Bcl2表達對不同細胞來源的彌漫大B細胞淋巴瘤臨床病理特征和預后的影響

1、Bcl2表達對不同細胞來源的彌漫大B細胞淋巴瘤臨床病理特征和預后的影響                    作者：裴媛媛，楊文秀，王松，薄麗，孟青【摘要】  目的： 了解Bcl2表達對不同基因表達譜細胞來源的彌漫大B細胞淋巴瘤（DLBCL）臨床病理特征和預后的影響。方法： 收集42例彌漫大B細胞淋巴瘤組織，常規(guī)HE及免疫組織化學染色，觀察DLBCL的組織形態(tài)特點、腫瘤細胞的免疫表型和Bcl2的表達；搜集臨

2、床病理資料和隨訪，并進行統(tǒng)計學分析。結果： 42例DLBCL中31例表達Bcl2（73.8%），生發(fā)中心細胞來源樣（14/17）和活化后細胞來源樣（17/25）DLBCL病例之間Bcl2表達沒有統(tǒng)計學差異，但Bcl2陽性和陰性病例之間臨床分期有明顯差別，Bcl2陽性病例臨床分期明顯晚于陰性病例(P0.05)；原發(fā)于結外的DLBCL淋巴結累及者多為Bcl2陽性病例（5/6），Bcl2陽性DLBCL病例的生存狀況有差于陰性病例的趨勢（P=0.06）。結論： DLBCL中Bcl2表達與腫瘤細胞的基因表達譜沒有明顯關系，但與DLBCL的臨床病理過程和預后有關，可能是判斷DLBCL預后的相關因子。 【關

3、鍵詞】  淋巴瘤； Bcl2； 病理學； 預后Abstract Objective: To investigate the influence of Bcl2 expression on clinicopathological features and prognosis of diffuse large B cell lymphoma (DLBCL) developed from different cell origins. Methods: Tissues of 42 cases of DLBCL were screened from 180 cases of B cell n

4、onHodgkin lymphoma. Sections were stained with routine HE method, and immunophenotypes of neoplastic cell, such as CD20, CD3, CD10, Bcl6, Bcl2 and MUM1, were examined with immunohistochemistry (IHC) stained sections. The clinical and pathological data of all cases were collected. Some patients were

5、followed up. Statistical analysis was done. Results: The expression of Bcl2 was found in 31 out of 42 case of DLBCL (73.8%). There was no statistically significant difference of Bcl2 expression between GBClike (14/17) and ABClike (17/25) DLBCL. The relation of Bcl2 expression with age, sex, site of

6、DLBCL was not found, but it was associated with clinical staging of the disease. The stages of Bcl2positive DLBCL cases were later than those of Bcl2negative DLBCL cases (P0.05). Most of the DLBCL cases that originated outside nodes showed positive expression of Bcl2 (5/6). There was a tendency that

7、 the survival status of Bcl2positive cases was worse than that of Bcl2negative cases (P=0.06). Conclusions: The expression of Bcl2 in DLBCL doesnt associate with the gene expression spectra obviously, but it affects the clinical course and prognosis of DLBCL. Bcl2 may be one of predictive factors fo

8、r prognosis of DLBCL.Key words lymphoma; bcl2; pathology; prognosis    彌漫大B細胞淋巴瘤（Diffuse large B cell lymphoma, DLBCL）是外周成熟B細胞淋巴瘤中最常見的類型，是一組異質(zhì)性淋巴瘤，在2008年淋巴造血組織腫瘤分類中被分成了十余種亞型1,不同DLBCL亞型的病因、發(fā)生機制、臨床過程和預后不盡相同。Bcl2是從B細胞淋巴瘤中被首先發(fā)現(xiàn)的癌基因，是重要的凋亡抑制基因，主要通過線粒體途徑抑制細胞凋亡。過去研究認為，Bcl2特異地在惰性的濾泡性淋巴瘤中表達，通過抑制細胞凋

9、亡而參與濾泡性淋巴瘤的發(fā)生機制?，F(xiàn)在發(fā)現(xiàn)，Bcl2在多種惰性小B細胞淋巴瘤和侵襲性的DLBCL中都有表達，其表達對這些淋巴瘤產(chǎn)生的影響目前尚未完全清楚。有報道認為，Bcl2表達可能影響DLBCL的化療效果和臨床過程2，3，但研究結果不盡一致，Bcl2表達對不同細胞來源的DLBCL的影響還未見報道。收集2001-2007年DLBCL病例進行研究，觀察Bcl2表達對DLBCL細胞來源、臨床病理特征和預后等是否產(chǎn)生影響，是否可以作為判斷DLBCL預后的相關因子。1  資料和方法1.1  資料 收集2001-2007年診斷的B細胞非霍奇金淋巴瘤180例，常規(guī)HE切片觀察，

10、檢查腫瘤細胞的免疫表型，按照2008年WHO淋巴造血組織腫瘤分類進行病例復查和篩選。篩選工作由兩位資深的病理科醫(yī)師完成，淋巴瘤的臨床分期參照修正的Ann arbor 分期進行，根據(jù)Bcl2表達情況對研究病例進行分組，根據(jù)腫瘤細胞CD10、Bcl6和MUM1的表達情況確定DLBCL的細胞來源。CD10和Bcl 6陽性（或Bcl 6及CD10單獨陽性）、而MUM1陰性者劃為生發(fā)中心細胞來源（GBC），CD10和Bcl6陰性（或Bcl6陽性）、而MUM1陽性者劃為活化后細胞來源（ABC）。1.2  方法   1.2.1  常規(guī)蘇木素伊紅染色 按常用病

11、理技術操作規(guī)范進行。切片、脫蠟、梯度酒精下行入水、蘇木素染色、分化、伊紅染色、脫水、透明封片。1.2.2  免疫組織化學染色 采用SP三步法，以Tris乙二胺四乙酸（EDTA）（pH 9.0）或枸掾酸（pH 6.0）為修復液，進行高壓熱修復。DAB顯色，用PBS液代替一抗作為空白對照。全部病例都標記CD20、CD3、CD10、MUM1、Bcl6和Bcl2。所用一抗Bcl6購自北京中杉金橋公司，其余均為DAKO產(chǎn)品。抗體稀釋度CD10為180，Bcl6為150，其余均為1150，檢測試劑盒購自北京中杉金橋生物科技有限公司。免疫組織化學結果判斷：CD20、CD10、CD3陽性信

12、號定位于細胞膜，Bcl6、MUM1陽性信號定位于細胞核，Bcl2陽性信號定位于細胞漿。以Bcl2陽性細胞數(shù)多于腫瘤細胞的20%為陽性。1.2.3  隨訪 主要采用電話隨訪、信訪或到病人家中探訪，以病人診斷之日為隨訪開始時間，以2009年7月18日為隨訪結束時間。貴陽醫(yī)學院學報  34卷   6期裴媛媛等  Bcl2表達對不同細胞來源的彌漫大B細胞淋巴瘤臨床病理特征和預后的影響1.2.4  統(tǒng)計學分析  應用SPSS 11.5軟件包進行分析，計數(shù)資料均采用2檢驗，生存分析采用KaplanMeier方法繪制生存曲線，生

13、存曲線的比較采用對數(shù)秩檢驗（Log Rank test），以P值0.05為差異有顯著性。         2  結果2.1  臨床病理資料   180例B細胞性非霍奇金淋巴瘤中，42例符合診斷標準、具有相對完整的臨床病理資料的病例被納入研究。42例DLBCL中，男27例，女15例，男女之比為1.8:1, 發(fā)病年齡1691歲，中位發(fā)病年齡59.5歲。原發(fā)于淋巴結內(nèi)15例，原發(fā)于結外27例。臨床分期I期4例，II期8例，III期20例，IV期10例。27例原發(fā)于淋巴結外的DLBC

14、L中6例有淋巴結累及。光學顯微鏡下觀察DLBCL腫瘤細胞彌漫分布，原有的組織結構破壞，腫瘤細胞為中等或大細胞，細胞圓形或類圓形，細胞核為泡狀核、染色質(zhì)細膩、見多個貼近核膜的小核仁或中位的大核仁。腫瘤細胞免疫表型為：全部病例CD20陽性及C3陰性， 17例CD10陽性，23例Bcl6陽性，25例MUM1陽性。2.2  Bcl2表達與DLBCL臨床病理特征   42例DLBCL中，31例不同程度地表達Bcl2(31/42, 73.8%)(圖1)，6例出現(xiàn)淋巴結累及的結外DLBCL中5例表達Bcl2。Bcl2表達與DLBCL部分臨床病理特征的關系見表1。表1 

15、 Bcl2表達與DLBCL臨床病理特征的關系（略）2.3  隨訪結果     42例DLBCL中有26例獲隨訪資料，獲訪率61.9%，隨訪時間237月。26例獲訪病例中，存活16例，復發(fā)3例，死亡10例，均死于DLBCL，中位生存時間17月。10例死亡病例中，來源于GBC細胞和ABC細胞的DLBCL各占5例，9例Bcl2陽性，1例Bcl2陰性。3例復發(fā)病例中，2例來源于ABC細胞，1例來源于GBC細胞，3例均為Bcl2陽性。26例中7例接受手術治療，其中2例術后輔以化療，6例接受了單純CHOP方案化療，2例接受CHOP方案化療和放療，5例接受中藥治療，1

16、例接受骨髓移植，5例放棄治療。根據(jù)DLBCL病例的Bcl2表達和細胞來源情況繪制生存率曲線并進行生存分析，結果見圖2、3。3  討論   DLBCL是發(fā)病率很高的侵襲性淋巴瘤。在DLBCL的十幾個亞類型中，非特指的DLBCL是最多見的亞類。根據(jù)腫瘤細胞的基因表達圖譜，非特指DLBCL被分成了GBC樣和ABC樣DLBCL。目前主要通過免疫組織化學標記來進行劃分，常用的抗體為CD10、Bcl6和MUM1。CD10和Bcl6是GBC樣的標記，MUM1則是ABC樣B細胞的主要標記。研究認為，ABC樣DLBCL的臨床過程和預后較GBC樣DLBCL差，GBC有50%以上的5年

17、生存率，是低臨床風險的DLBCL，而ABC樣DLBCL病人僅有不到20%的5年生存率，具有較晚的臨床分期，原發(fā)于結外者具有較高的淋巴結累及率，是具有高臨床風險的DLBCL57。Bcl2是凋亡抑制基因，在濾泡性淋巴瘤中由于t(14;18) 染色體易位的出現(xiàn)，使18號染色體上的Bcl2基因易位到免疫球蛋白重鏈基因的強啟動子下，導致Bcl2基因的高表達。在研究和工作中發(fā)現(xiàn)，Bcl2在一些惰性的小B細胞淋巴瘤和DLBCL中都有不同程度的表達，有報道認為Bcl2是DLBCL治療中相關的耐藥基因。目前，Bcl2表達對不同類型非特指DLBCL的影響很少見到報道，此次研究發(fā)現(xiàn)，在DLBCL中具有較高的Bcl2

18、表達，表達率為73.8%(31/42)，在GBC樣和ABC樣DLBCL病例之間，Bcl2的表達沒有明顯差異（GBC樣為14/17，ABC樣為17/25）。Bcl2表達對DLBCL的發(fā)病年齡、性別及原發(fā)部位等沒有明顯影響，但Bcl2表達和不表達病例之間臨床分期有明顯差別，Bcl2陽性的DLBCL臨床分期明顯晚于Bcl2陰性的DLBCL，原發(fā)于結外的DLBCL淋巴結累及者大多數(shù)是Bcl2陽性表達病例（5/6），說明Bcl2表達對DLBCL的臨床過程有明顯影響，這和文獻報道一致。此次研究還發(fā)現(xiàn)，ABC樣DLBCL病例多于GBC樣DLBCL病例。生存分析發(fā)現(xiàn)，GBC樣DLBCL的中位生存時間是28月，

19、ABC樣DLBCL中位生存時間是24月，兩組病人的生存率曲線比較沒有統(tǒng)計學差異（P0.05），Bcl2陽性表達的DLBCL中位生存時間為36個月，而Bcl2陰性表達病例的中位生存時間為22月，兩組病人的生存率曲線比較亦未見統(tǒng)計學差異，P=0.06，提示Bcl2陽性表達病例的生存狀況有差于陰性表達病例的趨勢，生存分析結果與文獻報道不盡一致，這可能與本次獲訪病例數(shù)偏少和隨訪時間短有關系，DLBCL病例的中位生存時間較短可能與研究病例中ABC樣DLBCL病例較多，而GBC樣DLBCL病例較少有關，也可能與貴州山區(qū)經(jīng)濟貧困和醫(yī)療條件落后有關系，這有待于擴大研究范圍、延長隨訪時間進行深入的研究?！緟⒖嘉?/p>

20、獻】  1Sweredlow SH, Campo E，Harris NL, et al. WHO Classification of Tumours of Haematopoietic and Lymphoid Tissues M4th Edition, IARC Press, 2008: 214-217, 233-237.施姍姍，胡長路，余元勛,等. Bcl2IgH和IgH基因重排與非霍奇金淋巴瘤診斷和化療效果的相關性研究J.臨床腫瘤學雜志,2009 (1):55-58蔣會勇，李慧靈，胡海,等. 彌漫大B細胞淋巴瘤t(14;18)易位及bcl2基因擴增的檢測J. 中華病理學雜志，2007（2）：84-89.陳天明.現(xiàn)代病理診斷規(guī)范與操作技術M.2版.北京：中國科學文化出版社，2005:304-325Hans CP, Weisenburger DD, Greiner TC, et al. Confirmation of the moleular classification of diffuse large B cell lymp