免疫學(xué)在醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用分享

1、真誠(chéng)為您提供優(yōu)質(zhì)參考資料，若有不當(dāng)之處，請(qǐng)指正。免疫學(xué) - 發(fā)展簡(jiǎn)史早在1000多年前，人們就發(fā)現(xiàn)了免疫現(xiàn)象，并由此發(fā)展起來(lái)對(duì)傳染病的免疫預(yù)防。中國(guó)人首先發(fā)明了用人痘痂皮接種以預(yù)防天花，并且在十五世紀(jì)中后期的明朝隆慶年間有較大改進(jìn)，并得到廣泛的應(yīng)用。后來(lái)，這一偉大發(fā)明傳播到日本、朝鮮、俄國(guó)、土耳其和英國(guó)等許多國(guó)家。后英國(guó)醫(yī)生琴納據(jù)此研究出用牛痘菌預(yù)防天花的方法，為免疫學(xué)對(duì)傳染病的預(yù)防開(kāi)辟了廣闊的前景。全世界能在20世紀(jì)70年代末消滅天花，接種牛痘菌發(fā)揮了巨大作用。119世紀(jì)末，法國(guó)化學(xué)家、微生物學(xué)家巴斯德于研究人和動(dòng)物的傳染病時(shí)，分析了免疫現(xiàn)象。并在琴納的啟發(fā)下，他發(fā)明用減毒炭疽桿菌苗株制成疫

2、苗，預(yù)防動(dòng)物的炭疽??；用減毒狂犬病毒株制成疫苗，預(yù)防人類(lèi)的狂犬病。著名動(dòng)物學(xué)家梅契尼科夫在長(zhǎng)期研究昆蟲(chóng)和動(dòng)物細(xì)胞吞噬異物的現(xiàn)象后，于1883年指出體內(nèi)的白細(xì)胞和肝、脾組織中的吞噬細(xì)胞具有吞噬和消化細(xì)菌的能力。德國(guó)細(xì)菌學(xué)家、免疫學(xué)家貝林于1890年發(fā)現(xiàn)免疫血清中有抗白喉毒素的抗毒素存在，日本細(xì)菌學(xué)家北里柴三郎也發(fā)現(xiàn)抗破傷風(fēng)毒素的抗毒素，兩人共同研究血清療法成功，對(duì)治療白喉和破傷風(fēng)患者取得良好效果。從此，人們開(kāi)始探討免疫機(jī)制，把細(xì)胞的吞噬作用和抗毒素的中和作用看成是特異性免疫的根據(jù)，并逐步開(kāi)展細(xì)胞免疫和體液免疫兩大學(xué)派的爭(zhēng)鳴。細(xì)胞免疫學(xué)派的首領(lǐng)是梅契尼科夫，體液免疫學(xué)派的首領(lǐng)是德國(guó)細(xì)菌學(xué)家埃爾利希

3、。埃爾利希用生物化學(xué)方法研究免疫現(xiàn)象，特別是以蛋白質(zhì)化學(xué)和糖化學(xué)作為基礎(chǔ)，探討抗原和抗體的本質(zhì)及其相互作用，于1896年提出抗體形成的側(cè)鏈學(xué)說(shuō)，這一學(xué)說(shuō)直到今天還具有實(shí)際意義。兩大學(xué)派的爭(zhēng)鳴促進(jìn)了免疫學(xué)的發(fā)展。到20世紀(jì)60年代，對(duì)體液免疫的研究已經(jīng)達(dá)到分子生物學(xué)的水平，已經(jīng)弄清抗體的分子結(jié)構(gòu)和功能。同時(shí)，對(duì)細(xì)胞免疫的研究也取得了明顯的進(jìn)展，過(guò)去認(rèn)為小淋巴細(xì)胞是處于衰老終末期，而現(xiàn)在 正常紅細(xì)胞電鏡圖已肯定它是免疫系統(tǒng)的一大類(lèi)具有免疫活性的淋巴細(xì)胞，在發(fā)揮免疫功能中起著重要作用。此后人們進(jìn)一步闡明了小淋巴細(xì)胞的結(jié)構(gòu)，以及個(gè)體的發(fā)生和分化過(guò)程，特別是在雜交瘤技術(shù)方面取得了突破性的成就，這不僅豐富

4、了一般細(xì)胞學(xué)的知識(shí)，而且為獲得單克隆抗體或介質(zhì)物質(zhì)開(kāi)辟了一條新的道路。許多學(xué)者還注意到：當(dāng)病原微生物入侵的時(shí)候，機(jī)體一方面能夠獲得特異性免疫，另一方面也會(huì)出現(xiàn)機(jī)體免疫損害。自從德國(guó)細(xì)菌學(xué)家科赫研究結(jié)核桿菌所引起的遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)以來(lái)，人們逐步發(fā)現(xiàn)不僅細(xì)菌及其產(chǎn)物可以引起機(jī)體免疫損害，就連異種血清蛋白甚至許多很簡(jiǎn)單的化學(xué)物質(zhì)再次進(jìn)入機(jī)體，也會(huì)使機(jī)體組織遭到破壞。20世紀(jì)中期，隨著組織器官移植的開(kāi)展，對(duì)移植物排斥、免疫耐受性、免疫抑制、免疫缺陷、自身免疫、腫瘤免疫等進(jìn)行了深入的研究，認(rèn)識(shí)到胸腺、法氏囊和脾臟在機(jī)體免疫功能中的重要意義，認(rèn)識(shí)到過(guò)去把免疫過(guò)程局限于抗傳染免疫的片面性，也認(rèn)識(shí)到免疫應(yīng)答是既

5、可防御傳染和保護(hù)機(jī)體、又可造成免疫損害和引起疾病的一個(gè)生物學(xué)過(guò)程。也就是說(shuō)，免疫是生物體對(duì)一切非己分子進(jìn)行識(shí)別與排除的過(guò)程，是維持機(jī)體相對(duì)穩(wěn)定的一種生理反應(yīng)，是機(jī)體自我識(shí)別的一種普遍生物學(xué)現(xiàn)象。 免疫學(xué) - 免疫學(xué)應(yīng)用免疫學(xué)廣泛應(yīng)用于三大方面：傳染病預(yù)防：接種菌苗、疫苗，使機(jī)體主動(dòng)產(chǎn)生免疫力. 嚴(yán)重急性呼吸道綜合征（SARS）及艾滋病，終將有賴于疫苗的發(fā)明。 疾病治療：包括腫瘤、慢性傳染病及超敏性疾病，可用抗體、細(xì)胞因子、體外擴(kuò)增的免疫細(xì) 胞及治療性抗原疫苗治療。免疫診斷：按抗原與抗體及T 細(xì)胞受體特異結(jié)合的原理；按抗原能活化特異的適應(yīng)性免疫應(yīng)答，發(fā)展起多種特異敏感的免疫學(xué)診斷方法，

6、已廣泛用于ABO 血型定型，傳染病診斷，妊娠確診等等。2免疫學(xué) - 免疫功能現(xiàn)代免疫學(xué)認(rèn)為，機(jī)體的免疫功能是對(duì)抗原刺激的應(yīng)答，而免疫應(yīng)答又表現(xiàn)為免疫系統(tǒng)識(shí) 吞噬細(xì)胞吞噬病菌別自己和排除非己的能力。免疫功能根據(jù)免疫識(shí)別發(fā)揮作用。這種功能大致有：對(duì)外源性異物(主要是傳染性因子)的免疫防御；去除衰退或損傷細(xì)胞的免疫，以保持自身穩(wěn)定；消除突變細(xì)胞的免疫監(jiān)視。只有免疫系統(tǒng)在正常條件下發(fā)揮相應(yīng)的作用和保持相對(duì)的平衡，機(jī)體才能維持生存。如果免疫功能發(fā)生異常，必然導(dǎo)致機(jī)體平衡失調(diào)，出現(xiàn)免疫病理變化。免疫系統(tǒng)在發(fā)揮免疫功能的過(guò)程中，識(shí)別是個(gè)重要的前提。一切生物都具有這種能力。單細(xì)胞生物只具有分辨食物、入侵微生物

7、和本身細(xì)胞成分等低級(jí)的識(shí)別功能。脊椎動(dòng)物的機(jī)體免疫系統(tǒng)逐漸完善，不僅具有完整的免疫器官和免疫細(xì)胞，而且免疫活性細(xì)胞還能產(chǎn)生特異性抗體和琳巴因子，從而準(zhǔn)確地識(shí)別自己，排除異物以達(dá)到機(jī)體內(nèi)環(huán)境的相對(duì)穩(wěn)定，這對(duì)保護(hù)自己、延續(xù)種族和生物進(jìn)化都有重大意義。高等生物的免疫系統(tǒng)充分發(fā)展，它對(duì)內(nèi)外環(huán)境的各種抗原異物刺激既表現(xiàn)出多樣性和適應(yīng)性，又表現(xiàn)出特異性和回憶性，這對(duì)生物的進(jìn)化過(guò)程、生物種系的生存和適應(yīng)具有重大影響。 免疫功能是免疫系統(tǒng)在識(shí)別和清除“非己”抗原的過(guò)程中所產(chǎn)生的各種生物學(xué)作用的總稱。主要包括：1.免疫防御（Immunologicaldefence)是機(jī)體排斥外來(lái)抗原性異物的一種免疫保護(hù)功能。正

8、常時(shí)可產(chǎn)生抗感染免疫的作用，防御功能過(guò)強(qiáng)會(huì)產(chǎn)生超敏反應(yīng)，過(guò)弱則產(chǎn)生免疫缺陷（后兩種情況均屬異常反應(yīng)）。2、免疫自穩(wěn)是機(jī)體免疫系統(tǒng)維持內(nèi)環(huán)境相對(duì)穩(wěn)定的一種生理功能。 巨噬細(xì)胞正常時(shí)：機(jī)體可及時(shí)清除體內(nèi)損傷、衰老、變性的血細(xì)胞和抗原抗體復(fù)合物，而對(duì)自身成份保持免疫耐受；異常時(shí)：發(fā)生生理功能紊亂、自身免疫病等。3、免疫監(jiān)視是機(jī)體免疫系統(tǒng)及時(shí)識(shí)別、清除體內(nèi)突變、畸變和病毒干擾細(xì)胞的一種生理保護(hù)作用。喪失：機(jī)體突變細(xì)胞失控，有可能導(dǎo)致腫瘤發(fā)生；或出現(xiàn)病毒的持續(xù)感染。 免疫學(xué) - 檢測(cè)方法免疫學(xué)檢測(cè)方法可分為體液免疫和細(xì)胞免疫測(cè)定。1 體液免疫測(cè)定主要利用抗原與相應(yīng)抗體在體外發(fā)生特異性結(jié)合，并在

9、一些輔助因子參與下出現(xiàn)反應(yīng)，從而用已知抗原或抗體來(lái)測(cè)知未知抗體或抗原。此外，尚包括檢測(cè)體液中的各種可溶性免疫分子，如補(bǔ)體、免疫球蛋白、循環(huán)復(fù)合物、溶菌酶等。2 細(xì)胞免疫測(cè)定法是根據(jù)各種免疫細(xì)胞（T細(xì)胞、B細(xì)胞、K細(xì)胞、NK細(xì)胞及巨噬細(xì)胞等）表面所具有的獨(dú)特標(biāo)志和產(chǎn)生的細(xì)胞因子等，測(cè)定各種免疫細(xì)胞及其亞群的數(shù)量和功能，以幫助了解機(jī)體的細(xì)胞免疫水平。體液免疫檢測(cè)法體液免疫檢測(cè)法主要包括： 抗原抗體1.凝集反應(yīng)。顆粒性抗原(細(xì)菌或紅細(xì)胞等)與相應(yīng)抗體特異性結(jié)合，在電解質(zhì)參與下形成肉眼可見(jiàn)的凝集物，稱之為凝集反應(yīng)。1）直接凝集反應(yīng)。顆粒性抗原與相應(yīng)抗體直接結(jié)合所產(chǎn)生的凝集現(xiàn)象，前者多為細(xì)胞表

10、面的結(jié)構(gòu)成分，如細(xì)菌或紅細(xì)胞的表面結(jié)構(gòu)抗原。（1）玻片法：多用于抗原的定性檢測(cè)。（2）試管法：多用于抗體的定量檢測(cè)。2）間接凝集反應(yīng)。將可溶性抗原吸附于載體顆粒(如乳膠顆粒、紅細(xì)胞等)的表面，稱之為致敏顆粒。當(dāng)致敏顆粒與相應(yīng)抗體結(jié)合，即可出現(xiàn)凝集現(xiàn)象。這個(gè)反應(yīng)常用于測(cè)定細(xì)菌性抗體、病毒性抗體、鉤端螺旋體和梅毒螺旋體抗體及某些自身抗體(如抗核抗體、抗腎抗體、抗甲狀腺抗體等)。根據(jù)凝集反應(yīng)的原理，還有間接凝集抑制試驗(yàn)、反向間接凝集試驗(yàn)、協(xié)同凝集試驗(yàn)等。2沉淀反應(yīng)?？扇苄钥乖?外毒素、血清、細(xì)菌培養(yǎng)的濾液、組織浸出液等)與相應(yīng)抗體特異性結(jié)合，在電解質(zhì)參與下，形成沉淀物，稱為沉淀反應(yīng)。沉淀反應(yīng)的抗原多

11、為多糖、類(lèi)脂、蛋白質(zhì)等。1）單向擴(kuò)散試驗(yàn)。這是一種抗原定量試驗(yàn)，是可溶性抗原在含抗體的瓊脂介質(zhì)中擴(kuò)散的沉淀反應(yīng)。此法常用于檢測(cè)血清免疫球蛋白和補(bǔ)體各成分的含量。2）雙向擴(kuò)散試驗(yàn)。這是可溶性抗原與抗體在瓊脂介質(zhì)中相互擴(kuò)散的沉淀反應(yīng)。本法常用于定性試驗(yàn)，如檢測(cè)血清免疫球蛋白、甲胎蛋白、乙型肝炎表面抗原等。 單克隆抗體技術(shù)3）對(duì)流免疫電泳。對(duì)流電泳是一敏感快速的檢測(cè)方法，即在電場(chǎng)作用下的雙向免疫擴(kuò)散。此法常用于檢測(cè)血清中的乙型肝炎表面抗原與甲胎蛋白等。3中和試驗(yàn)。特異性抗體可抑制相應(yīng)抗原物質(zhì)的活性，抗體使相應(yīng)抗原的毒性或傳染性消失的反應(yīng)為中和試驗(yàn)。例如抗毒素中和外毒素的毒性，病毒的中和抗體可使病毒失

12、去感染性等。診斷風(fēng)濕熱的抗鏈球菌溶血毒素“O”試驗(yàn)也為一種中和試驗(yàn)。乙型溶血性鏈球菌能產(chǎn)生一種溶解人、兔紅細(xì)胞的溶血毒素“O”，該毒素的溶血毒性可被抗溶血毒素“O”抗體所中和而不出現(xiàn)溶血。試驗(yàn)時(shí)將病人血清與溶血毒素“O”混合，作用一段時(shí)間后加入人紅細(xì)胞，紅細(xì)胞不被溶解為陽(yáng)性反應(yīng)，表示病人血清中存在抗溶血毒素“O”抗體。血清抗體效價(jià)達(dá)400單位以上時(shí)提示患者曾感染乙型溶血性鏈球菌，有助于風(fēng)濕熱的診斷。4.免疫熒光法(熒光抗體法)。是應(yīng)用熒光素染料(如異硫氰酸熒光黃等)來(lái)標(biāo)記抗體，但不影響其活性，此種抗體稱熒光抗體。用已知種類(lèi)的熒光抗體浸染待檢的含有抗原的細(xì)胞或組織切片，如有相應(yīng)抗原存在，則抗原即

13、與此種抗體發(fā)生特異性結(jié)合，形成復(fù)合物而粘著在細(xì)胞上，不易洗脫，在熒光顯微鏡下成為發(fā)出熒光的可見(jiàn)物，可達(dá)到診斷或定位的目的。包括直接法和間接法。5酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)。本法的原理是利用酶(常用辣根過(guò)氧化物酶)標(biāo)記的抗原或抗體，以測(cè)定被檢標(biāo)本中有無(wú)相應(yīng)的抗原或抗體。有間接法、雙抗體法、競(jìng)爭(zhēng)法三種。6溶血空斑試驗(yàn)。7免疫印跡技術(shù)。免疫印跡或免疫轉(zhuǎn)印技術(shù)(immunoblotting或Westernblot)是在Southern（1975） 抗體抗原反應(yīng)創(chuàng)建的DNA印跡術(shù)(Southernblotting)基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的新型免疫生化技術(shù)。 細(xì)胞免疫檢測(cè)法近代免疫學(xué)廣泛采用了細(xì)胞生物學(xué)、免疫血清學(xué)、免疫標(biāo)

14、記、免疫組化等多方面技術(shù)，不斷發(fā)展和完善了一系列細(xì)胞免疫檢測(cè)技術(shù)，用于檢測(cè)各類(lèi)免疫細(xì)胞的表面標(biāo)志(包括抗原及受體)、細(xì)胞的活化、增殖、吞噬、殺傷功能、各種細(xì)胞因子的活性或含量等方面。這些技術(shù)為深入研究和認(rèn)識(shí)機(jī)體免疫系統(tǒng)的生理、病理改變，闡明某些疾病的發(fā)病機(jī)制和臨床診治提供了有用的手段。隨著細(xì)胞免疫學(xué)的迅猛發(fā)展，時(shí)有新的細(xì)胞免疫檢測(cè)技術(shù)出現(xiàn)。近年來(lái)，新發(fā)展的項(xiàng)目集中在對(duì)有關(guān)細(xì)胞因子以及細(xì)胞受體方面的檢測(cè)。1淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)。人類(lèi)淋巴細(xì)胞在體外與特異性抗原(如結(jié)核菌素)或非特異性有絲分裂原(如植物血凝素，PHA)等一起孵育，T細(xì)胞即被激活而向淋巴母細(xì)胞轉(zhuǎn)化。T細(xì)胞轉(zhuǎn)化過(guò)程可伴隨有DNA、RNA、蛋

15、白質(zhì)的合成增加，最后導(dǎo)致細(xì)胞分裂。在光學(xué)顯微鏡下可計(jì)數(shù)轉(zhuǎn)化后的淋巴母細(xì)胞數(shù)，也可用氚標(biāo)記的胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)摻入正在分裂的淋巴細(xì)胞，用液閃測(cè)定儀來(lái)確定摻入量以確定淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率。最近有一種不用同位素，又可用儀器測(cè)量的淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)的檢查法，稱為MTT檢測(cè)法。MTT是一種甲氮唑鹽，它是細(xì)胞線粒體脫氫酶的底物，細(xì)胞內(nèi)的酶可將MTT分解產(chǎn)生藍(lán)黑色成分。該產(chǎn)物的多少與活細(xì)胞數(shù)成正比，結(jié)果可用酶標(biāo)儀(595nm)測(cè)量光密度，作為MTT法的指標(biāo)。2E-花環(huán)法。人類(lèi)T細(xì)胞表面有羊細(xì)胞受體(CD2)能與羊紅細(xì)胞結(jié)合形成玫瑰花樣結(jié)構(gòu)。即將分離液分離出的外周的單個(gè)核細(xì)胞懸液與羊紅細(xì)胞在體外混合，經(jīng)37

16、培養(yǎng)510分鐘后放4過(guò)夜，取細(xì)胞懸液計(jì)數(shù)，外周血淋巴細(xì)胞中約70%80%淋巴細(xì)胞結(jié)成花環(huán)即為T(mén)細(xì)胞，此法可用來(lái)分離T細(xì)胞。3T細(xì)胞亞群檢測(cè)。4細(xì)胞毒試驗(yàn)。Tc細(xì)胞、NK細(xì)胞、LAK細(xì)胞、TIL細(xì)胞等對(duì)其靶細(xì)胞有直接的細(xì)胞毒(殺傷)作用。 抗體制備常用的檢測(cè)方法是51Cr(鉻)釋放法，將51Cr-Na2CrO4鹽水溶液與靶細(xì)胞(不同的細(xì)胞需不同的靶細(xì)胞，如NK細(xì)胞的靶細(xì)胞為K562)，于37培養(yǎng)1小時(shí)左右，51Cr即進(jìn)入靶細(xì)胞，與胞漿結(jié)合，洗去游離的51Cr后，即可得到51Cr標(biāo)記的靶細(xì)胞，將待測(cè)細(xì)胞毒的細(xì)胞與51Cr標(biāo)記的靶細(xì)胞混合(比例約為50:1或100:1)，靶細(xì)胞殺傷越多，釋放到上清液

17、中的游離51Cr就越多，且不能再被其他細(xì)胞吸收，用射線測(cè)量?jī)x檢測(cè)上清液中的cpm值，可計(jì)算出待檢細(xì)胞殺傷活性高低。細(xì)胞毒的檢測(cè)對(duì)腫瘤免疫有較大價(jià)值。5巨噬細(xì)胞吞噬功能的測(cè)定。將中藥(10%斑蝥)乙醇浸出液浸漬的濾紙(1cm2大小)置于受試者前臂屈側(cè)皮膚上，45小時(shí)后取下濾紙。48小時(shí)內(nèi)皮膚局部可水泡，內(nèi)含巨噬細(xì)胞。取水泡液0.5ml加雞紅細(xì)胞懸液0.01ml，37經(jīng)30分鐘后作涂片、染色與鏡檢，計(jì)算吞噬百分率及每個(gè)巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞的平均數(shù)。本試驗(yàn)有助于腫瘤病情及療效的觀察。6移動(dòng)抑制試驗(yàn)。致敏淋巴細(xì)胞與其特異性抗原再次接觸時(shí)，可以產(chǎn)生移動(dòng)抑制因子(MIF)。這種因子可以抑制巨噬細(xì)胞和中性粒

18、細(xì)胞的移動(dòng)，使之定位于局部而增強(qiáng)其免疫作用。本試驗(yàn)用來(lái)觀察受檢者淋巴細(xì)胞在體外受特異性抗原刺激后，有無(wú)MIF產(chǎn)生，以測(cè)定機(jī)體對(duì)某種抗原的特異性細(xì)胞免疫反應(yīng)的功能。7時(shí)間分辨熒光測(cè)量技術(shù)。時(shí)間分辨熒光測(cè)量技術(shù)(time-resolvedfluorometry,TrF)是一項(xiàng)新型的超微量非放射性分析技術(shù)。該技術(shù)的敏感性和特異性與放射性核素測(cè)量技術(shù)相仿，但無(wú)放射測(cè)量的弊端，故問(wèn)世雖短，進(jìn)展卻極為迅速，有取代放射測(cè)量之勢(shì)。8細(xì)胞因子檢測(cè)技術(shù)。細(xì)胞因子的檢測(cè)，近年來(lái)在中醫(yī)臨床及實(shí)驗(yàn)室中已廣泛應(yīng)用。9細(xì)胞受體的檢測(cè)。受體是細(xì)胞表面標(biāo)志之一，通過(guò)對(duì)受體的檢測(cè)，可以了解細(xì)胞的功能，并為某些疾病的發(fā)病機(jī)制提供一定的理論依據(jù)。 免疫學(xué) - 應(yīng)用新中國(guó)成立以來(lái)，免疫學(xué)在醫(yī)學(xué)上的應(yīng)用已經(jīng)有了很大進(jìn)展。防治傳染病的生物制品 免疫學(xué)不僅滿足國(guó)內(nèi)的需要，而且支援其他一些國(guó)家。近年研制的新疫苗如化學(xué)疫苗、乙型肝炎疫苗等，