風(fēng)疹病毒IgG抗體檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫法)說明書

1、風(fēng)疹病毒IgG抗體檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法）說明書【產(chǎn)品名稱】通用名稱：風(fēng)疹病毒IgG抗體檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法）英文名稱：Diagnostic Kit for IgG Antibody to Rubella Virus【包裝規(guī)格】48人份/盒 96人份/盒【預(yù)期用途】該產(chǎn)品用于體外定性檢測(cè)血清或血漿中的風(fēng)疹病毒IgG抗體。風(fēng)疹是風(fēng)疹病毒（Rubella, RV）感染人體后出現(xiàn)的常見癥狀，屬于一種急性、輕型、病程短的自限性疾病，常表現(xiàn)為出疹、急性發(fā)熱、頜下淋巴結(jié)腫大等癥狀，與麻疹病毒感染癥狀不易區(qū)分。同時(shí)風(fēng)疹又是一種重要的胎兒致畸病毒，孕婦妊娠期間，尤其前4個(gè)月感染RV，病毒可以經(jīng)胎盤傳染胎兒，

2、導(dǎo)致胎兒的宮內(nèi)感染并最終導(dǎo)致胎兒流產(chǎn)、畸形或死胎、先天性風(fēng)疹綜合征(CRS)。風(fēng)疹有25 50呈隱性感染，顯性感染則與許多疾病類似。大量的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明，由于風(fēng)疹的臨床表現(xiàn)與許多疾病例如麻疹病毒、登革熱病毒、微小病毒Bl 、大皰疹病毒6型、柯薩奇病毒、?？刹《镜雀腥静灰紫嗷^(qū)別，風(fēng)疹的臨床診斷不十分可靠，因此在臨床上與這些疾病的鑒別診斷很困難。本試劑盒用于風(fēng)疹病毒IgG抗體的定性測(cè)定，適用于血清或血漿類標(biāo)本，僅供體外診斷使用， 適用于風(fēng)疹病毒感染及相關(guān)癥狀的輔助診斷。【檢驗(yàn)原理】風(fēng)疹病毒 IgG 抗體酶標(biāo)試劑盒選用高質(zhì)量的風(fēng)疹抗原包被酶標(biāo)板， 當(dāng)含有風(fēng)疹病毒IgG抗體的樣品加入到酶標(biāo)板上時(shí)，Ig

3、G抗體與酶標(biāo)板上固定的風(fēng)疹抗原相結(jié)合，從而形成風(fēng)疹病毒抗原-風(fēng)疹病毒IgG抗體的免疫復(fù)合物固定在酶標(biāo)板上，其余沒有結(jié)合上去的物質(zhì)則通過洗滌的步驟而被除去。在第二步反應(yīng)中，與辣根過氧化物酶耦聯(lián)的抗人IgG加入到反應(yīng)孔上，與固定在酶標(biāo)板上的風(fēng)疹病毒抗體相結(jié)合形成了新的免疫復(fù)合物：風(fēng)疹病毒抗原-風(fēng)疹病毒IgG抗體-抗人IgG-HRP。通過洗滌除去未結(jié)合的物質(zhì)后加入HRP的底物進(jìn)行顯色反應(yīng)。在HRP酶的催化作用下，無色的顯色劑逐漸變?yōu)樗{(lán)色。加入終止液后，顯色反應(yīng)結(jié)束，溶液從藍(lán)色變?yōu)辄S色。顏色的深淺代表了標(biāo)本中所含抗風(fēng)疹病毒IgG抗體的多少。用酶標(biāo)儀在450nm/630nm波長(zhǎng)進(jìn)行讀數(shù)，使用試劑盒附帶的

4、系列校準(zhǔn)品，利用線性回歸的方法得到標(biāo)準(zhǔn)曲線，可將OD值轉(zhuǎn)化為具體的濃度單位：IU/mL?！局饕M成成份】組成組分成分96人份/盒48人份/盒1微孔反應(yīng)板包被有風(fēng)疹病毒抗原。8孔×128孔×6或12孔×42樣品稀釋液含Tris-HCl緩沖液、BSA和少量指示劑的綠色液體，含0.1%的proclin300保護(hù)劑。12.0ml×1瓶6.0ml×1瓶3酶結(jié)合物HRP標(biāo)記過含有抗人IgG抗體的紅色液體，含0.1%的proclin300保護(hù)劑。12.0ml×1瓶6.0ml×1瓶4校準(zhǔn)品1#不含風(fēng)疹病毒IgG抗體的溶液，含0.1%的pro

5、clin300保護(hù)劑。1.0 ml×1瓶0.5 ml×1瓶5校準(zhǔn)品2#含5 IU/ml風(fēng)疹病毒IgG抗體溶液，含0.1%的proclin300保護(hù)劑。1.0 ml×1瓶0.5 ml×1瓶6校準(zhǔn)品3#含10IU/ml風(fēng)疹病毒IgG抗體溶液，含0.1%的proclin300保護(hù)劑。1.0 ml×1瓶0.5 ml×1瓶7校準(zhǔn)品4#含200 IU/ml風(fēng)疹病毒IgG抗體溶液，含0.1%的proclin300保護(hù)劑。1.0 ml×1瓶0.5 ml×1瓶8濃縮洗滌液（25×）濃縮的Tris鹽緩沖液，使用前將濃縮洗滌液

6、用蒸餾水或去離子水按1：24稀釋成工作洗滌液。50.0ml×1瓶40.0ml×1瓶9顯色劑A含檸檬酸三鈉和過氧化脲的無色液體，含0.1%的proclin300保護(hù)劑。8.0 ml×1瓶4.0 ml×1瓶10顯色劑B含檸檬酸三鈉和3,3,5,5- 四甲基聯(lián)苯胺（TMB）的無色液體，含0.1%的proclin300保護(hù)劑。8.0 ml×1瓶4.0 ml×1瓶11終止液2 mol/l 的硫酸溶液8.0 ml×1瓶4.0 ml×1瓶12封口膠紙粘性, 可撕開，用于封酶標(biāo)板3片3片13說明書用于使用指導(dǎo)1份1份注意：不同批號(hào)

7、試劑盒中各組份不可以互換【儲(chǔ)存條件及有效期】1 本試劑盒應(yīng)避光存儲(chǔ)在2-8，有效期12個(gè)月。2 濃縮洗滌液在2-8儲(chǔ)存時(shí)可能會(huì)有結(jié)晶產(chǎn)生，使用前必須將其在室溫下溶解。3 拆開后，未使用的酶標(biāo)板條可放入鋁箔袋內(nèi)，加入干燥劑封好后，儲(chǔ)存在2-8。使用后，剩余的試劑盒有效期為1個(gè)月?！具m用儀器】1 具有單波長(zhǎng)450nm或雙波長(zhǎng)450nm、630nm的酶標(biāo)儀。2 洗板機(jī)?！緲颖疽蟆? 標(biāo)本：血清或血漿樣本。2 采集： a) 可以使用普通生化、肝素、EDTA、草酸鉀和ACD作抗凝劑。不能檢測(cè)含有疊氮鈉的樣品。b) 抽取適量靜脈血3ml，如為不抗凝血須待其自然凝固后再離心，如為抗凝血可馬上離心，離心時(shí)請(qǐng)

8、用3000-4000rpm離心10-30min。3 存放：標(biāo)本2-8可儲(chǔ)存一周；長(zhǎng)期儲(chǔ)存須置-20低溫冰箱中，忌反復(fù)凍融。對(duì)于沒有立即處理的新樣本或已經(jīng)儲(chǔ)存在零下18至25攝氏度的樣本，試驗(yàn)前需完全混勻。新樣本和冷藏樣本的測(cè)定結(jié)果有一定的區(qū)別，因此針對(duì)同一患者，應(yīng)使用同一種類型的樣本。（也就是說應(yīng)使用新樣本或使用冷藏樣本而不應(yīng)將兩者混合）。 【檢驗(yàn)方法】 使用前準(zhǔn)備1 試劑盒和待檢驗(yàn)的樣品置室溫平衡30分鐘。2 將濃縮洗滌液用蒸餾水或去離子水按1：24稀釋成工作洗滌液（1ml濃縮洗滌液中加入24ml蒸餾水或去離子水）。操作步驟1 每次實(shí)驗(yàn)均須設(shè)立空白對(duì)照孔1孔，校準(zhǔn)品1# - 4# 各2孔，

9、每孔各加入100微升相對(duì)應(yīng)的校準(zhǔn)品。2 將100微升樣品稀釋液加入剩余的各個(gè)反應(yīng)孔中(空白對(duì)照孔除外)。3 將5微升待測(cè)樣品加入到加有樣品稀釋液的反應(yīng)孔中，混勻。空白對(duì)照孔不加樣品。4 覆蓋封口膠紙，置37孵育30分鐘。5 取出已孵育完畢的反應(yīng)板，棄去封口膠紙。6 洗板5次，拍干（手工洗板：棄去孔內(nèi)液體，洗滌液注滿各孔，靜置30秒，甩干，重復(fù)5次后拍干。洗板機(jī)洗板：選擇洗滌5次程序洗板后拍干）。7 每孔加入酶結(jié)合物100微升(空白對(duì)照孔除外)。8 覆蓋封口膠紙，置37孵育30分鐘。9 取出已孵育完畢的反應(yīng)板，棄去封口膠紙，洗板5次，拍干。10 每孔加入50 ul顯色劑A液后再加入50 ul顯色

10、劑B液，輕輕震蕩混勻。11 覆蓋封口膠紙，置37孵育10分鐘。12 每孔加入終止液50微升。13 30分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀讀數(shù)，取波長(zhǎng)450nm（建議采用雙波長(zhǎng)的酶標(biāo)儀比色，參考波長(zhǎng)630nm），先用空白對(duì)照孔校零，然后測(cè)定各孔OD值。 質(zhì)量控制每個(gè)酶標(biāo)板滿足下列條件的實(shí)驗(yàn)是有效的：1 在減去空白值后，校準(zhǔn)品1#平均OD值應(yīng)小于0.100。23 在減去空白值后，校準(zhǔn)品3#平均OD值應(yīng)處于校準(zhǔn)品2#平均OD值與校準(zhǔn)品4#平均OD值之間。4 在減去空白值后，校準(zhǔn)品4#平均OD值應(yīng)大于1.500。如不能同時(shí)滿足上述條件，則此酶標(biāo)板的試驗(yàn)結(jié)果無效，全部試驗(yàn)需重新進(jìn)行?！緟⒖贾担▍⒖挤秶繀⒖贾当驹噭┖袑⑿?/p>

11、準(zhǔn)品3# OD值 （10IU/ml）定為cutoff值。參考范圍確定的方法 通過大量臨床標(biāo)本的檢測(cè)結(jié)果，并參考國(guó)際知名公司相關(guān)產(chǎn)品的CUTOFF值，將10 IU/mL定為本試劑盒的CUTOFF值?！緳z驗(yàn)結(jié)果的解釋】 結(jié)果分析如果檢測(cè)樣品OD值達(dá)到校準(zhǔn)品3# 平均OD值的1.1倍以上，則檢測(cè)樣品判為陽性。如果檢測(cè)樣品OD值低于校準(zhǔn)品3# 平均OD值的0.5倍以下，則檢測(cè)樣品判為陰性。如果檢測(cè)樣品OD值處于校準(zhǔn)品3# 平均，該樣品應(yīng)重新測(cè)試。重測(cè)后仍然可疑的樣本，應(yīng)選擇另一種方法重新測(cè)試，如，免疫熒光法（IFA）。如用該方法檢測(cè)結(jié)果仍然可疑，應(yīng)另取該病人樣本重新測(cè)試?！緳z驗(yàn)方法的局限性】1 其他方

12、法所得到的檢測(cè)值與本品測(cè)定結(jié)果不具有直接的可比性。2 必須按照說明書的試驗(yàn)步驟和結(jié)果分析來操作。3 抗體檢測(cè)結(jié)果陰性并不排除風(fēng)疹病毒感染的可能性。4 用該試劑盒檢測(cè)的陽性結(jié)果至少要用其它的試驗(yàn)進(jìn)一步確認(rèn)。5 嚴(yán)重溶血，凝集不完全或有微生物污染都有可能對(duì)結(jié)果造成誤差?！井a(chǎn)品性能指標(biāo)】1 靈敏度和特異性以艾康風(fēng)疹病毒IgG抗體檢測(cè)試劑盒檢測(cè)經(jīng)其他商品化的試劑盒確認(rèn)過的陰、陽性標(biāo)本，計(jì)算靈敏度和特異性。結(jié)果顯示：本試劑盒靈敏度為98.6% （95%置信區(qū)間：97.63-99.26%），特異性為97.81% （95%置信區(qū)間：94.50-99.40%）。方法商品化的試劑盒總數(shù)艾康風(fēng)疹病毒IgG抗體檢測(cè)

13、試劑盒結(jié)果陽性陰性陽性9224926陰性13179192總數(shù)93518311182 精密性批內(nèi)差評(píng)估方法方法：用艾康風(fēng)疹病毒IgG抗體檢測(cè)試劑盒分別重復(fù)檢測(cè)低滴度陽性標(biāo)本和中滴度陽性標(biāo)本各10例（n=10），計(jì)算平均值、標(biāo)準(zhǔn)偏差和變異系數(shù)。批間差評(píng)估方法方法：分別用3個(gè)不同批號(hào)的艾康風(fēng)疹病毒IgG抗體檢測(cè)試劑盒分別重復(fù)檢測(cè)低滴度陽性標(biāo)本和中滴度陽性標(biāo)本各10例（n=30），計(jì)算平均值、標(biāo)準(zhǔn)偏差和變異系數(shù)。批內(nèi)差 （n=10）標(biāo)本均值X （S/CO）標(biāo)準(zhǔn)偏差SD變異系數(shù)CV（%）11.2060.0655.39021.8840.1115.892批間差 （n=30）標(biāo)本均值X （S/CO）標(biāo)準(zhǔn)偏差S

14、D變異系數(shù)CV（%）11.2290.0574.63821.8460.1116.013本產(chǎn)品對(duì)常用藥物，如醋氨酚（0.199 mg/ml），阿斯匹林（0.652 mg/ml），青霉素（0.024 mg/ml）無顯著干擾。本產(chǎn)品對(duì)內(nèi)源性干擾物，如膽固醇（5.031 mg/ml），尿酸（0.235 mg/ml），膽紅素（2mg/ml），血紅素（2mg/ml）無顯著干擾。麻疹和猩紅熱與風(fēng)疹病毒感染類似，都會(huì)發(fā)生出疹的癥狀。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)證明麻疹和猩紅熱，以及單純皰疹1型病毒，單純皰疹2型病毒，巨細(xì)胞病毒，抗核抗體和類風(fēng)濕因子對(duì)本公司的產(chǎn)品檢測(cè)不存在明顯的交叉反應(yīng)?！咀⒁馐马?xiàng)】1 本品僅用于體外診斷，本試劑的

15、使用單位必須是經(jīng)當(dāng)?shù)匦l(wèi)生行政部門批準(zhǔn)的風(fēng)疹病毒初篩實(shí)驗(yàn)室。2 檢測(cè)必須符合風(fēng)疹病毒實(shí)驗(yàn)室管理規(guī)范和生物安全守則的規(guī)定，嚴(yán)格防止交叉污染，操作時(shí)必須戴手套、穿工作服，嚴(yán)格健全和執(zhí)行消毒制度。所有樣品、洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。3 若有潛在傳染性病原體的液體溢出，立即使用1：10新鮮配制的5%次氯酸鈉溶液清除。4 超過有效期的試劑盒不能使用。5 使用前試劑盒和樣品應(yīng)置室溫平衡30分鐘后，方可進(jìn)行檢測(cè)，實(shí)驗(yàn)后未用完的微孔條用鋁箔袋密封保存于2-8。6 加液時(shí)應(yīng)使用加液器加液，并經(jīng)常校對(duì)加液器的準(zhǔn)確性。加入不同樣品或不同試劑組分時(shí)，應(yīng)更換加樣器吸頭，避免交叉污染。在加液時(shí)應(yīng)沿孔壁加入，避免外

16、濺。7 封口膠紙不能重復(fù)使用。8 洗板結(jié)束后，必須立即進(jìn)入下一步實(shí)驗(yàn)，不可使酶標(biāo)孔干燥。9 風(fēng)疹病毒IgG抗體檢測(cè)結(jié)果的判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)，建議用雙波長(zhǎng)450/630nm檢測(cè)。10 結(jié)果判斷應(yīng)在反應(yīng)終止后30分鐘內(nèi)完成。終止液為2M的硫酸，使用時(shí)注意安全?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1 Herrmann, KL. Rubella Virus. In: Manual of Clinical Microbiology. American Society for Microbiology 4th Edition (1985) 779-784.2 Turgeon, ML. Rubella Infection.

17、In: Immunology and Serology in Laboratory Medicine. 2nd Edition (1996). 275-286.3 Chernesky, MA, Mahony JB. Rubella Virus. In: Manual of Clinical Microbiology. 6th Edition (1995) 968-973.4 Voller, A, Bidwell, DE, A simple Method for Detecting Antibodies to Rubella. Brit. J. Exp. Pathol. (1975) 56:338-339.5 Rawls WE, Chernesky MA. Rubella Virus. Manual Clinical Immunology (1976) 452-455.6 Millian, SJ, Wegman D. Rubella Serology: Applications, Limitations, and Inte