非法酵菌鑒定

1、非法酵革蘭陰性桿菌特征非法酵革蘭陰性桿菌特征及鑒定思路及鑒定思路內(nèi)容內(nèi)容 非發(fā)酵細(xì)菌分類(lèi) 主要非發(fā)酵細(xì)菌特征 非發(fā)酵細(xì)菌耐藥特征 臨床最常分離非發(fā)酵細(xì)菌鑒定非法酵革蘭陰性桿菌感染特點(diǎn) 引起臨床各科室引起臨床各科室 人體各部位感染人體各部位感染 鑒定比腸桿菌科復(fù)雜鑒定比腸桿菌科復(fù)雜 耐藥譜廣耐藥譜廣 臨床治療困難臨床治療困難l不發(fā)酵葡萄糖有氧方式代謝不發(fā)酵葡萄糖有氧方式代謝 u 非發(fā)酵菌的分類(lèi)和命名非發(fā)酵菌的分類(lèi)和命名l與腸桿菌科不同，非發(fā)酵菌不能簡(jiǎn)單地歸與腸桿菌科不同，非發(fā)酵菌不能簡(jiǎn)單地歸于具有明顯特征的某一菌科，且很多非發(fā)酵于具有明顯特征的某一菌科，且很多非發(fā)酵菌的正確分類(lèi)問(wèn)題仍未解決菌的正

2、確分類(lèi)問(wèn)題仍未解決l 主要的非發(fā)酵菌分為主要的非發(fā)酵菌分為6個(gè)科個(gè)科 1 分類(lèi)不明分類(lèi)不明非發(fā)酵細(xì)菌原分類(lèi): 假單孢菌科 奈瑟菌科 未分科非發(fā)酵細(xì)菌現(xiàn)代分類(lèi) 假單孢菌科 產(chǎn)堿桿菌科 甲基球菌科 根瘤菌科 黃桿菌科 莫拉菌科 未定臨床常見(jiàn)非發(fā)酵菌的分類(lèi)臨床常見(jiàn)非發(fā)酵菌的分類(lèi) 與鑒定方法相關(guān)的分組與鑒定方法相關(guān)的分組第一組第一組 有動(dòng)力有動(dòng)力,極鞭毛極鞭毛: 假單胞菌科假單胞菌科 rRNA群群IV rRNA-I: 假單孢菌屬 類(lèi)鼻疽類(lèi)鼻疽 ; 蔥頭蔥頭; 唐菖蒲唐菖蒲; 皮氏皮氏; 叢毛單胞菌屬叢毛單胞菌屬 食酸菌屬食酸菌屬嗜麥芽寡氧單胞菌嗜麥芽寡氧單胞菌木糖氧化產(chǎn)堿桿菌木糖氧化產(chǎn)堿桿菌木糖氧化亞

3、種木糖氧化亞種脫硝亞種脫硝亞種糞產(chǎn)堿桿菌糞產(chǎn)堿桿菌皮氏產(chǎn)堿桿菌皮氏產(chǎn)堿桿菌華麗桿菌屬華麗桿菌屬其余基因種未命名其余基因種未命名 氧化酶陰性氧化酶陰性 觸酶反應(yīng)不定觸酶反應(yīng)不定 吲哚吲哚 H2S 甲基紅甲基紅 VP反應(yīng)均陰性反應(yīng)均陰性 不產(chǎn)生賴、鳥(niǎo)氨酸脫羧酶和精氨酸雙水解不產(chǎn)生賴、鳥(niǎo)氨酸脫羧酶和精氨酸雙水解酶酶 有的種能產(chǎn)生苯丙氨酸脫氨酶有的種能產(chǎn)生苯丙氨酸脫氨酶 所有種不能還原硝酸鹽所有種不能還原硝酸鹽 大多數(shù)能利用枸櫞酸鹽大多數(shù)能利用枸櫞酸鹽 無(wú)動(dòng)力，硝酸鹽還原陰性無(wú)動(dòng)力，硝酸鹽還原陰性u(píng) 非銅綠非銅綠 鮑曼不動(dòng)鮑曼不動(dòng) 嗜麥芽嗜麥芽非法酵革蘭陰性桿菌的共同特點(diǎn) 在中國(guó)蘭或麥康開(kāi)選擇培養(yǎng)基上

4、呈不發(fā)酵乳糖的菌落(中國(guó)蘭上粉紅色) 氧化酶大多陽(yáng)性 有鞭毛或無(wú)鞭毛 革蘭陰性桿菌或球桿菌 不能發(fā)酵糖 色素鑒定非發(fā)酵革蘭陰性桿菌的基本步驟 初始菌落識(shí)別初始菌落識(shí)別: 在中國(guó)蘭或麥康開(kāi)培養(yǎng)基上呈不分解乳糖的菌落在中國(guó)蘭或麥康開(kāi)培養(yǎng)基上呈不分解乳糖的菌落 氧化酶氧化酶 革蘭染色革蘭染色 色素色素 確認(rèn)非發(fā)酵細(xì)菌確認(rèn)非發(fā)酵細(xì)菌 O/F 鞭毛染色鞭毛染色 選擇鑒定系統(tǒng)選擇鑒定系統(tǒng) API 20NE ATB VIEK2Compact等等臨床常見(jiàn)非發(fā)酵革蘭陰性細(xì)菌的耐藥特征 銅綠假單孢菌 不動(dòng)桿菌 嗜麥芽窄食單孢菌 綠膿桿菌耐藥機(jī)制 膜蛋白缺失使通透性下降 高產(chǎn)ampC酶; 產(chǎn)ESBL; 產(chǎn)金屬酶 泵

5、出機(jī)制銅綠假單孢菌 銅綠假單胞菌的細(xì)胞外膜上沒(méi)有大多數(shù)革銅綠假單胞菌的細(xì)胞外膜上沒(méi)有大多數(shù)革蘭陰性細(xì)菌所具有的典型的高滲透性孔蛋蘭陰性細(xì)菌所具有的典型的高滲透性孔蛋白，它的孔蛋白通道對(duì)小分子物質(zhì)的滲透白，它的孔蛋白通道對(duì)小分子物質(zhì)的滲透速度僅為典型孔蛋白通道的速度僅為典型孔蛋白通道的1%。 產(chǎn)KPC酶國(guó)內(nèi)： 已在腸桿菌科的多個(gè)菌屬中有報(bào)道。 肺炎克雷伯菌、陰溝腸桿菌、大腸埃希菌、產(chǎn)酸克雷伯菌、沙門(mén)菌屬、弗勞地檸檬酸桿菌和銅綠假單胞菌等。銅綠假單胞菌等。 該類(lèi)酶除陰溝腸桿菌可有染色體介導(dǎo)外，其他各類(lèi)細(xì)菌均可為質(zhì)粒介導(dǎo)，已成為臨床治療難題如何檢測(cè)? 產(chǎn)KPC酶的菌株用常規(guī)藥敏試驗(yàn)不容易檢出。 CL

6、SI關(guān)于碳青霉烯類(lèi)的判斷標(biāo)準(zhǔn)： 厄他培南2g/ml 亞胺培南、美羅培南4g/ml 因此，MIC2g/ml 或4g/ml的菌株仍可判斷為敏感的 警惕：在常規(guī)藥敏中如遇第三、第四代頭孢菌素以及其他的-內(nèi)酰胺類(lèi)耐藥的菌株均應(yīng)該進(jìn)行稀釋法測(cè)定碳青霉烯類(lèi)的對(duì)這些菌株的MIC。檢測(cè)KPC酶的最佳底物 厄他培南是檢測(cè)KPC酶的最佳底物。 建議1：可將該藥列為常規(guī)藥敏試驗(yàn)的品種 建議2：對(duì)所有具有ESBLs/AmpC酶樣表型（即對(duì)第三、第四代頭孢菌素耐藥）的腸桿菌科細(xì)菌采用紙片法或MIC法（E-試驗(yàn)）進(jìn)行厄他培南進(jìn)行厄他培南（和其他碳青霉烯類(lèi)）的測(cè)定。（和其他碳青霉烯類(lèi)）的測(cè)定。 如如MIC為為2或或4g/m

7、l應(yīng)視作有產(chǎn)應(yīng)視作有產(chǎn)KPC酶和其他碳酶和其他碳青酶霉烯酶的可能。青酶霉烯酶的可能。 這時(shí)應(yīng)與臨床醫(yī)師聯(lián)系，并將該菌株送往參考試驗(yàn)室作進(jìn)一步的研究。改良的Hodge 試驗(yàn) 0.5麥?zhǔn)蠞岫葐挝淮竽c埃希菌 ATCC25922涂布MH平板 中間貼亞胺培南（10g）紙片 接種待檢菌的無(wú)菌接種環(huán)自 紙片外緣向平板邊緣劃線 35過(guò)夜培養(yǎng) 結(jié)果判斷：亞胺培南抑菌圈內(nèi)出現(xiàn) 待檢菌矢狀生長(zhǎng)者為產(chǎn)碳青霉烯酶 菌株 PCR 擴(kuò)增試驗(yàn)、DNA測(cè)序證實(shí)為某種KPC酶E coli ATCC25922KPC+？KPC -KPC+？不動(dòng)桿菌的耐藥機(jī)制 對(duì)多種窄譜內(nèi)酰胺酶耐藥由于TEM1和CARB型內(nèi)酰胺酶 對(duì)新型三代頭孢菌素

8、耐藥是因?yàn)楫a(chǎn)大量染色體頭孢菌素酶和超廣譜的TEM酶 不動(dòng)桿中最主要的碳青霉烯酶是不動(dòng)桿中最主要的碳青霉烯酶是D D類(lèi)酶類(lèi)酶 OXA-23OXA-23、2424、2525、2626、2727、4040、4949、5151、 5454、5555、5858、6060 該酶能水解亞胺培南、青霉素，但不水解三代該酶能水解亞胺培南、青霉素，但不水解三代頭孢菌素頭孢菌素. .不動(dòng)桿菌主要耐藥機(jī)制不動(dòng)桿菌主要耐藥機(jī)制 不動(dòng)桿菌中還不動(dòng)桿菌中還產(chǎn)產(chǎn)IMPIMP或或VIMVIM型金屬酶，型金屬酶，該該酶水解底物范圍廣，包括碳青霉烯類(lèi)、酶水解底物范圍廣，包括碳青霉烯類(lèi)、青霉素類(lèi)和頭孢菌素抗生素，不被克拉青霉素類(lèi)和頭

9、孢菌素抗生素，不被克拉維酸等酶抑制劑抑制，但能被維酸等酶抑制劑抑制，但能被EDTAEDTA、2-2-巰基丙酸巰基丙酸抑制抑制 嗜麥芽窄食單胞菌 常感染嚴(yán)重衰弱和免疫力低下病人 在醫(yī)院水龍頭、污水排水孔呼吸機(jī)濕化器均可分離到 可引起菌血癥、心內(nèi)膜炎、醫(yī)院獲得性肺炎、尿路感染、皮膚、軟組織 靜脈放置插管是引起菌血癥的主要原因，死亡率達(dá)4169嗜麥芽窄食單胞菌的耐藥機(jī)制 細(xì)胞壁對(duì)抗生素的親和力極差 膜蛋白對(duì)氨基糖甙滲透力低下 藥泵外排機(jī)制 產(chǎn)二種內(nèi)酰胺酶 L1 內(nèi)酰胺酶L2內(nèi)酰胺酶（金屬酶） （頭孢菌素酶） 細(xì)菌定植的定義 定植是個(gè)”相對(duì)”的概念 定植 感染宿主因素宿主因素細(xì)菌本身因素細(xì)菌本身因素下呼吸道感染中,非發(fā)酵菌是臨床棘手的問(wèn)題 下呼吸道中,非發(fā)酵菌易定植 內(nèi)源性:細(xì)菌抵抗力強(qiáng)- 醫(yī)源性 抗生素選擇壓