陰離子交換柱使用手冊(cè)

1、陰離子交換柱使用手冊(cè)Chrompack HPLC IonoSpher A Columns注意Chrompack IonoSpher A 色譜柱填充的是改性硅膠材料。向柱內(nèi)導(dǎo)入堿性溶劑（pH6.5）或酸性溶劑（pH2.5）會(huì)溶解硅膠材料導(dǎo)致柱子損壞。在使用這個(gè)柱子之前，你要充分地熟悉這本手冊(cè)講述的內(nèi)容。1 簡(jiǎn)介Chrompack IonoSpher A 柱填充硅膠基質(zhì)的強(qiáng)陰離子交換材料，含有季胺功能團(tuán)。特別設(shè)計(jì)用于使用常規(guī)HPLC分析有機(jī)和無(wú)機(jī)陰離子。2 色譜柱老化在開(kāi)始分析工作以前，柱子必須經(jīng)過(guò)正確的老化。一個(gè)沒(méi)有正確老化的柱子可能會(huì)帶來(lái)問(wèn)題，諸如很差的柱效或者分離情況發(fā)生變化等等。要老化這類(lèi)

2、柱子，首先要使用甲醇淋洗，然后使用去離子水。再用你選用的洗脫液進(jìn)行平衡。在發(fā)貨以前，每根柱子都已經(jīng)測(cè)試過(guò)并進(jìn)行了老化。因此沒(méi)有必要在第一次使用時(shí)用水沖洗）。3 洗脫液推薦在這類(lèi)柱上使用的洗脫液要求低電導(dǎo)，或者UV吸收的緩沖液，例如磷酸緩沖液，pH范圍從2.5到6.5。絕對(duì)不能使用水楊酸緩沖液，因?yàn)樗畻钏岱纸猱a(chǎn)物會(huì)改變固定相的性質(zhì)。另外，硝酸銨（1mM）可以改善峰型，而且不會(huì)明顯影響保留時(shí)間，檢測(cè)或定量結(jié)果。洗脫液在使用以前要脫氣，并用0.45微米濾膜過(guò)濾，防止發(fā)生檢測(cè)和泵送問(wèn)題。一定要在開(kāi)始使用系統(tǒng)以前檢查有否微生物生長(zhǎng)，否則你的柱子會(huì)堵塞，柱壓會(huì)升高到無(wú)法接受的水平。4 流量和壓力柱內(nèi)徑（毫

3、米）流速（ml/min）最佳最高2.00.21.03.00.42.04.61.04.010.04.718.0注意：最高壓力：不銹鋼柱：4500psi；玻璃柱：3000psi增加流速或者降低流速要采取小的間隔變化以防止填充床的擾動(dòng)。如果你想更換柱子，要降低流量至0，等待洗脫液完全流出柱子為止（2分鐘）。拆除柱子而沒(méi)有等待壓力的降低會(huì)損壞柱子。高柱壓的產(chǎn)生一般是由于不正確地使用柱子的結(jié)果。使用保護(hù)柱（見(jiàn)第6節(jié)）會(huì)防止污染物沉積在分析柱上。5 樣品準(zhǔn)備保持柱子長(zhǎng)壽的關(guān)鍵是進(jìn)樣前適當(dāng)?shù)牡臉悠诽幚?。你必須防止將疏水?與流動(dòng)相極性差別很大的化合物泵入色譜柱， 不管是來(lái)自流動(dòng)相還是樣品。特別地，要禁止導(dǎo)入

4、顆粒雜質(zhì)。這些最終都會(huì)造成操作壓力的增高而且非常困難或者不可能去除。6 保護(hù)柱一定要使用保護(hù)柱，因?yàn)闃悠泛拖疵撘何廴究赡軙?huì)造成柱壓力的增高而且影響選擇性。對(duì)于ChromSep 柱我們建議使用ChromSep Anion 交換保護(hù)柱。當(dāng)柱壓增高的或者觀(guān)察到柱效降低的時(shí)候就需要更換保護(hù)柱了。對(duì)于常用不銹鋼柱，我們建議使用Chromguard Anion exchange High Efficiency（高效）柱(10X3.0mm) 或High Capacity（高容量）柱(50X3.0mm)。7 進(jìn)樣量和濃度柱尺寸長(zhǎng)度*內(nèi)徑最大樣品體積2502.0mm10l2003.0mm15l2504.6mm5

5、0l25010.0mm250l當(dāng)樣品的洗提強(qiáng)度比洗脫液低（在柱樣品預(yù)濃縮）的時(shí)候，更高的樣品量也可以注射。8 溫度Chrompack IonoSpher A 柱可以在室溫環(huán)境使用。為了提高柱子的穩(wěn)定性，建議不要在40C以上使用。9 貯存在貯存柱子以前，建議先用去離子水，然后用甲醇沖洗。一定不要在柱子內(nèi)充滿(mǎn)緩沖液或者其他含鹽類(lèi)的洗脫液的情況下貯存色譜柱。10 檢測(cè)靈敏度對(duì)于使用鄰苯二甲酸緩沖液作為洗脫液的陰離子的檢測(cè)，以下幾種方法可用：折光檢測(cè)電導(dǎo)檢測(cè)紫外檢測(cè)鄰苯二甲酸緩沖液對(duì)所有三種檢測(cè)方法都是特別好的，因?yàn)猷彵蕉姿峋彌_液具有高的折光性，相對(duì)低的電導(dǎo)率和紫外吸收性質(zhì)。檢測(cè)波長(zhǎng)取決于要檢測(cè)的離

6、子。11 系統(tǒng)峰當(dāng)你使用Chrompack IonoSpher A 柱的時(shí)候，系統(tǒng)峰可能會(huì)出現(xiàn)。通常一個(gè)餾分既溶劑在前面，第二個(gè)餾分應(yīng)當(dāng)是硫酸鹽。方向（正峰或負(fù)峰）取決于樣品的pH。位置取決于流動(dòng)相的Ph。較低pH會(huì)使系統(tǒng)峰向前移動(dòng)。在我們的實(shí)驗(yàn)中pH值在3.8-4.3之間最佳。12柱效損失的可能原因1 額外的峰展寬。要保證管路的長(zhǎng)度和內(nèi)徑都保持最小。2 洗脫的平衡時(shí)間不夠。3 不正確的洗脫液pH或洗脫液的離子強(qiáng)度。4 洗脫液中存在不正確離子。5 固定相污染。a. 高柱壓伴隨分辨率降低。1 顆粒物積聚在燒結(jié)物或者填充物床上。（a） 樣品來(lái)源-過(guò)濾或離心（b） 洗脫液來(lái)源-過(guò)濾洗脫液，封閉洗脫液

7、容器。（c） 系統(tǒng)來(lái)源-沖洗整個(gè)系統(tǒng)管路和泵；安裝在線(xiàn)系統(tǒng)過(guò)濾器。2 蛋白質(zhì)類(lèi)物質(zhì)的積聚（a） 微生物在樣品中生長(zhǎng)。3 微生物在洗脫液中生長(zhǎng)。b. 正常柱壓伴隨柱效降低1 有機(jī)污染（a） 樣品中有脂肪，油脂，脂質(zhì)。固定相的表面被覆蓋。（b） 從樣品中帶來(lái)的不確切的有機(jī)物或未正確制備的洗脫液。（c） 在洗脫液制備完成以后帶入洗脫液中的非特定有機(jī)物，例如在運(yùn)輸時(shí)從大氣中帶來(lái)。13.對(duì)于糾正污染問(wèn)題的可能有效的操作1 準(zhǔn)備新鮮的洗脫液在很多情況下，柱效的喪失可以歸結(jié)為洗脫液的污染。所以，要在使用柱子以前準(zhǔn)備新鮮的洗脫液，沖洗所有液體管路。洗脫液應(yīng)當(dāng)用0.2到0.4微米的濾膜過(guò)濾，在使用以前要脫氣。2 色譜柱再生要進(jìn)行色譜柱的再生工作a 首先使色譜柱反向b 以0.4ml/min的流速用1M硝酸銨洗脫30ml。c 以0.4ml/min的流速用40：60 （v：v）的甲醇/水洗脫30ml。d 以0.4ml/min的流速用異丙醇洗脫30ml。e 以0.4ml/min的流速用水洗脫30m