消化道腫瘤免疫組化臨床研究的申請分享

1、真誠為您提供優(yōu)質(zhì)參考資料，若有不當之處，請指正。消化道腫瘤免疫組化臨床研究的申請 隨著腫瘤病人的不斷增加，擺在我們腫瘤?？漆t(yī)師面前的責任越來越重大，我們腹外（2）科,病理科及檢驗科聯(lián)合開展消化道腫瘤免疫組化臨床研究，希望對病人的預(yù)后及治療起到指導(dǎo)作用。 在臨床工作中，我們診治了數(shù)以百計的胃腸道腫瘤患者，我們發(fā)現(xiàn)，即便是同樣期別，同種病理類型患者，其預(yù)后也有所不同。免疫組化逐步走入消化道腫瘤醫(yī)生的視線。我們期望找到一些免疫組化指標，如同cerb-b2指導(dǎo)乳腺癌的預(yù)后和治療一樣，能夠指導(dǎo)消化道腫瘤病人的預(yù)后和治療。這項工作國內(nèi)外各大醫(yī)院均在臨床研究中，還未得出明確結(jié)論。在眾多免疫組化指標中，我們篩

2、選了以下幾種作為我們研究對象，如，EGFR（表皮生長因子受體），CD44V6，Ki-67，VEGF（血管內(nèi)皮細胞生長因子），MMP-9，Cath-D，生長激素異常反應(yīng)(PR)，P-gp ，GST-，nm23。由于此項研究周期比較長，而且費用較高，完全由病人自行承擔，恐難進行，故懇請院領(lǐng)導(dǎo)給予幫助與支持。附：1.EGFR（表皮生長因子受體） 是細胞信號傳導(dǎo)系統(tǒng)的，現(xiàn)已在許多腫瘤中發(fā)現(xiàn)表皮生長因子表達異常，且與腫瘤轉(zhuǎn)移和病人預(yù)后有密切關(guān)系。EGFR在癌組織中的總的陽性率為56.4。在彌漫型胃癌中的陽性率為68（低分化腺癌66.7，印介細胞癌81.8），腸型胃癌中為32.2（管狀腺癌31.3，黏液腺

3、癌33.3）。淋巴結(jié)（）為71.1，（）為42.5。粘膜及粘膜下15.4，肌層56.0，漿膜及漿膜外70.0。臨床意義彌漫型胃癌中EGFR的陽性率比腸型胃癌高，分化差的印介細胞癌或低分化腺癌的陽性率也比分化好的管狀腺癌高，統(tǒng)計學(xué)處理均有顯著性差異，提示胃癌細胞分化程度越低，EGFR的陽性率越高。EGFR的表達與胃癌的分期、分化程度、浸潤深度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有相關(guān)性，EGFR陽性的腫瘤可能有更強的分裂增殖活性及侵襲性，用免疫組化方法檢測腫瘤中的EGFR的表達，可作為胃癌的生物學(xué)惡性程度和判斷預(yù)后的一個有用指標。2.CD44V6 淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)是影響胃癌患者預(yù)后的主要因素之一，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是一個復(fù)雜的

4、過程。CD44V6可參與癌細胞與基質(zhì)的黏附作用及淋巴細胞歸巢，從而有利與癌細胞的擴散與轉(zhuǎn)移。CD44V6廣泛分布于細胞表面的跨膜糖蛋白，作為細胞基質(zhì)透明質(zhì)酸受體，參與細胞膜與基質(zhì)的黏附作用及淋巴細胞歸巢，從而促進癌細胞的擴散與轉(zhuǎn)移。研究表明，CD44V6與人類惡性腫瘤的發(fā)生、侵襲與轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。在腫瘤CD44V6表達陽性的病人中，其胃周淋巴結(jié)陽性率為81.1，而表達陰性者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性率為52.2。提示胃癌細胞在異常分化中，獲得CD44V6陽性的同時，也獲得高轉(zhuǎn)移的能力。檢測蛋白表達對判斷胃癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移潛能和預(yù)后、提供胃癌新的治療靶點有重要意義。3.Ki-67是一種新近發(fā)現(xiàn)的重要的反映腫

5、瘤增殖活性的蛋白，與腫瘤的增殖、浸潤、轉(zhuǎn)移潛能和預(yù)后密切相關(guān)。Ki-67是與增殖細胞核抗原（PCNA）相結(jié)合的單抗，而PCNA的表達調(diào)控著細胞增殖周期，故可利用Ki-67單抗來反映細胞增殖的活性。經(jīng)對胃癌病人的研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤細胞的增殖活性與腫瘤分級呈正相關(guān)，與預(yù)后呈負相關(guān)；進展期胃癌組織中的Ki-67單抗表達量較早期癌高，與遠隔臟器轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)。同時分化越差、臨床分期越晚且有合并轉(zhuǎn)移，Ki-67表達陽性率越高，提示Ki-67與分化程度、臨床分期有關(guān)。研究結(jié)果還提示Ki-67表達于與原發(fā)灶部位，腫瘤大小無關(guān)，與術(shù)后生存期呈負相關(guān)。4.VEGF（血管內(nèi)皮細胞生長因子）腫瘤生長依賴于血管生成，豐富的

6、血管可持續(xù)不斷地向腫瘤提供營養(yǎng)和排除代謝產(chǎn)物,為其生長提供物質(zhì)條件。腫瘤組織誘導(dǎo)的血管生成是一復(fù)雜的由多因素調(diào)節(jié)的過程，血管生成因子通過各種機制降解血管基底膜和周圍的細胞外基質(zhì),促進內(nèi)皮細胞分裂、游走和增殖,誘導(dǎo)宿主毛細血管新生并長入腫瘤組織。我們應(yīng)用免疫組化和原位分子雜交技術(shù)檢測人胃癌組織中VEGF表達和微血管密度(MVD)，分析VEGF與MVD,及其與胃癌各臨床病理指標和預(yù)后的關(guān)系。附表 VEGF蛋白表達和MVD與胃癌各臨床病理指標間關(guān)系指標例數(shù)VEGFMVD陽性例數(shù)(%)P值±s(個)P值組織學(xué)類型83(37.5)40.8±13.5188(44.4)0.0538.5&

7、#177;16.10.052110(47.6)43.1±14.494(44.4)47.1±15.1浸潤深度M、Sm72(28.6)28.4±8.1Pm、SS225(22.7)0.0136.9±10.70.01Se、Sei2718(66.7)49.6±15.1生長方式膨脹型2111(52.4)41.2±13.9浸潤型3514(40.0)0.0542.5±16.00.05淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有2717(63.0)51.5±13.4無298(27.6)0.0533.4±10.60.01遠處轉(zhuǎn)移有97(77.8)56.4&

8、#177;7.2無4718(38.2)0.0539.1±14.40.05VEGF是一高度特異的血管內(nèi)皮細胞有絲分裂素,具有雙重功能:(1)增加微血管通透性,促進血漿纖維蛋白外滲,為血管形成過程中多種細胞遷移提供一個纖維網(wǎng)絡(luò);(2)通過與內(nèi)皮細胞上兩個特殊受體flt和flk/KDR作用,直接刺激內(nèi)皮細胞增殖,并產(chǎn)生纖維蛋白溶酶原激活劑(組織型、尿激酶型)和膠原酶等,這不僅可促進內(nèi)皮細胞移動,有利于血管生成，而且還有利于腫瘤細胞脫落進入血管或向鄰近纖維蛋白和結(jié)締組織基質(zhì)擴散,為腫瘤的浸潤轉(zhuǎn)移創(chuàng)造條件。本研究中胃癌組織VEGF陽性率為44.6%,陽性表達者平均MVD值明顯高于陰性表達者,與

9、最近報道的胃癌組織中VEGF表達情況相近。而且癌腫浸潤前緣VEGF蛋白表達較其它部位明顯,微血管密度也較高,血管生成活躍,說明VEGF蛋白表達與血管生成部位的一致性。豐富的血管不僅增加了腫瘤細胞進入循環(huán)的機率,而且腫瘤細胞還可以侵入鄰近與毛細血管伴行的淋巴管,或通過淋巴靜脈連接進入淋巴管,促進淋巴轉(zhuǎn)移。因此，在眾多反映胃癌生物學(xué)行為的指標中,除組織學(xué)分型和生長方式外,VEGF表達和MVD與胃癌浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠處轉(zhuǎn)移均有關(guān)系。VEGF mRNA表達與漿膜浸潤、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移也密切相關(guān)?？梢?VEGF在促進胃癌血管生成的同時也促進了胃癌的浸潤轉(zhuǎn)移。關(guān)于預(yù)后方面,資料顯示VEGF陽性或MVD43

10、的胃癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)率較高，預(yù)后明顯差于VEGF陰性或MVD43者,進一步證實了VEGF和血管生成在胃癌發(fā)展中的作用。5. MMP-9是MMPs家族中分子量最大的一個酶,其最主要的功能是降解細胞外基質(zhì)中的IV、V型膠原和明膠。實體腫瘤的生長、浸潤和轉(zhuǎn)移必須依賴腫瘤血管生成,微血管密度(MVD)是反映惡性腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移等生物學(xué)行為的一個重要指標。研究表明, MMP-9異常表達與多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有關(guān),但確切機制尚有待于進一步明確,促進血管生成可能是其機制之一。6.Cath-D是一種蛋白水解酶，能溶解ECM（腫瘤細胞對細胞外間質(zhì)）、基底膜和結(jié)締組織。有研究表明Cath-D主要通過刺激細胞生長，溶解

11、ECM、基底膜和結(jié)締組織，為腫瘤浸潤、擴散、轉(zhuǎn)移創(chuàng)造條件。本實驗128例胃癌中105例(82.0)Cath-D陽性，Cath-D的陽性率隨著胃癌浸潤深度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移站次、TNM分期增加而升高，這提示腫瘤細胞浸潤淺時Cath-D蛋白呈陽性率低，浸潤程度加深后Cath-D的陽性率增加，其轉(zhuǎn)移率亦增強，這與國外文獻報道的結(jié)果一致。Cath-D陽性者五年生存率明顯低于Cath-D表達陰性者。由此可見，Cath-D有望成為胃癌轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)的檢測指標。附：MMP-9和Cath-D在胃癌細胞上的表達呈正相關(guān)，即MMP-9陽性率越高，Cath-D陽性率亦高，且MMP-9(-)Cath-D(-)組發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和漿

12、膜浸潤的機會顯著低于其他任何組，從而可以推測MMP-9與Cath-D在胃癌浸潤轉(zhuǎn)移過程中存在相互關(guān)聯(lián)、共同作用。故聯(lián)合檢測MMP-9和Cath-D，在判斷腫瘤生物學(xué)行為及預(yù)后方面有更大的意義。7. 用免疫組化方法檢測77例胃癌組織GST-的表達， GST-在胃癌組織中的陽性表達率為67.53%，他們的研究還發(fā)現(xiàn)，管狀腺癌、乳頭狀腺癌GST-的表達高于其他類型癌，這與臨床上胃管狀腺癌和乳頭狀腺癌對化療藥物易產(chǎn)生耐藥，而神經(jīng)內(nèi)分泌癌、印戒細胞癌等對化療較敏感的現(xiàn)象相符合。發(fā)現(xiàn)檢測胃癌GST-對化療具有指導(dǎo)意義。GST-高表達對順鉑、阿霉素、5-Fu、絲裂霉素等耐藥。臨床上可根據(jù)胃癌GST-表達情況

13、，有目的地選擇抗腫瘤藥物，以提高化療效果。8. 胃癌患者對于TRH會產(chǎn)生異常反應(yīng)，稱為生長激素異常反應(yīng)(PR)，研究發(fā)現(xiàn)此異常反應(yīng)在不同分期的胃癌中沒有明顯差別，但是PR()的胃癌患者復(fù)發(fā)率低于陽性的患者，提示PR可能是一個較好的胃癌預(yù)后指標。9. P-gp 用免疫組化方法檢測55例胃癌發(fā)現(xiàn)P-gp表達占87%（48/55），P-gp 表達程度越高則預(yù)后越差。P-gp在正常胃黏膜、異型增生及未經(jīng)化療的胃癌組織中均有表達，且表達強度依次增加。正常胃黏膜內(nèi)存在P-gp 的表達也說明人類本身存在MDR1基因表達，即自身具有抵抗藥物的特性，腫瘤細胞的形成只是增加了這種抗藥特性的表達。P-gp的表達強度

14、還與胃癌的浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期呈正相關(guān)，P-gp高表達，生存期短。從報道的大量文獻看，檢測P-gp有助于預(yù)測化療敏感性，對選擇合適的治療方案和實施有效的逆轉(zhuǎn)措施具有重要意義。在化療前進行P-gp的檢測，可以指導(dǎo)臨床用藥，以減少用藥的盲目性。P-gp所介導(dǎo)的MDR化療藥物主要為長春花堿、長春新堿和阿霉素，尤其對長春花堿的耐藥起決定性作用，因此認為P-gp陽性的胃癌患者選擇化療藥物時應(yīng)盡量避免使用脂性及生物堿類藥物，選用與P-gp關(guān)系不大的烷化劑和抗代謝類藥物。10. nm23 又稱為抗轉(zhuǎn)移癌基因，目前已被廣泛應(yīng)用于乳腺癌、非小細胞肺癌、胃癌、大腸癌、肝癌、喉癌等多種惡性腫瘤的檢測。幾乎所有的研究都表明，nm23蛋白高表達患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率相對較低，存活期相對較長。nm23表達與Lauren分型無關(guān)，而與臨床病理分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有顯著的相關(guān)性，nm23陰性表達者癌細胞淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率明顯大于陽性表達者，提示nm23陰性表達者，癌細胞淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移潛力較大，預(yù)后可能較差。實驗研究結(jié)果提示nm23抑制轉(zhuǎn)移的能力與生長