熒光分析法測定黃花參肝舒茶中大黃素的含量(一)

1、熒光分析法測定黃花參肝舒茶中大黃素的含量(一)    作者：楊立芳， 楊東愛， 馬少妹 ，尹顯洪【關(guān)鍵詞】 黃花參肝舒茶；,熒光分析法,；,大黃素摘要：目的熒光分析法在黃花參肝舒茶中測定大黃素含量方法探討。方法采用熒光分析法,吸附劑為硅膠G，展開劑為石油醚醋酸乙酯甲酸（1550.5），激發(fā)光波長214 nm，熒光光譜波長569 nm進行測定。結(jié)果大黃素線性回歸方程為：Y=1.532 3X + 552 .14 ，r=0.998 6；平均回收率為98.88%，RSD值為2.16%（n=5）。結(jié)論 該方法靈敏度高、操作簡便、重現(xiàn)性好、結(jié)果準確，可用于黃花參肝舒

2、茶制劑的質(zhì)量控制。 關(guān)鍵詞：黃花參肝舒茶； 熒光分析法 ； 大黃素 Determination of Emodin in Content Huanghuashen Ganshu Tea by Spectrofluorimetry Key words：Huanghuashen Ganshu tea ； Spectrofluorimetry ； Emodin 黃花參肝舒茶是廣西壯醫(yī)醫(yī)院根據(jù)壯族民間治療肝炎有效驗方研制而成的袋泡茶劑。由黃花參、黃芪、虎杖、白術(shù)等多種中草藥組成，具有清熱毒、除濕、疏肝健脾、通龍路利水道作用。臨床上用于治療濕熱邪毒所致急慢性肝炎及乙肝病毒攜帶者?；⒄葹樘幏街械某妓?，含有

3、蒽醌類及二苯乙烯類物質(zhì)，其中主含大黃素（Emodin）、大黃素甲醚(Emodinmonomethyl ether)和大黃酚(Chrysophanic acid, Chrysophanol)1等。本文采用熒光分析法測定復方中虎杖的大黃素含量，克服了用薄層掃描測定含量誤差大、用HPLC法直接進樣對色譜柱污染大等缺點，排除了復雜組分間的干擾，取得了準確性可靠的結(jié)果，為建立黃花參肝舒茶質(zhì)量控制提供依據(jù)。1 儀器與試藥 PerkinElmer熒光分光光度計（美國）；三用紫外光燈（江陰市申港電光儀器廠）；KQ100DB數(shù)控超聲波提取器（昆山市超聲儀器有限公司）；800型離心機（上海手術(shù)器械廠）；硅膠G（青

4、島海洋化工廠生產(chǎn)）；大黃素（中國藥品生物制品檢定所提供，批號：7568902）；黃花參肝舒茶（廣西壯醫(yī)醫(yī)院藥劑科提供）；所用試劑均為分析純。2 方法與結(jié)果2.1 薄層色譜條件吸附劑為硅膠G薄層板（2.5 cm×7.5 cm，厚0.5 mm）；展開劑為石油醚醋酸乙酯甲酸（1550.5）。2.2 對照品溶液的制備 精密稱取大黃素對照品適量，置容量瓶中，加無水乙醇溶液使溶解制成 0.301 2 mg/ml的溶液，作為對照品溶液。2.3 供試品溶液的制備 取本品約6袋，研細，精密稱取20 g，置150 ml燒瓶中，加甲醇50 ml，稱定重量，加熱回流30 min，放冷至室溫，稱定重量，加甲醇

5、補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液25 ml，置水浴上蒸干。殘渣加水20 ml，加鹽酸2 ml，氯仿20 ml，置100 ml燒瓶中，加熱回流30 min，放冷，置分液漏斗中，分取氯仿層；酸水層再用氯仿萃取兩次（20，20 ml），收集氯仿液，合并，回收至干，殘渣加無水乙醇使溶解，置50 ml容量瓶中，加無水乙醇定容至刻度，搖勻，作為供試品溶液。2.4 測定方法分別精密吸取上述兩種溶液各10l，分別點于同一硅膠G薄層板上，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365 nm)下檢視，畫出與對照品色譜相應位置上顯相同顏色的熒光斑點，定量刮取置具塞試管中，用無水乙醇超聲提取二次（2，1.5 ml）,

6、30 min/次，合并上清液，置離心機中，以2 500 r/min離心約10 min，傾取上清液置5 ml量瓶中，用無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，照熒光分析法（2000年版中國藥典部附錄），在激發(fā)光波長214 nm；熒光光譜波長569 nm處室溫(25±1)測定熒光，讀數(shù)，計算，即得。 2.5 線性關(guān)系分別精密吸取上述對照品溶液2.0，4.0，6.0，8.0，10.0 l。按照含量測定方法中薄層色譜法點樣、展開、刮板、提取和熒光分析法測定含量，以濃度為橫坐標，熒光強度（Y）為縱坐標進行線性回歸，得回歸方程：Y=1.532 3 X + 552 .14 ，r=0.998 6（n=5）。 結(jié)果

7、表明，大黃素在0.060 20.301 2 g/ml 范圍內(nèi)其熒光強度與濃度呈良好線性關(guān)系。2.6 重復性實驗取供試品溶液(批號：040720)分別于0，2，5，10 d進樣1次, 依上法測定，測定結(jié)果表明大黃素含量無明顯變化，RSD分別為0.98%，0.75%，1.04%，0.55%。見表1。表1 重復性考察實驗放置（略）2.8 加樣回收率實驗精密稱取同批樣品5份（批號：040720 已知大黃素含量0.223 mg/g），每份5.0 g，每份加入大黃素對照品4 ml（大黃素0.301 2 mg/ml），按2.3項下方法操作，得供試品溶液。精密吸取10 l點于硅膠G薄層板上，按2.4項下方法操

8、作，分別進行熒光測定。 計算回收率，實驗結(jié)果見表2。表2 大黃素加樣回收率實驗結(jié)果樣品中大黃素含量（略）2.9 樣品含量測定在上述色譜條件下測定5批樣品的大黃素含量，分別取供試品溶液進行熒光測定，結(jié)果見表 3 。表3 5批樣品含量測定結(jié)果（略）3 討論3.1 虎杖中的主要化學成分為蒽醌類和二苯乙烯類物質(zhì)，使虎杖具有清熱祛濕、活血通絡(luò)的功效。其中蒽醌類化合物具有保肝利膽、抗病毒的作用4，為主要藥效成分之一，在黃花參肝舒茶中具有加強君藥黃花參清利肝膽濕熱的功效。為此選擇大黃素作為指標，對其進行含量測定。3.2 據(jù)文獻資料，大黃素含測方法有高效液相色譜法2,3、薄層掃描法5及分光光度法6。本文采用熒

9、光分析法測定，操作簡便、準確度、精密度高、重現(xiàn)性好。實驗結(jié)果，虎杖中大黃素回收率為 98.88% ；RSD為2.16 %，可作為該制劑含量測定，以控制其質(zhì)量。3.3 實驗通過對大黃素的激發(fā)光譜掃描其在214 nm處熒光強度最強，熒光光譜掃描其在569 nm處熒光強度最強，因此本文確定采用在激發(fā)光譜為214 nm，熒光光譜為569 nm處測定黃花參肝舒茶中大黃素的含量。見圖12。參考文獻：1江蘇新醫(yī)學院，中藥大辭典，上冊M.上海：上海人民出版社，1986：1329.2唐小波，吳健兒，趙緒元. 高效液相色譜法測定虎杖中大黃素的含量J.基層中藥雜志，2000，14(4)： 17.3趙建平. 五靈健肝片中大黃素的含量測定J. 中成藥，200