山楂果中黃酮化合物的光譜分析及抗氧化性能測(cè)定

1、山楂果中黃酮化合物的光譜分析及抗氧化性能測(cè)定回瑞華，侯冬巖，劉曉媛，唐蕊，李學(xué)成（鞍山師范學(xué)院化學(xué)系，遼寧鞍山）摘要：采用超聲波法從山楂果中提取黃酮類化合物，并建立了山楂果中黃酮化合物的光譜分析方法。本法的回收率為，變異系數(shù)小于。用流動(dòng)注射化學(xué)發(fā)光法測(cè)定了山楂果的抗氧化性能，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：山楂果具有較強(qiáng)的抗氧化性能，并且抗氧化性能隨著濃度的增加而增加。關(guān)鍵詞：山楂果；黃酮；光譜分析；流動(dòng)注射化學(xué)發(fā)光；抗氧化性，（，）：收稿日期：基金項(xiàng)目：遼寧省教育廳科學(xué)技術(shù)基金資助課題（）作者簡介：回瑞華（），女，教授，主要從事有機(jī)分析及天然產(chǎn)物化學(xué)教學(xué)與研究。和精胺的回收率大于，但小于，仍在允許的誤差范圍內(nèi)

2、。黃酒中生物胺的種類及含量黃酒中生物胺的色譜圖及種生物胺含量見圖和表。圖可見，應(yīng)用本實(shí)驗(yàn)建立的方法可檢測(cè)出黃酒中的種生物胺，除酪胺稍有拖尾現(xiàn)象外，其他種生物胺都得到很好的分離。表可見，生物胺的種類及含量因酒的品種而異，種生物胺平均總量為，變異范圍為。討論有關(guān)酒中生物胺測(cè)定方法國內(nèi)未見報(bào)道，我們參考國外相關(guān)文獻(xiàn)，建立并優(yōu)化了高效液相色譜測(cè)定酒中生物胺的方法。此法快速、穩(wěn)定、靈敏度高，可用于乳制品、飲料等食品中生物胺的檢測(cè)。等報(bào)道啤酒中生物胺含量與原料質(zhì)量、釀造工藝以及釀造和貯藏過程中受微生物污染的程度密組胺能夠改善啤酒的風(fēng)味，使其口味更清爽，但高含量的色胺、尸胺、組胺說明釀造過程中受到微生物的污

3、染。黃酒中生物胺含量是否與原料的加工處理、發(fā)酵工藝以及陳釀時(shí)間和提取方式等因素有關(guān)還有待進(jìn)一步研究。參考文獻(xiàn)：，：，：，：，：，：李超產(chǎn)生物胺乳酸菌檢測(cè)方法的建立及其應(yīng)用南京：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)，；，（）：切相關(guān)。在啤酒釀造過程中，產(chǎn)生適量的色胺、尸胺、，：；中圖分類號(hào)：文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：文章編號(hào)：（）山楂（）為薔薇科落葉小喬木，又名紅果。主要分布在北溫帶，產(chǎn)于遼寧的山楂叫北山楂，果實(shí)大，直徑約，皮色紅，果肉厚，味酸甜。山楂的營養(yǎng)十分豐富，所含鈣列居各水果的第一位；所含維生素與香焦相當(dāng)，并列為水果的首位；所含維生素僅次于大棗、獼猴桃和沙棘，居各種水果的第四位；含胡蘿卜素僅次與杏子，居水果第二位，山楂含糖量

4、為左右，是蘋果和梨的兩倍，山楂果含有人體必須的氨基酸、多種脂肪酸、黃酮和糖類等營養(yǎng)成分，山楂果中的黃酮類成分可促使心血管擴(kuò)張，冠狀動(dòng)脈血流量增加，產(chǎn)生降血壓作用。研究表明。黃酮類化合物是一種天然的抗氧化劑，具有清除人體中超氧離子自由基抗衰老，增加機(jī)體免疫力的生理活性作用。本文采用超聲波法從山楂果中提取黃酮類化合物，并建立了山楂果中黃酮的光譜分析方法，。利用流動(dòng)注射化學(xué)發(fā)光法研究了山楂果的抗氧化性能。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，山楂果能有效的抑制超氧陰離子自由基誘導(dǎo)的魯米諾化學(xué)發(fā)光，并且隨著發(fā)光體系中山楂果濃度的升高，發(fā)光強(qiáng)度呈現(xiàn)下降趨勢(shì)。該實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示山楂果具有較強(qiáng)的抗氧化性能，并且抗氧化性能隨著濃度的增加

5、而增加，這將為進(jìn)一步開發(fā)利用山楂果提供了科學(xué)依據(jù)。材料與儀器區(qū)，洗凈涼干后榨成鮮汁備用。鄰苯三酚（級(jí)，貴州遵義市第二化工廠）用，配成儲(chǔ)備液，使用前用水稀釋濃度為×；緩沖溶液（級(jí)），用前新鮮配制，值用酸度計(jì)準(zhǔn)確調(diào)至；（級(jí)，陜西師范大學(xué)）用配成，在避光處保存（所用試劑均為分析純，水為二次蒸餾水）。山楂果中黃酮含量的測(cè)定超聲波法提取山楂果中黃酮，稱取山楂果鮮汁置于錐形瓶中，加入乙醇，在冰水浴中用超聲波振蕩器振蕩，將提取液過濾至容量瓶中，殘?jiān)僦貜?fù)振蕩提取兩次，三次濾液合并，用乙醇定容至。吸收曲線的繪制及測(cè)定波長的確定從山楂果超聲波法提取黃酮貯備液中，準(zhǔn)確吸取試液，置于容量瓶中，用三氯化鋁溶

6、液定容至刻度，以三氯化鋁溶液為參比液在范圍內(nèi)掃描，得到其吸收光譜，最大吸收波長為。從槲皮素黃酮標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液中準(zhǔn)確吸取于容量瓶中，用三氯化鋁溶液定容至刻度，以三氯化鋁溶液為參比液在范圍內(nèi)掃描，得到其吸收光譜，最大吸收波長為。由和可知，超聲波法提取山楂果中黃酮可用槲皮素做黃酮標(biāo)準(zhǔn)品，測(cè)定波長為。標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制分別取、的槲皮素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，注入容量瓶中，按步驟在其波長為分別測(cè)定其吸光度值并且給出值，結(jié)果見表。求得與濃度關(guān)系的回歸方程為：×根據(jù)與濃度的關(guān)系可繪制出線性很好的標(biāo)準(zhǔn)曲線求得相關(guān)系數(shù)，經(jīng)查表得臨界相關(guān)系數(shù)（，），（，），說明黃酮的濃度在紫外可見分光光度計(jì)北京普析通用儀器有限責(zé)任公司；旋

7、轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（型）上海亞榮生化儀器廠；電熱恒溫水浴鍋（型）上海醫(yī)療器械五廠；旋片式真空泵中華牌加熱器（型）鞏義市英峪儀器一廠；電子節(jié)能控溫儀（型）鞏義英峪儀器一廠；型流動(dòng)注射化學(xué)發(fā)光儀西安瑞邁電子科技有限公司；型精密計(jì)上海精密科學(xué)儀器有限公司。槲皮素黃酮標(biāo)準(zhǔn)品：中國藥品生物制品鑒定所。槲皮素黃酮標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：稱取槲皮素標(biāo)準(zhǔn)品，置于的容量瓶中，加乙醇（）使其溶解稀釋至刻度，搖勻備用。山楂果樣品的處理：年月采自遼寧本溪山表值與槲皮素黃酮濃度的關(guān)系Table1 Relationship between A and flavonoids concentrations（）（）范圍內(nèi)，與濃度之間呈良好的線性關(guān)系

8、，可按標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行定量分析。穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)用與繪制吸收曲線配制相同的方法配制的樣品進(jìn)行穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明：樣品放置以上，測(cè)得其吸光度值不變。回收率及方法精密度根據(jù)前面確定的測(cè)試條件，按上述實(shí)驗(yàn)方法制備個(gè)不同濃度的樣品，按標(biāo)準(zhǔn)加入標(biāo)準(zhǔn)物，在測(cè)定波長下測(cè)定，求得其平均回收率，標(biāo)準(zhǔn)偏差及變異系數(shù)，結(jié)果分別列于表和表。由表和表可以看出本法的回收率為，變異系數(shù)小于，方法的準(zhǔn)確度與精密度均較高。樣品分析稱取山楂果樣品，按、實(shí)驗(yàn)方法制備樣品溶液，按操作條件，在測(cè)定波長處測(cè)其吸光度，分析結(jié)果山楂果黃酮含量為。表方法精密度Table 2 Precision of the method序號(hào)標(biāo)樣濃度（）測(cè)定值（）測(cè)

9、定平均值（）（）標(biāo)準(zhǔn)偏差（）變異系數(shù)（）蠕動(dòng)泵；進(jìn)樣閥；流通池；光電倍增管；放大器；負(fù)高壓：；記錄儀；廢液。樣品；鄰苯三酚；緩沖溶液（加入）。圖流動(dòng)注射化學(xué)發(fā)光分析流路圖Fig.1 Schematic of flow-injection chemiluminescence酸鹽緩沖溶液發(fā)光體系的發(fā)光，測(cè)三次，取峰值平均值進(jìn)行定量。發(fā)光強(qiáng)度以計(jì)數(shù)表示。氧化性測(cè)定及抑制率計(jì)算按所采用的發(fā)光體系，測(cè)定一系列濃度山楂果的抑制后的發(fā)光，分別測(cè)定三次，同樣取峰值平均值進(jìn)行定量。發(fā)光強(qiáng)度以計(jì)數(shù)表示。以鄰苯三酚碳酸鹽緩沖溶液發(fā)光體系的發(fā)光強(qiáng)度為空白發(fā)光峰值，可計(jì)算出加入山楂果后抑制發(fā)光的程度。抑制率（空白發(fā)光峰

10、值加山楂果后的發(fā)光峰值）空白發(fā)光峰值×濃度對(duì)抑制率的影響取濃度為×的鄰苯三酚溶液，值為的緩沖溶液，抑制實(shí)驗(yàn)中的山楂果濃度為，改變的用量，分別取、的用緩沖溶液將其稀釋至進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明的加入量對(duì)抑制率有一定的影響。當(dāng)?shù)臐舛葹闀r(shí)山楂果的抑制率達(dá)到最大值。因此本實(shí)驗(yàn)選的濃度為時(shí)為適宜的測(cè)定條件。緩沖溶液的值對(duì)抑制率的影響取濃度為×的鄰苯三酚溶液，濃度為的溶液，抑制實(shí)驗(yàn)中山楂果的濃度為，僅改變緩沖溶液的值進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，值對(duì)抑制率有一定的影響，當(dāng)值為時(shí)抑制率達(dá)到最大值，但是其發(fā)光強(qiáng)度很低，靈敏度不好；當(dāng)值為時(shí)，抑制率低；當(dāng)值為時(shí)，抑制率和值為時(shí)的抑制率僅差，

11、而且發(fā)光強(qiáng)度適宜，靈敏度也比較好，便于準(zhǔn)確讀數(shù)。故本實(shí)驗(yàn)選值為適宜的測(cè)定條件。鄰苯三酚濃度對(duì)抑制率的影響取值為的緩沖溶液，濃度表方法回收率Table 3 Recovery ratio of the method序號(hào)標(biāo)樣濃度（）加入量（）理論值（）實(shí)測(cè)值（）回收率（）測(cè)定山楂果抗氧化性能的測(cè)定鄰苯三酚碳酸鹽緩沖溶液發(fā)光體系及其在比色管中分別加入×的鄰苯三酚溶液、為的碳酸鹽緩沖溶液（含濃度為的），啟動(dòng)型流動(dòng)注射化學(xué)發(fā)光儀，按下圖連接流路，流速均為，測(cè)出鄰苯三酚碳為的溶液，抑制實(shí)驗(yàn)中山楂果的濃度為，僅改變鄰苯三酚的濃度，分別取濃度為鄰苯三酚、稀釋至，即得濃度為×、×、&

12、#215;、×的鄰苯三酚溶液進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，鄰苯三酚的濃度對(duì)抑制率也有一定的影響。可以看出當(dāng)鄰苯三酚的濃度為×時(shí)山楂果的抑制率達(dá)到最大值。因此本實(shí)驗(yàn)選鄰苯三酚濃度為×為適宜條件進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。由以上實(shí)驗(yàn)可得出測(cè)定山楂果的抗氧化性能的最佳條件為：的濃度，緩沖溶表山楂果抗氧化性能的測(cè)定Table 4 Determination of antioxidation for C.pinnatifida Bunge（）（）液的值，鄰苯三酚的濃度×。山楂果抗氧化性能的測(cè)定在選定的最佳條件下，將山楂果溶液配制成、一系列濃度的溶液進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表和圖：由圖可以看出，隨著山楂果濃度的逐漸增加，化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度呈現(xiàn)逐漸降低的趨勢(shì)，而抑制率則呈現(xiàn)逐漸增強(qiáng)的趨勢(shì)，說明山楂果具有較強(qiáng)的抗氧化性能，其（抑制率為時(shí)的溶液的濃度）為。結(jié)果與討論實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明山楂果中含有豐富的黃酮類化合物，黃酮類化合物是一種天然的抗氧化劑，由山楂果抗氧化性能的測(cè)定可以看出山楂果具有較強(qiáng)的抗氧化性能，山楂果的（抑制率為時(shí)的溶液的濃度）為，當(dāng)山楂果提取液的濃度為時(shí)，抗氧化性為。黃酮類化合物含量和抗氧化性都隨著山楂果濃度的逐漸增加而增加即的黃酮含量與抗氧化性能呈現(xiàn)明顯的構(gòu)效關(guān)系。參考文獻(xiàn)：（）（）圖山楂果