納米銀膠標記的DNA電化學(xué)傳感器制備及應(yīng)用 醫(yī)學(xué)論文

1、    納米銀膠標記的DNA電化學(xué)傳感器制備及應(yīng)用 醫(yī)學(xué)論文               【摘要】  目的: 研究 一種新型的納米銀膠標記DNA電化學(xué)傳感器的制備及 應(yīng)用 。 方法 :通過將納米銀膠標記于人工合成的5'端-巰基修飾的寡聚核苷酸片段上，制成銀膠DNA電化學(xué)探針。利用陽極溶出伏安法檢測標記于DNA末端的Ag+，實現(xiàn)對特定序列DNA的測定。結(jié)果:經(jīng)過實驗條件的優(yōu)化，測定DNA濃度在1.0×10-96

2、.0×10-7 mol/L范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，檢測限為5.0×10-10 mol/L。結(jié)論:該DNA電化學(xué)傳感器響應(yīng)快速、靈敏度高、穩(wěn)定性好，適合于生物 分析 。 本文由中國論文范文收集整理。【關(guān)鍵詞】  納米銀膠；電化學(xué)DNA傳感器；雜交檢測；陽極溶出法    生物樣品中特定DNA序列的測定在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域具有重要意義，其結(jié)果可用于對遺傳性和傳染性疾病進行鑒別和檢測。在眾多的雜交檢測方法中，放射性同位素標記法存在著放射性污染等弊端，而非放射性標記法如熒光、化學(xué)發(fā)光和生物素標記方法的檢測儀器昂貴，難以實現(xiàn)自動化， 且標記過程繁瑣復(fù)雜

3、。DNA電化學(xué)傳感器因具有簡便快速、不破壞測試樣品、不受溶液顏色 影響 等優(yōu)點，已逐漸成為分子生物學(xué)研究中直接進行DNA序列檢測的方法之一。銀膠是一種納米材料，銀膠粒子粒徑小，比表面積大，表面反應(yīng)活性高，從而具有良好的催化活性。本研究將納米銀膠標記于人工合成的5'端-巰基修飾的寡聚核苷酸片段上，制成了高靈敏度、高選擇性DNA電化學(xué)傳感器，實現(xiàn)了對特定序列DNA的檢測。    1  材料和方法    1.1  儀器和試劑  CHI650B電化學(xué)分析儀（上海辰華儀器有限公司生產(chǎn)），原子力顯微鏡（Nan

4、oscope a，Digitao Instruments,Inc. Santa Barbara. CA），紫外-可見分光光度計（Varian，美國）。    人工合成的24個堿基的寡聚核苷酸片段(上海生工生物工程公司提供)：    探針序列：5'-HS-(CH2)6-GAGCGGCGCAACATTTCAGGTCGA-3'     (SH-ssDNA)    互補靶序列：5'-TCGACCTGAAATGTTGCGCCGCTC-3'

5、60; (ssDNA)    非互補序列：5'-GAGCGGCGCAACATTTCAGGTCGA-3'  (ncDNA)    硝酸銀、吡咯溶液（分析純，上?；瘜W(xué)試劑公司生產(chǎn)），硼氫化鈉（分析純，F(xiàn)luka公司生產(chǎn)），0.1 mol/L NaCl和10 mmol/L磷酸鹽的混合液（pH=7.0）為緩沖溶液。制備銀溶膠用去離子水（Millipore 18 M），其余用水均采用二次蒸餾水。    1.2  納米銀膠的制備  制備銀溶膠所用的玻璃器皿均經(jīng)鉻酸洗液浸洗

6、，最后用去離子水（Millipore 18 M）蕩洗幾次。銀溶膠的制備方法參見 文獻 ，即將30 ml 1.5×10-3 mol/L NaBH4溶液置于冰浴中，在劇烈攪拌下，分批滴加入10 ml 1.0×103 mol/L AgNO3溶液，繼續(xù)攪拌1/2 h，制得的溶膠呈黃色透明狀，在4 下可穩(wěn)定保存約1個月。用原子力顯微鏡對銀溶膠粒子的形狀和大小進行了表征，結(jié)果顯示銀溶膠粒子呈球狀，均勻地分布在溶膠中，其納米銀粒子的尺寸在815 nm之間。    1.3  納米銀膠標記DNA探針的制備  將探針序列SH-ssDNA溶解在新

7、制備的銀膠溶液中，SH-ssDNA的濃度為1.0×10-5 mo1/L，室溫下靜置20 h，使SH-ssDNA與納米銀膠顆粒充分發(fā)生自組作用。然后將該溶液在15 000 r/min下高速離心30 min，除去上層清液，用磷酸鹽緩沖溶液洗滌沉淀，再離心分離，以除去未反應(yīng)的過量寡聚核苷酸，所得的探針用磷酸鹽緩沖溶液稀釋成一定的濃度，于05 保存，備用。    1.4  待測DNA在玻碳電極上的固定  參照文獻，將玻碳電極用0.05 mm Al2O3粉末在麂皮上打磨至光亮，并依次在丙酮、1:1 NaOH溶液、1:1硝酸溶液以及二次蒸餾水中超

8、聲清洗。采用三電極體系，把電極插入含有0.1 mo1/L KCl和0.05 mo1/L吡咯溶液中，以50 mV/s 的速度在0+0.7 V的電位范圍內(nèi)循環(huán)伏安掃描15圈后，在電極表面形成一層均勻的薄膜，吡咯被電化學(xué)聚合到電極表面。取出電極，把它浸入到待測DNA溶液中，在+0.5 V恒電位下吸附200 s，通過靜電作用，DNA被固定在聚吡咯修飾的玻碳電極表面。電極用KCl溶液沖洗后以除去多余的未固定的DNA。    1.5  雜交反應(yīng)  將固定了不同單鏈DNA片段的玻碳電極同時浸入到依據(jù)上述1.4制得的納米銀膠標記DNA探針溶液中進行雜交反應(yīng)，4

9、0 下均勻攪拌1 h。取出后，清洗除去表面吸附的未雜交的納米銀膠標記探針。    1.6  銀的氧化溶解及測定  將雜交后結(jié)合了納米銀膠的玻碳電極浸入50%的HNO3溶液中，振蕩使銀氧化溶解，等黃色的納米銀膠逐漸變成無色的溶液時，表明膠體中的Ag原子已經(jīng)被HNO3氧化成Ag+。取出電極后加入0.01mol/L HNO3-KNO3溶液作為支持電解質(zhì)底液，以鉑絲為對電極，氯化銀電極為參比電極（用雙鹽橋?qū)⑵渑c底液隔離，避免不斷釋放的C1-與銀形成AgCl沉淀干擾測定），玻碳電極為工作電極，采用陽極溶出伏安法（ASV）對Ag+進行電化學(xué)檢測。 關(guān)鍵詞:應(yīng)用,傳感器,化學(xué),標記,納米,醫(yī)學(xué)論文,納米銀膠標記的DNA電化學(xué)傳感器制備及應(yīng)用 內(nèi)容摘要:【摘要】 目的: 研究 一種新型