淺論Smad4和轉(zhuǎn)化生長因子β受體Ⅱ在宮頸腺癌中的表達(dá)及意義

1、淺論Smad4和轉(zhuǎn)化生長因子受體在宮頸腺癌中的表達(dá)及意義         【摘要】  目的： 研究Smad4和轉(zhuǎn)化生長因子受體(TR)在宮頸腺癌中的表達(dá)及其與臨床病理的相關(guān)性，探討其作為宮頸腺癌預(yù)后判斷分子指標(biāo)的可能性。方法： 免疫組織化學(xué)鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連接法(SP法)檢測36例宮頸腺癌組織中Smad4和TR的表達(dá)，以 20例正常宮頸腺上皮組織作為對照，對Smad4和TR的表達(dá)與宮頸腺癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系進(jìn)行分析。結(jié)果： Smad4和TR在宮頸腺癌中的表達(dá)顯著低于正常宮頸腺上皮組織(P0.

2、05)，在低分化癌中的表達(dá)率顯著低于中高分化癌(P0.05)，在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組顯著低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(P0.05)。Smad4和TR的表達(dá)相關(guān)。結(jié)論： Smad4和TR的表達(dá)缺失與宮頸腺癌的發(fā)生、分化程度及轉(zhuǎn)移有關(guān)。Smad4和T的低表達(dá)可能作為判斷宮頸腺癌惡性程度和轉(zhuǎn)移的標(biāo)記，Smad4和TR聯(lián)合檢測能作為一種有效的腫瘤標(biāo)記物用于宮頸腺癌患者預(yù)后的評估。 【關(guān)鍵詞】  Smad4; 轉(zhuǎn)化生長因子受體; 宮頸腺癌; 診斷Abstract Objective: To study the correlation of the expression of Smad4 and TGF rec

3、eptor ( TR) with clinical pathology in cervical adenocarcinoma, and to explore its possibility as a marker to decide the prognosis of cervical adenocarcinoma.Methods： To detect the expression of Smad4 and TRin 36 cases of cervical adenocarcinoma and 20 cases of normal cervical glandular epithelium t

4、issue and to investigate the relation between the expression of Smad4 with TRand clinical pathology. Results： The expression of Smad4 and TRin cervical adenocarcinoma is significantly lower than normal cervical glandular epithelium tissue(P0.05).The expression of Smad4 and TRin cervical adenocarcino

5、ma with poor differentiated was significantly lower than that of moderate or well differentiated(P0.05).The expression of Smad4 and TRis significantly lower in cervical adenocarcinoma with metastatic lymph nodes than in the tissue with no metastatic lymph nodes(P0.05).The expression of Smad4 and TR

6、was significantly related with clinical stage(P0.05). Conclusion： The deleted expression of Smad4 and TR was associated with development, advanced, differentiated and metastasis in cervical adenocarcinoma.Smad4 and TRmay be a marker for differentiated and metastasis of cervical adenocarcinoma.To det

7、ect Smad4 and TRmay be a useful tumor marker to decide the prognosis of cervical adenocarcinoma.Key words Smad4; TGF receptor ; cervical adenocarcinoma; prognosis宮頸腺癌近年來在宮頸癌中所占的比例明顯增高1，宮頸腺癌較宮頸鱗癌更易于發(fā)生轉(zhuǎn)移，預(yù)后差。其主要死亡原因是術(shù)后復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。臨床尚無可靠方法做到早期預(yù)測。因此,對宮頸腺癌復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移等預(yù)后指標(biāo)的生物學(xué)標(biāo)志物的研究有非常重要的意義。轉(zhuǎn)化生長因子型受體(TR)可直接結(jié)合轉(zhuǎn)化生長因子(T

8、GF)參與細(xì)胞增殖分化、血管形成、腫瘤發(fā)生等多種生物學(xué)過程。Smad4是TGF信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中重要的調(diào)控因子，活化的TR與Smad結(jié)合成寡聚物，將TGF的信號傳遞至細(xì)胞核內(nèi)，調(diào)節(jié)靶基因的轉(zhuǎn)錄并誘導(dǎo)下游基因的表達(dá)。本研究用免疫組化法檢測Smad4和TR在宮頸腺癌組織中的表達(dá),探討Smad4和TR在宮頸腺癌組織中表達(dá)情況及其相關(guān)性，結(jié)合臨床及病理資料探討其在評價宮頸腺癌預(yù)后中的意義。1 對象與方法    1.1 對 象收集2006年1月至2008年12月共3年間在鎮(zhèn)江地區(qū)各二級及以上醫(yī)院收治的宮頸腺癌患者術(shù)后存檔蠟塊共36例，選取同期正常宮頸腺上皮組織20例作為對照。腫

9、瘤組織學(xué)類型、分化程度由兩位病理專家根據(jù)HE染色判斷。兩組間年齡構(gòu)成比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。所有病例術(shù)前均未行放、化療。根據(jù)WHO標(biāo)準(zhǔn)按分化程度分為高、中分化癌20例，未、低分化癌16例。23例手術(shù)標(biāo)本有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,13例無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。臨床分期采用國際婦產(chǎn)科協(xié)會(FIGO)標(biāo)準(zhǔn)，其中期14例，期22例。1.2 試劑與方法濃縮型Smad4和TR單克隆抗體、SP超敏試劑盒及DAB酶底物顯色試劑盒均購自北京中山生物技術(shù)有限公司。采用SP免疫組化法，方法按試劑盒說明進(jìn)行。Smad4按照150稀釋，TR按照1100稀釋。石蠟組織23 m厚度切片，高溫高壓抗原修復(fù)，檸檬酸修復(fù)，一抗4冰箱過夜，孵

10、育約16 h左右，用試劑公司提供的陽性片做陽性對照，PBS代替一抗做陰性對照，蘇木素復(fù)染。1.3 結(jié)果判定在雙盲法下進(jìn)行結(jié)果判定，Smad4蛋白表達(dá)定位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi),也可出現(xiàn)于胞核內(nèi)，TR蛋白表達(dá)定位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，出現(xiàn)淡黃色、棕黃色、棕褐色顆粒為陽性表達(dá)。每張切片在高倍鏡下隨機選取5個視野，每個視野計數(shù)100個腫瘤細(xì)胞，著色強度分為無著色(-)為0分，淺黃色(+)為1分，黃色及棕黃色(+)為2分。陽性細(xì)胞數(shù)10%為0分， 10%50%為1分，50%為2分。兩項得分相加結(jié)果2分記為陽性。1.4 統(tǒng)計方法運用SPSS11.5軟件,采用2檢驗、四格表確切概率法進(jìn)行統(tǒng)計分析。取雙側(cè)=0.05為檢驗水準(zhǔn)。2

11、 結(jié) 果2.1 正常宮頸腺上皮組織、宮頸腺癌中Smad4與TR的表達(dá)見表1。Smad4和TR在正常宮頸腺上皮組織中的表達(dá)率高于宮頸腺癌組織，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(2=12.59, P0.05, 2=15.19, P0.05)。表1 正常宮頸腺上皮組織、宮頸腺癌中Smad4與TR的表達(dá)2.2 宮頸腺癌中Smad4,TR的表達(dá)與臨床病理學(xué)參數(shù)的關(guān)系見表2。Smad4和TR的陽性表達(dá)率在高、中分化癌組高于未、低分化癌組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。Smad4 和TR陽性表達(dá)率在無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組陽性率高于有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。Smad4 和TR在期+期組中陽性率高于在期+期組，

12、差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。2.3 宮頸腺癌中Smad4,TR表達(dá)的關(guān)系見表3。27例Smad4蛋白表達(dá)陽性標(biāo)本TR陽性24例，29例Smad4蛋白表達(dá)陰性標(biāo)本TR陰性22例，兩者明顯相關(guān)(2=23.71, P0.01)。表2 宮頸腺癌中Smad4,TR的表達(dá)與臨床病理學(xué)參數(shù)的關(guān)系表3 正常宮頸腺上皮組織、宮頸腺癌中Smad4和TR表達(dá)的關(guān)系         3 討 論Smad4基因是位于18號染色體長臂上，編碼一種552個氨基酸的蛋白，Smad4蛋白是TGF信號轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)中的關(guān)鍵因子。近年來研究證實Smad4與

13、惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展、浸潤、轉(zhuǎn)移有密切關(guān)系。TGF型受體TR是一種存在于細(xì)胞膜表面的跨膜糖蛋白，相對分子質(zhì)量75 ku，屬于絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶家族，包括配體結(jié)合部、跨膜區(qū)域、蛋白激酶部。TGF的多種生物學(xué)功能都由其相應(yīng)的受體介導(dǎo)，磷酸化后被激活的受體可進(jìn)一步激活細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的Smads 蛋白，調(diào)節(jié)靶基因的轉(zhuǎn)錄，控制細(xì)胞生長、分化和凋亡, 其中Smad4是其胞內(nèi)重要傳導(dǎo)成分。這一通路中的任一環(huán)節(jié)異常都將導(dǎo)致細(xì)胞異常增殖，而型受體和Smad4是TGF信號傳導(dǎo)系統(tǒng)中最為關(guān)鍵的部分。研究表明，在多種腫瘤都有TR和(或)Smad4基因缺失，點突變或者功能性滅活。有研究證實，Smad4在胰腺癌中缺失和突變率

14、為50%，并存在TGF抵抗。Ijichi等對11種結(jié)腸癌細(xì)胞系TGFSmad通路研究發(fā)現(xiàn)，91%的細(xì)胞系存在TR和Smad4的失活導(dǎo)致該通路的受損。Xie等對瑞典600多份結(jié)腸癌標(biāo)本研究提示Smads基因的不表達(dá)與腫瘤進(jìn)展、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和生存時間較短有關(guān)。Kim等研究表明，在胃癌中Smad4陽性表達(dá)者腫瘤多數(shù)分化好、生長速度慢、侵襲和轉(zhuǎn)移能力弱，預(yù)后較好。研究認(rèn)為Smad4的失活一般發(fā)生在腫瘤進(jìn)展的后期，屬于晚期分子事件。Zhou等10研究了64例子宮內(nèi)膜癌的染色體缺失圖譜，發(fā)現(xiàn)20例存在第18染色體的雜合性缺失，14例存在Smad4基因片段的純合性缺失，6例發(fā)生Smad4的轉(zhuǎn)錄異常。而在國內(nèi)未

15、見有宮頸腺癌中Smad4和TR表達(dá)情況的報道。我們發(fā)現(xiàn)Smad4 和TR在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的宮頸腺癌中的陽性率明顯低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組, 在臨床分期期的宮頸腺癌中的陽性率明顯低于期,提示Smad4和 TR表達(dá)缺失對促進(jìn)宮頸腺癌細(xì)胞侵襲及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移具有重要作用。作用機制可能為TR及Smad4的表達(dá)受到阻遏，使得TGF信號傳導(dǎo)系統(tǒng)在多個部位阻斷，無法介導(dǎo)TGF的生長抑制效應(yīng)，從而促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展。在本研究中, Smad4和 TR在宮頸腺癌中的表達(dá)率均明顯低于正常宮頸腺上皮組織，兩者表達(dá)明顯相關(guān)，且其表達(dá)情況與宮頸腺癌分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期有關(guān)。因此, Smad4和 TR的表達(dá)缺失可能與宮頸腺癌

16、的惡性程度及轉(zhuǎn)移潛能有關(guān)。綜上所述，Smad4和 TR聯(lián)合檢測能作為一種有效的腫瘤標(biāo)記物用于宮頸腺癌患者預(yù)后的評估?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】  1 Smith HO, Tiffany MF, Qualls CR, et al.The rising incidence of adenocarcinoma relative to squamous cell carcinoma of the uterine cervix in the United Statesa 24year populationbased studyJ.Gynecol Oncol,2000,78(2):97-105. Eifel

17、PJ, Morris M, Oswald MJ, et al.Adenocarcinoma of the uterine cervix .Prognosis and patter of failure in 367 casesJ.Cancer,1990,65(11):2507-2514. Zhu CQ,Blackhall FH,Pintilie M,et al.Skp2 gene copynumber aberrations are common in nonsmall cell lungcarcinoma,and its overexpression in tumors with rasmu

18、tation is a poor prognostic markerJ.Clin Cancer Res,2004,10(6):1984-1991. Myatt N, Aristodemou P, Neale MH, et al.Abnormalities of the transforming growth factorbeta pathway in ocular melanomaJ.J Pathol, 2000,192(4):511-518. Hahn SA, Schutte M, Hoque A T,et al.DPC4, a candidate tumor suppressor gene

19、 at human chromosome 18q21.1J.Science,1996, 271(5247): 350-353. Inamura T, Kanai F, Kawakami T,et al.Proteomic analysis of the TGFbeta signaling pathway in pancreatic carcinoma cells using stable RNA interference to silence Smad4 expressionJ.Biochem Biophys Res Commun, 2004, 318(1): 289-296. Ijichi H, Ikenoue T, Kato N,e