微生物實驗報告微生物形態(tài)觀察分布滅菌消毒

1、微生物實驗微生物實驗細菌形態(tài)觀察細菌分布消毒滅菌細菌形態(tài)觀察一、實驗目的1. 掌握光學顯微鏡油鏡的使用及日常維護2. 掌握細菌的三種形態(tài)3. 掌握臨床常見細菌的形態(tài)及染色4. 掌握細困的特殊結(jié)構(gòu)5. 了解支原體、衣原體、立克次氏體、螺旋體及真菌的結(jié)構(gòu)特點 二、實驗原理1. 普通光學顯微鏡油鏡的使用1. 在標本欲檢部位滴一滴香柏油，然后轉(zhuǎn)換油鏡頭2. 從側(cè)面觀察并慢慢轉(zhuǎn)動粗調(diào)節(jié)器，使油鏡頭浸沒在油滴內(nèi)，當油鏡頭幾乎接 觸玻片時停止轉(zhuǎn)動，以免碰撞玻片，用雙眼觀察目鏡，同時調(diào)節(jié)細調(diào)節(jié)器， 直至細菌清晰3. 根據(jù)需要調(diào)節(jié)顯微鏡亮度2. 普通光學顯微鏡的維護1. 移動顯微鏡時，用右手持鏡壁，左手托鏡座，

2、平端于胸前2. 油鏡用畢后， 要立即用擦鏡紙擦去香柏油；再用滴有二甲苯的擦鏡紙擦油鏡 頭；最后，用干凈擦鏡紙將鏡頭上的二甲苯擦去，以免損傷油鏡頭3. 鏡頭擦凈后，降低接物鏡并將其轉(zhuǎn)成八字形，罩好鏡罩放入柜內(nèi)4. 做好使用記錄3 微生物知識1 細菌按形態(tài)分類：球菌：球形包括雙球菌、四聯(lián)球菌、八疊球菌、葡萄球菌、鏈球菌等桿菌：桿狀包括單桿菌、雙桿菌、鏈桿菌、分枝桿菌、雙歧桿菌等螺旋菌：螺旋狀包括螺旋菌、弧菌等2 細菌的根本結(jié)構(gòu)細胞壁、細胞膜、細胞質(zhì)、核質(zhì)、核蛋白體3 細菌的特殊結(jié)構(gòu)莢膜：如肺炎雙球菌鞭毛：又分單毛菌、雙毛菌、叢毛菌、周毛菌。如：變形桿菌為周毛菌菌毛芽胞：如破傷風梭菌、炭疽芽胞桿菌、

3、肉毒梭菌4 微生物是一切肉眼看不見或看不清的微小生物的總稱，包括原核類、 真核類和非細胞類。原核類：細菌、放線菌、藍藻、衣原體、支原體、立克次氏體真核類：真菌、原生動物、顯微藻類非細胞類：病毒、亞病毒5 真菌單細胞：圓形、芽生孢子。如：酵母菌多細胞：菌絲及孢子、孢子出芽。如：霉菌6 白假私酵母菌白念生物學性狀：G+單細胞真菌、芽生孢子、類酵母型菌落厚膜孢子、假菌絲有助于鑒定致病性：皮膚粘膜一一鵝口瘡、內(nèi)臟感染、CNS感染微生物學檢查：直接涂片、染色后鏡檢菌體、芽生孢子、假菌絲7 新型隱球菌生物學性狀 ：圓形酵母型菌、外周有厚莢膜比菌體大 1-3 倍致病性：吸入后侵犯皮膚、粘膜等一一慢性炎癥和膿

4、腫； 侵襲CN 亞急性或慢性腦膜炎微生物學檢查：腦脊液離心后取沉淀、痰和膿標本直接檢查；墨汁負染見出芽菌體外圍有寬厚莢膜為陽性三、實驗材料記號筆： 1支；大鑷子： 1 支；火柴： 1 盒；蠟筆： 1支；試管架： 1 個；酒精燈：1 個；接種環(huán)： 1 支； Olympus 顯微鏡： 1 臺；顯微鏡使用記錄本： 1 個四、實驗內(nèi)容1. 觀察細菌三種形態(tài)1球菌鏈球菌、葡萄球菌、肺炎雙球菌子彈形 、腦膜炎雙球菌蠶豆形 、四聯(lián)菌2桿菌破傷風桿菌、白喉桿菌異染顆粒 、綠膿桿菌、傷寒桿菌、變形桿菌3螺形菌弧菌霍亂弧菌；螺菌；螺桿菌幽門螺桿菌；彎曲菌2. 觀察細菌的特殊結(jié)構(gòu)芽胞、鞭毛、莢膜、異染顆粒、鉤端螺旋

5、體、幽門螺桿菌 3. 繪圖葡 萄球菌(staphyloccocus) ; 肺炎 雙球菌(pneumo coccus); 腦膜 炎球菌 (meningococcus) ；破傷風桿菌( Clostridium Tantenus )；霍亂弧菌( vibrio cholera) ； 芽 胞 (spore) ； 鞭 毛 ( flagellum) ； 莢 膜 (capsule) ； 鉤 端 螺 旋 體 (leptospira)五、實驗結(jié)果 繪 8 幅細菌鏡下列圖，已交。六、思考與討論 1 顯微鏡高倍鏡使用時看不清楚的常見原因1未滴加鏡油2鏡頭不干凈3標本放置反了，所以達不到對焦平面4制片問題：標本太厚、染

6、色誤差等細菌分布一、實驗目的1. 掌握固體培養(yǎng)基的制備2. 掌握機體常見部位及環(huán)境中的細菌采樣、培養(yǎng)、及初步鑒定3. 掌握革蘭氏染色方法及結(jié)果判定二、實驗原理1. 培養(yǎng)基：1 細菌生長所需營養(yǎng)物質(zhì)：水、碳源、氮源、無機物和生長因子2 培養(yǎng)基分類：1根據(jù)營養(yǎng)物質(zhì)：營養(yǎng)培 養(yǎng)基、 選擇培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基2根據(jù)物理性質(zhì)：液體培養(yǎng)基、固體培養(yǎng)基和半固體培養(yǎng)基3 細菌在培養(yǎng)基中的生長狀況：外表生長、均勻渾濁生長、沉淀生長2. 革蘭氏染色： 革蘭陽性細菌細胞壁的肽聚糖 peptidoglycan 層較厚，經(jīng)乙醇處理后使之發(fā)生脫水 作用而使孔徑縮小，通道彎曲，結(jié)晶紫與碘的復合物保存在細胞內(nèi)而不被脫色；而 革

7、蘭陰性細菌的肽聚糖層很薄，脂肪含量高，經(jīng)乙醇處理后孔徑仍可使結(jié)晶紫與碘 的復合物通過，因而將染料洗去而被脫色。三、實驗材料咽拭子、羊血培養(yǎng)皿： 1套/人；大號普通培養(yǎng)皿： 1塊/2 人；載玻片： 1片/人； A、B菌：6套/桌；NS: 1份/人；濾紙：1張/人；消毒液：4套/桌；三角瓶、電天平、營養(yǎng)瓊脂、稱藥紙、稱藥勺、量筒：1 套/ 桌四、實驗內(nèi)容1. 培養(yǎng)基制備1 按產(chǎn)品要求稱取營養(yǎng)瓊脂2每實驗桌制備 200ml3高壓蒸汽滅菌后，在潔凈工作臺內(nèi)倒平皿4所制備的普通平皿用于空氣培養(yǎng)2. 機體不同部位的細菌采樣、培養(yǎng) 1 咽部正常菌群的采樣、培養(yǎng)咽拭子擦拭咽部，平行劃線法接種于羊血平皿。2手指

8、消毒前后細菌的采樣培養(yǎng) 未消毒手指平行劃線法接種于普通平皿；同一手指碘酒、酒精消毒后平行劃線法接種于普通平皿。3. 環(huán)境中細菌采樣培養(yǎng)1空氣培養(yǎng)將培養(yǎng)皿翻開暴露于空氣中， 20 分鐘后蓋好平皿蓋兒2流通紙幣或硬幣的細菌采樣培養(yǎng)將硬幣正反面分別在培養(yǎng)基上充分接觸3采樣結(jié)束后，將培養(yǎng)皿底部朝上放入鐵絲筐，統(tǒng)一置培養(yǎng)箱：37 C 18-24小時4. A、B、C菌鑒定革蘭氏染色法1 . 細菌涂片制備程序： 1 取一干凈玻片，火焰上方緩緩通過三次去油2蠟筆畫線將玻片分割為 A B、C三區(qū)域 3接種環(huán)取生理鹽水分別滴入 A、 B 兩區(qū)域各一滴4分別取少許A、B、C菌，與生理鹽水充分混勻成菌液，風干后形成菌

9、膜5固定火焰上方緩緩通過三次 6革蘭氏染色 7濾紙吸干水分，油鏡觀察2. 革蘭氏染色： 1細菌涂片、火焰固定 2結(jié)晶紫初染 1min 3盧戈氏碘液媒染 1min 4 95%乙醇脫色 30-40s 5沙黃復染 1min五、實驗結(jié)果A: G+,球菌，推測為金黃色葡萄球菌;B： G-，短桿菌，推測為大腸桿菌；六、思考與討論1 影響革蘭氏染色的因素：1細菌本身因素：菌齡：如果菌齡太大，可能出現(xiàn)假陰性2操作因素涂片：取菌應適量，涂片要均勻，如果某個局部菌層太厚，可能在脫色時達不 到，會導致局部假陽性固定：固定溫度太高或時間太長都會導致細菌結(jié)構(gòu)破壞而出現(xiàn)假陰性； 但是固 定不夠，細菌會在水洗時被沖掉初染：

10、初染時間雖然說是 1 分鐘，但是可以適當延長， 時間太短會出現(xiàn)假陰性； 染色滴加不均勻可能出現(xiàn)半陰半陽媒染：和初染一樣脫色：脫色時間不能過長，根本上用酒精滴過之后馬上水沖就可以了，否那么容 易出現(xiàn)假陰性復染：復染時間需足夠長，否那么可能會染不上消毒滅菌一、實驗目的1. 了解實驗室常用消毒滅菌方法及其原理2. 掌握實驗中所用儀器的使用方法3. 掌握機體常見部位及環(huán)境中的細菌培養(yǎng)物的初步鑒定4. 強化革蘭氏染色技能二、實驗原理1 口咽部及皮膚正常菌群鼻咽部及扁桃體：葡萄球菌、類白喉桿菌、肺鏈、溶血及非溶血性鏈球菌、奈瑟菌等口腔：鏈球菌多見、放線菌、螺旋體、G-桿菌等皮膚：表皮葡萄球菌、丙酸桿菌、類

11、白喉桿菌、銅綠假單胞菌2溶血類型a溶血：現(xiàn)象：草綠色溶血環(huán)常見菌種：時機致病菌甲鏈、肺鏈 原理：細菌產(chǎn)生過氧化氫將血紅蛋白氧化成深綠色的高鐵血紅蛋白B溶血：現(xiàn)象：透明溶血環(huán)常見菌種：致病菌乙鏈 原理：細菌釋放溶血素使紅細胞破裂，血紅蛋白釋放三、實驗材料咽拭子培養(yǎng)物： 1 套/人；空氣、紙幣、手指消毒前后培養(yǎng)物：1 套/2 ；載玻片： 1 片/人； NS： 1 支/人；濾紙： 1張/人四、實驗內(nèi)容1. 常用消毒滅菌方法：示教講解1熱力滅菌：1干熱滅菌法：焚化、燒灼、干烤160 C , 2小時2濕熱滅菌法：煮沸 2%NaCQ, 105 C；高壓蒸汽滅菌103.4kPa , 20 分鐘，121 C，

12、臨床運用最廣的滅菌方法2. 紫外線 Ultraviolet radiation ：波長265nm-266nmDNA吸收光譜殺菌能力最強。紫外光穿透力差，一般只用 于不耐熱物品外表的消毒。3. 過濾 filtration用物理阻流的方法除去液體或空氣中的細菌，用于不耐熱物質(zhì)的滅菌血清、毒素、抗生素等濾菌器：薄膜濾菌器、玻璃濾菌器、石棉濾菌器、素陶瓷濾菌器4. 低溫保存菌種冷凍真空枯燥法 5常用的化學消毒劑類別作用機制常用種類酚類蛋白變性，細胞膜損傷洗必泰醇類去除脂類，蛋白變性乙醇鹵素蛋白變性氯氣、碘酊、碘伏重金屬鹽蛋白變性紅汞、硫柳汞、硝酸銀醛類蛋白變性福爾馬林、戊二醛外表活性劑蛋白變性，細胞膜

13、損傷新潔而火酸堿類破壞細胞膜、細胞壁，蛋白變 性十一烯酸染料干擾氧化、抑制繁殖龍膽紫6) .實驗室常用化學消毒劑:70-75%乙醇 潔凈臺消毒：來蘇水擦拭防腐劑：三氯甲烷、硫柳汞、疊氮鈉2 細菌分布結(jié)果鑒定1觀察菌落2取局部菌落的細菌進行革蘭氏染色并觀察五、實驗結(jié)果1. 咽部正常菌群的采樣、培養(yǎng)結(jié)果：在羊血培養(yǎng)皿上出現(xiàn)四種菌落：1數(shù)目多，劃線沿線都有；針尖大?。粺o色、光滑、濕潤、透明、圓形。周 圍出現(xiàn)草綠色溶血環(huán)，發(fā)生了不完全溶血即a溶血。2數(shù)目較多，劃線沿線都有；較??；乳白色、光滑、濕潤、半透明、圓形。3少，只出現(xiàn)在四個點；中型；乳黃色、光滑、半濕潤、不透明、形狀不規(guī) 貝嘰在此種菌落下方的培

14、養(yǎng)基出現(xiàn)了透明溶血環(huán)，發(fā)生了完全溶血即B溶 血。41 個菌落；較大；乳白色、光滑、濕潤、半透明、圓形。粘稠。取 1、2、 3進行革蘭氏染色，結(jié)果如下(1) G+鏈球菌，根據(jù)不完全溶血推斷，為甲型鏈球菌。(2) G-,球菌，細胞個體小，形狀像金黃色葡萄球菌，但是染色為陰性。(3) G-，球菌。2. 手指消毒前后細菌的采樣培養(yǎng)結(jié)果：1 )消毒前：僅出現(xiàn) 2 個菌落，較?。蝗榘咨?、光滑、濕潤、有光澤、圓形。革蘭氏染色結(jié)果：G-，桿菌2)消毒后：無菌落出現(xiàn)。3. 硬幣正反面的細菌采樣培養(yǎng)結(jié)果：1 )正面三種菌落：(1) 13 個菌落；較小；乳白色、光滑、濕潤、有光澤、圓形。和手指消毒前的菌 落一樣。(

15、 2) 1 個菌落；較大；白色、光滑、濕潤、近似圓形。( 3) 5 個菌落；較大；中央乳黃色邊緣顏色變淺、光滑、濕潤、中間凸、不規(guī)那么、 邊緣光滑取其中( 2)、( 3)進行革蘭氏染色，結(jié)果如下：(2) G-,桿菌。和手指消毒前的細菌一樣(3) G-,鏈桿菌。形態(tài)較大，形狀像炭疽芽胞桿菌，但是沒有芽孢且染色為陰性2)反面兩種菌落：( 1) 2 個；較大，乳白色、光滑、濕潤、有光澤、圓形。( 2)多個，沿硬幣邊緣線連成一片；針尖大小、無色、光滑、濕潤、透明。4. 空氣培養(yǎng)結(jié)果平皿敞開在實驗室的窗臺上放置了約20 分鐘，當時陽光照在上面：平皿出現(xiàn)了五種菌落：( 1) 11 個；中等大??；白色、光滑

16、、濕潤、半透明、圓形( 2) 2 個；較大；周圍白色，中間有一個透明圈，光滑、濕潤、中間凹的圓餅狀( 3) 1 個；較大；周圍黃色，中間有一個透明的圓形區(qū)域，半濕潤、沒有光澤( 4) 1 個；較大；邊緣橘黃色，中央偏白、明顯凸起、枯燥、形狀不規(guī)那么( 5) 1 個；較大；邊緣透明，中央乳黃色，光滑、濕潤、半透明、圓形 取其中( 3)、( 4)進行革蘭氏染色，結(jié)果如下：(3) G-,桿菌。和手指消毒前、硬幣正面菌落(2)的細菌一樣(4) 出現(xiàn)二種細菌：G-,雙球菌G+雙球菌G-,梭菌5. 八個取樣染色結(jié)果取樣細菌來源染色結(jié)果細菌形態(tài)1咽部G+鏈球菌2咽部G-球菌3咽部G-球菌4手指(消毒前)G-

17、桿菌5硬幣正面G-桿菌6硬幣正面G-鏈桿菌7空氣(實驗室窗臺)G-桿菌8空氣(實驗室窗臺)G-雙球菌G+雙球菌G-梭菌六、思考與討論1. 巴氏消毒法的利用巴氏消毒法是一種低溫消毒法，包括：低溫維持法：62.8攝氏度維持30分鐘；高溫瞬時法：71.3攝氏度作用15-30秒。該法適用于食品的消毒。現(xiàn)主要應用于乳制品。2. 為什么濕熱消毒法的溫度比干熱消毒法低？課堂上講到的干熱消毒法溫度都比濕熱消毒法要高，說明濕熱滅菌法可在較低的溫度下到達的滅菌效果可以與干熱法相同，分析原因如下：(1) 濕熱中蛋白吸收水份，更易凝固變性；(2) 水分子的穿透力比空氣大，更易均勻傳遞熱能，在干熱狀態(tài)下，由于熱穿透力較差，微生物的耐熱性較強，必須長時間受高溫的作用才能 到達滅菌的目的3蒸汽潛熱大，每 1 克水由氣態(tài)變成液態(tài)可釋放出 529 卡熱能，可迅速 提高物體的溫度。3 細菌分布試驗結(jié)果討論咽部正常菌群主要為： 溶血和非溶血性鏈球菌、 球菌等， 不同人由于個體差異和 取樣部位差異，所得菌種也有所不同手的消毒是有效的，消毒后細菌明顯減少了。 同時手上的菌是很多的，所以需要 常洗手。手上較常見的是四聯(lián)球菌。硬幣上的菌也相對較多，因為它經(jīng)歷的環(huán)境很多。在咽部、 硬幣和未消毒的手上