抗凋亡蛋白xiap在急性白血病中的表達及臨床意義

1、抗凋亡蛋白xiap在急性白血病中的表達及臨床意義     【關(guān)鍵詞】  xiap；白血病；凋亡【摘要】  目的 本研究通過檢測抗凋亡蛋白xiap在急性白血病（al）中的表達，探討xiap在al中的臨床意義。方法 應(yīng)用sp-免疫組織化學(xué)方法檢測78例al患者初治組、緩解組、復(fù)發(fā)組及25例正常人（對照組）中xiap的表達情況。結(jié)果 （1） xiap在初治 al患者骨髓中表達水平及表達強度均高于緩解組 （p<0.05, p<0.008）和對照組 （p<0.05, p<0.008）,與復(fù)發(fā)組相比差異均無顯著性

2、（p>0.05）；（2）xiap高表達患者完全緩解率低于xiap低表達患者（p<0.05）。結(jié)論 xiap過度高表達和急性白血病的發(fā)病和復(fù)發(fā)相關(guān)，xiap可作為預(yù)后不良的指標(biāo)。   3  討論    白血病細(xì)胞存在增殖失控、分化障礙及凋亡受阻的生物學(xué)特點4，5。凋亡受阻不僅與白血病的發(fā)生和病情進展密切相關(guān)6，對于化療效果及預(yù)后也起著決定性作用。凋亡抑制蛋白xiap可以與caspase-9/-3/-7直接結(jié)合，抑制caspase活性，從而抑制細(xì)胞凋亡的發(fā)生，尤其對于下游的效應(yīng)caspase（如caspase-3）的

3、抑制作用對阻止細(xì)胞凋亡發(fā)生具有重要意義，起到類似“看門人”的作用。notarbartolo等7研究表明，xiap在大多數(shù)腫瘤細(xì)胞系的表達高于正常組織，在一些腫瘤耐藥細(xì)胞系的表達高于親代細(xì)胞。cater等8通過免疫印跡分析白血病細(xì)胞株及原發(fā)性急性髓系白血病骨髓單個核細(xì)胞標(biāo)本均表達不同水平的xiap蛋白。    本實驗研究采用免疫組化方法對78例al患者和25例正常人的骨髓xiap蛋白表達情況進行了檢測。xiap蛋白在初治al患者骨髓中表達水平高于緩解組和對照組，差異均有顯著性，提示xiap在急性白血病的發(fā)生中可能起到重要作用。復(fù)發(fā)組xiap表達水平與初治組的表達無明

4、顯差異，提示xiap參與急性白血病病情的發(fā)展。本實驗結(jié)果與carter等8的研究結(jié)果相似。xiap在al中的異常高表達有利于細(xì)胞逃逸生長監(jiān)控，從而促進細(xì)胞的異常增殖和惡性轉(zhuǎn)化，促進al的發(fā)生與發(fā)展。本實驗結(jié)果提示xiap的異常高表達與腫瘤尤其是白血病的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。    本實驗結(jié)果顯示，初治al患者骨髓中xiap蛋白表達水平在aml組和all組，不同年齡組，不同wbc組比較，差異均無顯著性。提示xiap蛋白的表達可能與al的臨床分型、年齡及外周血白細(xì)胞數(shù)無關(guān)。這個結(jié)果與文獻報道結(jié)果基本一致。    本研究發(fā)現(xiàn)，在初治al患者骨

5、髓中，xiap高表達患者完全緩解率明顯低于xiap低表達（xiaplow）患者完全緩解率。關(guān)于xiap高表達造成 cr率低的原因，認(rèn)為可能是xiap高表達后造成白血病細(xì)胞對化療藥物的敏感性下降所致。抗腫瘤藥物殺傷癌細(xì)胞多數(shù)是通過凋亡路徑來實現(xiàn)的，腫瘤對抗癌藥物的耐藥是由于凋亡信號的缺失。目前已知多種凋亡抑制因子可以降低腫瘤細(xì)胞對化療的敏感性，如bcl-2和xiap高表達的腫瘤細(xì)胞對抗癌藥物耐藥。由此推測，xiap的高表達是造成白血病細(xì)胞耐藥的又一重要因素。    因此，可以通過對 xiap表達的監(jiān)測來判斷急性白血病的病情變化，它們表達水平的增高是 al患者復(fù)發(fā)和預(yù)

6、后不良的高危因素。但由于樣本少，其臨床價值需進一步探測研究。    1  資料與方法    1.1  病例選擇  研究對象包括al患者78例，其中，初治al患者28例，男15例，女13例，年齡1867歲，中位年齡39歲；完全緩解（complete remission，cr）患者32例，男18例，女15例，年齡2267歲，中位年齡42歲；復(fù)發(fā)患者18例，男10例，女8例，年齡1864歲，中位年齡37歲。25例正常人作為對照組，男15例，女10例，年齡1865歲，中位年齡43歲。所有病例均源于社會醫(yī)院血液內(nèi)科

7、，2004年10月-2007年12月期間住院和門診隨訪的患者。經(jīng)臨床及實驗室檢查（骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)，部分病例進行免疫學(xué)與細(xì)胞遺傳學(xué)分型）確診。初治的患者化療1個療程后復(fù)查骨髓象判斷是否完全緩解（cr），cr的判斷標(biāo)準(zhǔn)參照張之南主編的血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)。    1.2  實驗材料  采用鏈霉抗生物素蛋白-過氧化物酶（sp）法，羊抗人xiap多克隆抗體試劑（一抗）購自rd公司，兔抗羊試劑盒（二抗）購自北京中杉生物技術(shù)有限公司；一抗工作濃度xiap（1:100）。實驗步驟按試劑盒說明書進行。    1.3  結(jié)

8、果判定及記錄方法  xiap免疫組化陽性反應(yīng)物均為棕黃色顆粒，均以細(xì)胞漿內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性，不出現(xiàn)者為陰性。高倍鏡下（×400）隨機選取5個非重疊視野，各計算100個有核細(xì)胞中陽性細(xì)胞所占的比例，取平均值。用磷酸鹽緩沖液（pbs）代替一抗作陰性對照，用正常人作陽性對照。    xiap免疫組化染色評分判定3：    （1）依據(jù)細(xì)胞著色強度計分：0分，細(xì)胞無顯色;1分，淺黃色;2分，棕黃色;3分，棕褐色。    （2）依據(jù)陽性細(xì)胞所占百分比計分：0分，陰性;1分，陽性細(xì)胞占比例<

9、;25%;2分，陽性細(xì)胞占比例25%50%;3分，陽性細(xì)胞占比例51%75%;4分，陽性細(xì)胞占比例>75%。    （3）依據(jù)著色強度與陽性細(xì)胞所占百分比乘積計分：xiap 陰性，1分；低表達，14分；高表達，>4分。    1.4  統(tǒng)計學(xué)處理  應(yīng)用統(tǒng)計學(xué)軟件spss 115進行結(jié)果分析。分別采用方差分析、最小顯著性差（lsd）t檢驗、秩和檢驗、2檢驗、fishers精確概率方法進行統(tǒng)計。檢驗水準(zhǔn)=0.05，非參數(shù)秩和檢驗中兩兩比較時校正水準(zhǔn)為=0.008。采用參數(shù)檢驗時p<0.01表明差異具

10、有顯著性。    2  結(jié)果     所有檢測標(biāo)本均表達xiap。xiap在初治al患者骨髓中表達水平高于緩解組（p<0.05）和對照組（p<0.05），差異均有顯著性；復(fù)發(fā)組表達水平高于初治組，差異無顯著性（p>0.05）；緩解組表達水平高于對照組，差異無顯著性（p>0.05）。見表1。 表1  al患者和對照組xiap表達水平注：與 、比較，p均<0.05；和比較，p>0.05；與比較，p>0.05    xiap在初治al患者骨髓中陽性表

11、達強度高于緩解期組（p<0.008）和對照組（p<0.008），差異均有顯著性；復(fù)發(fā)組陽性表達強度高于初治組，差異無顯著性（p>0.05）；復(fù)發(fā)組表達強度高于緩解期組（p<0.008）和對照組（p<0.008），差異均有顯著性。見表2。表2  xiap 在al患者和對照組表達強度 注：行×列2檢驗: 與比較，2=17.398,p<0.008; 與 比較, 2=26.842,p<0.008;與 比較, 2=2.489,p>0.05; 與比較2=22.527, p<0.008    在初治al患

12、者骨髓中，xiap高表達（xiaphigh）患者完全緩解率低于xiap低表達（xiaplow），差異有顯著性（p<0.05）。見表3。表3  xiap的表達與緩解率的關(guān)系   凋亡調(diào)節(jié)蛋白的表達與白血病發(fā)病及化療效果的研究近年來很受重視。凋亡受抑是白血病發(fā)病的主要機制。凋亡抑制蛋白家族 （inhibitor of apoptosis proteins，iaps）是新近發(fā)現(xiàn)的主要起抗凋亡作用的家族，iaps家族目前共發(fā)現(xiàn)xiap、c-iap1、c-iap2、niap、apollon、livin、survivin等8個成員。caspase蛋白酶家族（即含半胱氨酸

13、的天冬氨酸特異性蛋白酶）是細(xì)胞凋亡的中心環(huán)節(jié)。x-連鎖凋亡抑制蛋白（x -linked inhibitor-of-apoptosis protein，xiap）是iap家族中最有效的caspase抑制劑1，它可以直接抑制caspase并可多途徑調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡。xiap抑制caspase活性至少受 xaf1、smac（second mitochondria derived activator of caspase）和 htra2 （high temperature requirement protein a2）3個內(nèi)源性抑制蛋白負(fù)調(diào)控2。目前，在白血病的發(fā)病機制、化療抵抗及預(yù)后中，xiap與凋亡的關(guān)系尚不完全明了。筆者采用免疫組化方法檢測抗凋亡蛋白xiap在78例al患者的表達，并探討其與臨床的關(guān)系。2 carter bz, milella m, tsao t, et