醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心提供，許可證號：SYXK桂2003-000

10、1），體重2.02.5 kg。隨機(jī)分成3組：A組（鹽水對照組）、B組（玻璃酸鈉對照組）、C組（丹參治療組），每組8只，分別編號。2 方法2.1 造模與處理 用0.9%生理鹽水將化學(xué)純氨基甲酸乙酯配成25%的溶液，按1 g·kg-1體重（4 ml·kg-1體重）耳緣靜脈注射麻醉。參照葉根茂等3的方法，剪除右后肢膝關(guān)節(jié)周圍體毛，碘伏消毒手術(shù)野皮膚，無菌下行右側(cè)膝關(guān)節(jié)髕旁內(nèi)側(cè)切口長約3 cm，切開關(guān)節(jié)囊，將髕骨向外翻轉(zhuǎn)，用刀片搔刮髕上囊前壁滑膜，用刀柄推開髕上囊后壁在股骨前面的附著部，切除大部分髕上囊后壁和髕下脂肪墊，止血；縫合關(guān)節(jié)囊及皮膚，經(jīng)關(guān)節(jié)囊外行關(guān)節(jié)穿刺，先抽凈

11、關(guān)節(jié)內(nèi)積血，再將藥物注入關(guān)節(jié)腔。每只動物采用的藥物品種及劑量分別是：A組生理鹽水0.3 ml，B組玻璃酸鈉0.3 ml（山東博士倫福瑞達(dá)制藥有限公司，批號060530022），C組丹參注射液0.3 ml（上海第一生化藥業(yè)有限公司，批號060804）。術(shù)后長腿管型石膏固定右后肢于膝關(guān)節(jié)伸直位4周，膝關(guān)節(jié)前側(cè)石膏開窗以便注藥。以后每周經(jīng)皮關(guān)節(jié)穿刺并注藥1次，每組每只共注藥4次。對側(cè)肢體（左后肢）不予干預(yù)。術(shù)后分籠標(biāo)準(zhǔn)飼養(yǎng)，肌注慶大霉素2萬U，2次/d，共3 d。于固定4周后予空氣栓塞處死，拆除石膏固定后，每只動物依次行關(guān)節(jié)活動度測量、關(guān)節(jié)腔大體觀察、切取髕上囊前壁滑膜組織（一式兩份）行組織學(xué)觀察和

12、總膠原含量檢測。2.2 關(guān)節(jié)活動度測量實(shí)驗(yàn)結(jié)束時，每組8只動物行關(guān)節(jié)活動度測量。固定動物右大腿近段于臺上，于膝關(guān)節(jié)下10 cm處用500 g拉力牽拉關(guān)節(jié)屈曲5 min，用長柄關(guān)節(jié)活動度測量器測量出膝關(guān)節(jié)屈曲角度，即為關(guān)節(jié)活動度。2.3 關(guān)節(jié)粘連大體觀察關(guān)節(jié)活動度測量后，打開關(guān)節(jié)腔行大體觀察。參照葉根茂等3的標(biāo)準(zhǔn)，將關(guān)節(jié)粘連情況定為5級，計(jì)分為04分?；す饣x上囊及關(guān)節(jié)腔大小正常，無粘連為0級，計(jì)0分；滑膜輕度水腫，髕上囊縮小約1/4，關(guān)節(jié)腔內(nèi)少量散在絲狀粘連為級，計(jì)1分；滑膜中度水腫，髕上囊縮小約1/2，關(guān)節(jié)腔內(nèi)較多散在絲狀粘連為級，計(jì)2分；滑膜明顯水腫，髕上囊縮小約3/4，關(guān)節(jié)腔內(nèi)較多散

13、在絲狀粘連為級，計(jì)3分；髕上囊基本消失，關(guān)節(jié)腔內(nèi)致密粘連為級，記4分。2.4 組織學(xué)觀察大體觀察后，立即切取一份髕上囊前壁滑膜組織。取材后的標(biāo)本經(jīng)4%多聚甲醛溶液固定2448 h，遞增濃度乙醇脫水，石蠟包埋，間斷連續(xù)切片，厚3 m。HE染色、光鏡下觀察。髕上囊前壁滑膜組織學(xué)觀察：將滑膜病變定為4級，計(jì)分為03分?；ね暾?，細(xì)胞排列整齊，無充血水腫、無炎細(xì)胞浸潤為0級，計(jì)0分；滑膜充血水腫，表層細(xì)胞增生為級，計(jì)1分；滑膜細(xì)胞呈乳頭狀增生，滑膜內(nèi)血管增生，肉芽組織形成為級，計(jì)2分；滑膜內(nèi)肉芽組織纖維化，伴有淋巴細(xì)胞和漿細(xì)胞浸潤為級，計(jì)3分。     09-0

14、8-29 16:19:00     編輯：studa202.5 總膠原含量的測定將另一份髕上囊前壁滑膜組織標(biāo)本每個稱取35 mg，儲存于20冰箱中，嚴(yán)格按南京建成生物研究所提供的羥脯氨酸測試盒（編號：20061116）的實(shí)驗(yàn)步驟行羥脯氨酸含量測定，再按膠原中含有13.4%的羥脯氨酸，折算出總膠原含量。2.6 統(tǒng)計(jì)方法 本研究的數(shù)據(jù)以±s表示。采用SPSS 11.0 for Windows統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)錄入和統(tǒng)計(jì)處理。3 結(jié)果3.1 一般情況正式實(shí)驗(yàn)期間動物健康狀況良好，無腹瀉，無死亡。部分動物固定后3 d內(nèi)出現(xiàn)患側(cè)足部不同程度的腫脹

15、(嚴(yán)重者予遠(yuǎn)端石膏部分松開)，均于1周后消失。動物啃咬石膏、致石膏缺損嚴(yán)重而失去固定作用者及時修補(bǔ)或更換，以確保每天均達(dá)到有效固定。3.2 關(guān)節(jié)活動度測量各組關(guān)節(jié)活動度見表1。統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，用藥各組（B，C組）關(guān)節(jié)活動度大于鹽水對照組（A組）（P<0.01）；B，C組之間差異無顯著性（P>0.05）。3.3 關(guān)節(jié)粘連大體觀察 各組關(guān)節(jié)粘連計(jì)分見表1。統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，用藥各組（B，C組）關(guān)節(jié)粘連計(jì)分均小于鹽水對照組（A組）（P<0.01），說明用藥各組關(guān)節(jié)粘連程度均比鹽水空白組輕；B，C組之間差異無顯著性（P>0.05）。表1  各組關(guān)節(jié)活動度、關(guān)節(jié)粘連

16、計(jì)分、滑膜病變計(jì)分和總膠原含量（略）3.4 組織學(xué)觀察各組髕上囊前壁滑膜組織病變計(jì)分見表1。統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，用藥各組（B，C組）病變計(jì)分均小于鹽水對照組（A組）（P<0.01），說明用藥各組滑膜病變程度均比鹽水對照組輕；B，C組之間差異無顯著性（P>0.05）。3.5 髕上囊前壁滑膜總膠原含量 各組髕上囊前壁滑膜組織總膠原含量見表1。統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，用藥各組（B，C組）的總膠原含量低于與鹽水對照組（A組）（P<0.01），表明造模4周后用藥組關(guān)節(jié)內(nèi)用藥能明顯地降低實(shí)驗(yàn)動物滑膜的總膠原含量，減輕關(guān)節(jié)粘連；C組與B組比較（P<0.01），表明關(guān)節(jié)內(nèi)注射丹參注射液比注射

17、玻璃酸鈉更能減少實(shí)驗(yàn)動物滑膜的總膠原含量。4 討論    關(guān)節(jié)粘連形成可看作為組織的纖維化，其開始于炎性反應(yīng)，伴隨中性粒細(xì)胞浸潤到受損組織的血凝塊內(nèi)，隨后巨噬細(xì)胞遷移，繼而出現(xiàn)成纖維細(xì)胞及膠原沉積，導(dǎo)致關(guān)節(jié)內(nèi)組織發(fā)生一系列粘連的病理改變，造成不同程度的膝關(guān)節(jié)屈伸障礙4。因此，防止術(shù)后再粘連非常重要。    丹參化學(xué)結(jié)構(gòu)基本清楚、臨床應(yīng)用時間較長、價格便宜，具有改善微循環(huán)、抗炎、抗氧化、抗纖維化、促進(jìn)損傷組織修復(fù)等多種功效5，降低其膠原的合成、分泌，促進(jìn)成纖維細(xì)胞凋亡，具有防治多種形式、多類組織器官的粘連或纖維化的作用，如皮膚瘢痕、角膜

18、瘢痕、硬膜外粘連、肺纖維化、肝纖維化等，上述的研究結(jié)果是本實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的基礎(chǔ)。    膠原含量是決定修復(fù)組織機(jī)械強(qiáng)度的一個關(guān)鍵性因素，組織羥脯氨酸水平是衡量粘連程度的一個有效指標(biāo)。Ozogul等6實(shí)驗(yàn)研究中發(fā)現(xiàn)粘連程度分級與組織羥脯氨酸水平是線性正相關(guān)，認(rèn)為組織羥脯氨酸水平是粘連程度的有力指標(biāo)，它比粘連程度分級更敏感、更客觀。本研究同樣證實(shí)了粘連程度分級與組織羥脯氨酸水平之間的相關(guān)關(guān)系。雖然丹參治療組關(guān)節(jié)活動度、關(guān)節(jié)粘連計(jì)分、滑膜病變計(jì)分小于玻璃酸鈉對照組，但丹參治療組總膠原含量小于玻璃酸鈉對照組。玻璃酸鈉作為一種預(yù)防粘連藥物，具有良好的生物相容性和可降解性，起到屏障

19、作用，但不能有效抑制滑膜組織膠原含量的產(chǎn)生；而丹參減少滑膜組織的膠原含量，預(yù)防關(guān)節(jié)粘連可能與以下因素有關(guān)：通過提高嘌呤核苷磷酸酶水平，增強(qiáng)網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的吞噬能力，有利于加速血腫和炎性介質(zhì)的清除，加速創(chuàng)傷的清掃過程，使得損傷早期得以恢復(fù)，而膠原沉積量減少，粘連減輕；丹參可有效抑制成纖維細(xì)胞的增殖，減少膠原等細(xì)胞外基的沉積7，發(fā)揮預(yù)防粘連的作用。本研究顯示，丹參能顯著減少髕上囊前壁滑膜病變計(jì)分，減輕滑膜損傷性修復(fù)后期的肉芽組織纖維化及瘢痕形成。亦有人認(rèn)為關(guān)節(jié)纖維化與T細(xì)胞誘導(dǎo)的免疫反應(yīng)密切相關(guān)8，而丹參的抗炎和免疫調(diào)節(jié)作用5可能是其減少滑膜病變計(jì)分的原因；羥脯氨酸是形成膠原的前體，能反映膠原代謝情況，反映組織粘連的程度。丹參通過降低羥脯氨酸摻入量，使膠原合成下降，從而有效地預(yù)防關(guān)節(jié)粘連。另外，丹參還可激活單核/吞噬細(xì)胞系統(tǒng)，分泌多種生長因子，使得軟組織損傷早期得以恢復(fù)而膠原沉積量減少，粘連減輕。    綜上所述，丹參能顯著增加兔膝關(guān)節(jié)粘連模型的關(guān)節(jié)活動度，減少關(guān)節(jié)腔粘連計(jì)分，減少滑膜組織的膠原含量。證實(shí)丹參能減輕關(guān)節(jié)粘連程度，部分預(yù)防關(guān)節(jié)粘連的發(fā)生，與玻璃酸鈉的效果類似，表明丹參膝關(guān)節(jié)內(nèi)注射可以有效預(yù)防術(shù)后關(guān)節(jié)粘連，對膝關(guān)節(jié)功能恢復(fù)十分有利