多肽、蛋白質(zhì)藥物ppt課件

1、一、多肽藥物及其消費(fèi)工藝一、多肽藥物及其消費(fèi)工藝多肽類藥物多肽激素：垂體多肽激素、促皮質(zhì)激素、促黑素、多肽激素：垂體多肽激素、促皮質(zhì)激素、促黑素、脂肪水解素、催產(chǎn)素、加壓素脂肪水解素、催產(chǎn)素、加壓素甲狀腺激素：甲狀旁腺激素、降鈣素甲狀腺激素：甲狀旁腺激素、降鈣素胰島激素：胰高血糖素、胰解痙多胰島激素：胰高血糖素、胰解痙多胃腸道激素：胃泌素、腸血管活性素、抑胃肽胃腸道激素：胃泌素、腸血管活性素、抑胃肽胸腺激素：胸腺素、胸腺肽、胸腺血清因子胸腺激素：胸腺素、胸腺肽、胸腺血清因子含有多肽成分的其他生化藥物含有多肽成分的其他生化藥物骨寧、眼生素、血活素、氨肽素、蜂毒、蛇毒、骨寧、眼生素、血活素、氨肽素

2、、蜂毒、蛇毒、胚胎素、花粉提取物、心臟激素等胚胎素、花粉提取物、心臟激素等、多肽類藥物、多肽類藥物胸腺素的制備胸腺素的制備用途：原發(fā)性和繼發(fā)性免疫缺陷病，如反復(fù)上呼吸道感用途：原發(fā)性和繼發(fā)性免疫缺陷病，如反復(fù)上呼吸道感染染;本身免疫性疾病，如腎病、紅斑狼瘡、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)本身免疫性疾病，如腎病、紅斑狼瘡、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、重癥肌無力炎、重癥肌無力;變態(tài)反響性疾病，如支氣管哮喘；細(xì)變態(tài)反響性疾病，如支氣管哮喘；細(xì)胞免疫功能減退的中老年人和老年人疾病，并可抗衰老；胞免疫功能減退的中老年人和老年人疾病，并可抗衰老；腫瘤的輔助治療。腫瘤的輔助治療。黃?？麖?qiáng)心肽黃海葵強(qiáng)心肽AAPA的制的制備備海洋生物中有許多含

3、有多肽或蛋白質(zhì)毒海洋生物中有許多含有多肽或蛋白質(zhì)毒素往往具有特殊的藥物功能。如?？舅赝哂刑厥獾乃幬锕δ堋Ｈ绾？舅氐鹊膹?qiáng)心功能，棘皮、軟體等動物的素等的強(qiáng)心功能，棘皮、軟體等動物的抗癌肽的抗癌功能等。抗癌肽的抗癌功能等。 黃海葵強(qiáng)心肽就是其中一種。人們已黃海葵強(qiáng)心肽就是其中一種。人們已從黃海葵中分別出具有強(qiáng)心作用的黃海從黃?？蟹謩e出具有強(qiáng)心作用的黃海葵強(qiáng)心肽葵強(qiáng)心肽A、B、C。 APA由由49個(gè)氨基個(gè)氨基酸組成，酸組成，Mr為為5500，屬堿性多肽。，屬堿性多肽。、黃?？舅氐闹苽涠⒌鞍姿幬锛捌湎M(fèi)工藝二、蛋白藥物及其消費(fèi)工藝蛋白質(zhì)藥物蛋白質(zhì)藥物蛋白質(zhì)激素：垂體蛋白質(zhì)激素生長素、催乳

4、激素、促甲狀腺激素、蛋白質(zhì)激素：垂體蛋白質(zhì)激素生長素、催乳激素、促甲狀腺激素、促卵泡激素、促性腺激素人絨毛膜促性腺激素、血清性促性腺促卵泡激素、促性腺激素人絨毛膜促性腺激素、血清性促性腺激素、胰島素及其他蛋白質(zhì)激素胰島素、胰抗脂肝素、松弛素激素、胰島素及其他蛋白質(zhì)激素胰島素、胰抗脂肝素、松弛素血漿蛋白質(zhì)：白蛋白、纖維蛋白溶酶原、血漿纖維結(jié)合蛋白、多種血漿蛋白質(zhì)：白蛋白、纖維蛋白溶酶原、血漿纖維結(jié)合蛋白、多種免疫球蛋白、纖維蛋白原、抗凝血酶免疫球蛋白、纖維蛋白原、抗凝血酶III、凝血因子、凝血因子VIII和和IV。蛋白質(zhì)類細(xì)胞生長調(diào)理因子：干擾素蛋白質(zhì)類細(xì)胞生長調(diào)理因子：干擾素(IFN)、白細(xì)胞

5、介素、白細(xì)胞介素(IL)、神經(jīng)、神經(jīng)生長因子、肝細(xì)胞生長因子、血小板生長的生長因子、腫瘤壞死因生長因子、肝細(xì)胞生長因子、血小板生長的生長因子、腫瘤壞死因子、集落刺激因子、組織纖溶酶原激活因子子、集落刺激因子、組織纖溶酶原激活因子tPA、促紅細(xì)胞生、促紅細(xì)胞生成素成素(EPO)等等膠原蛋白：明膠、阿膠膠原蛋白：明膠、阿膠蛋白酶抑制劑：蛋白酶抑制劑：蛋白質(zhì)藥物白介素蛋白質(zhì)藥物白介素2的動物細(xì)胞制備的動物細(xì)胞制備作用：白細(xì)胞介素作用：白細(xì)胞介素2IL2能誘導(dǎo)能誘導(dǎo)T細(xì)胞分泌細(xì)胞分泌干擾素，加強(qiáng)殺傷細(xì)胞的活干擾素，加強(qiáng)殺傷細(xì)胞的活性，在調(diào)整免疫功能上具有重要作用。臨性，在調(diào)整免疫功能上具有重要作用。臨

6、床用于治療一些免疫性疾病，如艾滋病、床用于治療一些免疫性疾病，如艾滋病、原發(fā)性免疫缺損、老年性免疫功能不全以原發(fā)性免疫缺損、老年性免疫功能不全以及癌癥的綜合治療。對創(chuàng)傷修復(fù)也有一定及癌癥的綜合治療。對創(chuàng)傷修復(fù)也有一定的作用。的作用。工藝道路工藝過程工藝過程誘生用雞瘟病毒刺激人外周血白細(xì)胞，誘生用雞瘟病毒刺激人外周血白細(xì)胞，37培育。培育。病毒滅活和固液分別病毒滅活和固液分別 用用 6mol/L HCI調(diào)理調(diào)理 pH2.02.5，再用再用 6molL NaOH調(diào)理調(diào)理pH7.27.4，離心除去變性雜，離心除去變性雜蛋白。蛋白。硫酸按分級沉淀取上述離心后的培育上清液，加飽硫酸按分級沉淀取上述離心后

7、的培育上清液，加飽和硫酸按至和硫酸按至35飽和度，飽和度，24h離心棄去沉淀。上清液補(bǔ)離心棄去沉淀。上清液補(bǔ)加固體硫酸按至加固體硫酸按至 85飽和度，飽和度， 4靜置靜置 24h離心，搜集離心，搜集沉淀。沉淀。除鹽將沉淀溶于除鹽將沉淀溶于pH6.5、10mmolL PBS中內(nèi)含中內(nèi)含 2正丁醇和正丁醇和 0.15NaCI。透析。透析 24h改換改換 5次透析外次透析外液。液。藍(lán)色瓊脂糖層析將上述透析內(nèi)液經(jīng)過藍(lán)色瓊脂糖層析將上述透析內(nèi)液經(jīng)過 Sepharose 4B層析柱，用層析柱，用 200mlPBS去不吸附的蛋白，再用含去不吸附的蛋白，再用含 0.4mol/L NaCI的的 PBS洗滌親和柱

8、，最后用含洗滌親和柱，最后用含 1.0molLPBS解吸解吸IL2活性組分?；钚越M分。凝膠層析將解吸的凝膠層析將解吸的 IL2活性組分經(jīng)活性組分經(jīng) PEGMW6000濃縮，再上濃縮，再上 ACA44UItrogel層析柱。柱層析柱。柱用含用含 0.1PEG、 2正丁醇和正丁醇和 pH7.6的的 0.2molL甘甘氨酸的氨酸的Tris.HCI洗脫，得洗脫，得 IL2。 轉(zhuǎn)基因白細(xì)胞介素制備重組酵母基因表達(dá)重組酵母基因表達(dá)轉(zhuǎn)化小鼠細(xì)胞挑選單克隆抗體表達(dá)轉(zhuǎn)化小鼠細(xì)胞挑選單克隆抗體表達(dá)重組大腸桿菌表達(dá)重組大腸桿菌表達(dá)細(xì)胞分別細(xì)胞破碎細(xì)胞分別細(xì)胞破碎 包含體包含體 溶解溶解- -分別分別- -脫鹽脫鹽- -濃縮濃縮白細(xì)胞介素大腸桿菌表達(dá)的純化方法白細(xì)胞介素大腸桿菌表達(dá)的純化方法基因重組大腸桿菌于基因重組大腸桿菌于LB培育基培育基(含氨芐青霉素含氨芐青霉素)37oC震蕩培育過夜震蕩培育過夜 次日按次日按1:100比例稀釋繼續(xù)擴(kuò)增至比例稀釋繼續(xù)擴(kuò)增至OD600=0.4左右左右加誘導(dǎo)劑加誘導(dǎo)劑IPTG,(異丙基異丙基b-d-硫代半乳糖苷硫代半乳糖苷)至終濃度至終濃度2mmol/L,在在30oC下誘導(dǎo)下誘導(dǎo)6小時(shí)小時(shí),搜集表達(dá)搜集表達(dá)IL-18菌體菌體.搜集菌體加細(xì)胞裂解液搜集菌體加細(xì)胞裂解液,用超聲波破碎菌體