大豆發(fā)酵制品中總異黃酮的含量測定

1、大豆發(fā)酵制品中總異黃酮的含量測定                              作者：崔力劍，黃蕓，竇玉紅，詹文紅  【摘要】  目的建立一種測定大豆發(fā)酵制品淡豆豉中異黃酮類成分含量的紫外分光光度法分析方法。方法 以染料木素為對照品，利用染料木素與氫氧化鈉產生反應，在

2、271 nm波長處有最大吸收點，用紫外分光光度法測定淡豆豉中總異黃酮的含量。結果淡豆豉中總異黃酮的含量為9.884 mg/g，加樣回收率為99.3%，相對標準偏差為2.1%。結論方法簡便、準確、重現(xiàn)性好, 可作為測定淡豆豉中總異黃酮的含量的一種手段，適用于淡豆豉及其它豆制品的日常分析和質量控制。 【關鍵詞】  大豆 淡豆豉 氫氧化鈉 異黃酮 分光光度法Abstract：ObjectiveTo establish a UV spectrophotometry for determination of isoflavones in Semen Sojae Praeparatum.Meth

3、odsGenistein was selected as the reference substance. Based on the reaction of genistein and NaOH, which has the maxium absorption in 271nm wavelength, spectrophotometry method was used for determination of isoflavones in Semen Sojae Praeparatum. ResultsThe total content of isoflavones in Semen Soja

4、e Praeparatum extracts was 9.884mg/g with mean recovery 99.3%, and the RSD was 2.1%. ConclusionThis method is simple,accurate and reproducible,it can be used for the routine analysis and quality control of the Semen Sojae Praeparatum and function food.Key words：Glycine max (L.);  Semen Sojae Pr

5、aeparatum;  NaOH;  Isoflavones;  Spectrophotometry豆豉按微生物種類不同可以分為毛霉型豆豉、 曲霉型豆豉、細菌型豆豉和根霉型豆豉1。淡豆豉是豆科植物大豆Glycine max(L.) Merr.的成熟種子與青蒿、桑葉蒸罨、發(fā)酵加工而成的制品，發(fā)源于，是我國的傳統(tǒng)食品，也是衛(wèi)生部確定的第一批藥食兼用品種之一。作為常用中藥，歷版中國藥典均有記載。因炮制方法的不同，有的性寒，有的微熱，有解毒清熱、透疹解毒的功效，適用于風熱頭疼，胸悶嘔吐，痰多虛煩等癥。淡豆豉中含有的大豆異黃酮(Soybean Isoflavones)是一類

6、重要的生理活性物質，具有多種生理功能，如降血糖、抗腫瘤作用；對血管的防護作用；雌激素雙向調節(jié)作用；預防骨質疏松癥；較強的抗氧化活性和抗真菌活性等2,3,4。其有效成分以大黃素(Daidzein)和染料木素(Genistein)為主5，這是一類異黃酮成分。本實驗以染料木素作為對照品，利用染料木素與氫氧化鈉產生反應，并在271 nm波長處產生最大吸收峰的特性，采用紫外分光光度法在271 nm波長處測定淡豆豉中異黃酮的含量，建立一種快速、準確測定淡豆豉中總異黃酮含量的新方法。1  器材與方法1.1  材料正己烷（A.R），天津化學試劑廠產品；無水乙醇（A.R），天津化學試劑廠產品

7、；氫氧化鈉（A.R），河北辛集化工廠產品；染料木素對照品（含量約為98%），Sigma公司產品。淡豆豉（Semen Sojae Praeparatum）購自石家莊市樂仁堂藥店，經河北醫(yī)科大學中醫(yī)學院藥用植物教研室嚴玉平副教授鑒定為正品，留樣憑證存放于河北醫(yī)科大學中醫(yī)學院藥用植物教研室。1.2  儀器-2紫外分光光度儀（美國PE公司）、RE-52A旋轉蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠）、BS223S天平（德國賽多利斯公司）。1.3  樣品溶液制備6取符合實驗要求的淡豆豉，粉碎，過10目篩，精密稱取5 g。加正己烷40 ml超聲振蕩脫脂25 min，棄去正己烷，重復1次。殘渣加入50

8、 ml 70%乙醇溶液，85熱回流提取3次，1 h/次，收集提取液。減壓回收溶劑至干，加NaOH（0.01 mol/L）溶液溶解，定容為250 ml，作為供試品液。精密移取供試品液2 ml置100 ml量瓶中，加NaOH（0.01 mol/L）溶液定容至刻度，搖勻。平行操作3份。1.4  標準曲線繪制精密稱取120干燥至恒重的染料木素10.2 mg，置50 ml容量瓶中，加0.01 mol/L NaOH溶液定容至刻度，搖勻。精密吸取此溶液0.5，1.0，2.0，3.0，4.0 ml分別置于100 ml容量瓶中，加0.01 mol/L NaOH定容至刻度，搖勻，以0.01 mol/L

9、NaOH溶液為空白溶液，在271 nm處測吸收度。以吸收度（Y）為縱坐標，染料木素濃度(g/ml)（X）為橫坐標繪制標準曲線（見圖1），結果表明染料木素濃度與吸收度呈良好線性關系。回歸方程為Y = 0.169 8X + 0.005 9，r= 1.000 0。1.5  樣品測定以0.01 mol/L NaOH溶液為空白溶液，在271 nm處測吸收度。每個樣品重復測定2次。1         2  結果2.1  溶劑的選擇從染料木素的結構特點及理化性質可知，其具有強疏水性，難溶于水、稀鹽酸

10、等，微溶于甲醇、乙醇。選擇上述溶液作為染料木素的溶出介質不適宜。根據(jù)染料木素及異黃酮類化合物的理化特性（結構中含有酚羥基呈現(xiàn)弱酸性，易溶于稀堿），選擇稀氫氧化鈉（0.01 mol /L）溶液溶解大豆提取物中異黃酮類化合物，是簡便可行的。2.2  波長選擇由對照品紫外掃描圖譜(圖2)可得知，最大吸收峰都在271 nm，且最大吸收峰周圍干擾較小，我們就把271 nm作為測定波長。2.3  線性關系考察本法中，染料木素在0.514.08 g / ml范圍呈良好線性關系(見圖1)，相關系數(shù)r=1.000 0，測定上限可達8.0 g/ml，下限為0.2 g/ml。2.5 

11、精密度實驗精密吸取標準品溶液100 l，分別置5只5 ml容量瓶中, 加0.01 mol/L NaOH定容至刻度，搖勻，按“1.4”項操作，測定吸收度，RSD為1.9%。2.6  樣品測定取已制備好的3份樣品溶液測定，每份樣品按測定程序測定2次，以染料木素計量大豆異黃酮含量，所得結果見表2。表1  加樣回收率（略）表2  樣品中大豆異黃酮含量（略）3  討論淡豆豉為常用藥食同源物質，其最新報道有降血糖、血脂的作用，但有關淡豆豉中總異黃酮的質量分析報道較少7。我們經過研究對比，確定用一種簡單易行的紫外分光光度法對其主要有效成分異黃酮類成分進行測定，建立了一

12、種淡豆豉的質量控制標準。本法簡便、快速、選擇性好、線性范圍寬、重復性好、能全面反映樣品中大豆異黃酮的總含量，適用于淡豆豉中總異黃酮的質量檢測和測定，尤其是生產過程的質量控制。采用稀堿溶液溶解異黃酮，增加了異黃酮的溶解度，使得淡豆豉中總異黃酮含量測定準確度大大提高。同時由于淡豆豉中異黃酮與堿發(fā)生反應，使得其最大吸收波長發(fā)生紅移，紫外吸收峰遠離末端吸收，也提高了淡豆豉中總異黃酮含量測定準確度?！尽?#160; 1楊淑媛,田元蘭,丁純孝. 新編大豆食品M.北京：商業(yè)出版社,1989：284.2CLee Holder，Mona I. Churchwell，Daniel R. Doerge.Quantification of Soy Isoflavones，Genistein and Conjugates in Rat Blood Using LC/ES-MSJ.Agric Food Chem.，1999，47：3764.3牛麗穎,王鑫國,葛喜珍,等.淡豆豉提取物降糖有效部位研究J.中藥藥理與臨床,2002,20(5):21.4王鑫國,葛喜珍,白 霞