血清IL12p40和IL18在緩解復(fù)發(fā)型多發(fā)性硬化中的作用及相關(guān)分析(一)

1、血清IL12p40和IL18在緩解復(fù)發(fā)型多發(fā)性硬化中的作用及相關(guān)分析(一)    【摘要】 目的: 探討白細(xì)胞介素IL12p40、 IL18及干擾素（IFN）在緩解復(fù)發(fā)型多發(fā)性硬化（RRMS）發(fā)病中的作用。方法: 選取RRMS急性期患者24例, 對(duì)照組為非炎性神經(jīng)系統(tǒng)疾病(NIND)患者12例, 應(yīng)用ELISA法測(cè)定受試者血清中IL12p40、 IL18及IFN水平。結(jié)果: 與NIND組相比, RRMS組血清中IL18水平明顯升高, 而IL12p40明顯下降（P0.05）。血清IFN水平在兩組間無(wú)明顯差異, 而與IL18水平之間呈顯著正相關(guān)。結(jié)論: IL

2、18與IL12p40均參與了多發(fā)性硬化發(fā)病的免疫病機(jī)。 【關(guān)鍵詞】 緩解復(fù)發(fā)型多發(fā)性硬化; 血清; IL12p40; IL18多發(fā)性硬化(multiple sclerosis, MS)是一種中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎性脫髓鞘自身免疫性疾病, Th1型免疫反應(yīng)及IFN的合成是MS的主要特征, 由Th1型細(xì)胞和單核細(xì)胞產(chǎn)生的IFN、 IL12、 IL18等前炎癥因子在其發(fā)病機(jī)制中起關(guān)鍵作用1, 而IL18與IL12在刺激Th1細(xì)胞、 NK細(xì)胞增殖, 增強(qiáng)NK細(xì)胞的細(xì)胞毒作用, 誘導(dǎo)免疫效應(yīng)細(xì)胞產(chǎn)生IFN等方面, 具有協(xié)同作用。1 材料和方法1.1 材料 檢測(cè)IL12p40的ELISA試劑盒購(gòu)自美國(guó)RD 公司,

3、 IL18 ELISA試劑盒購(gòu)自德國(guó)Bender 公司, IFN ELISA試劑盒購(gòu)自深圳晶美公司。RRMS組24例, NIND組12例, 均排除其他自身免疫性疾病、 其他部位近期感染、 腫瘤等, 并于檢測(cè)前3個(gè)月內(nèi)未用過(guò)皮質(zhì)激素與免疫抑制劑。RRMS組均符合2001年McDonald診斷標(biāo)準(zhǔn)(病程超過(guò)1年, 發(fā)作2次或2次以上, 有2個(gè)或2個(gè)以上部位病變的客觀臨床依據(jù)), 均具有復(fù)發(fā)緩解的疾病過(guò)程, 于急性惡化(新癥狀出現(xiàn)或原有癥狀的明顯加重, 至少癥狀持續(xù)24 h以上)1周內(nèi)接受治療, 排除其他中樞神經(jīng)系統(tǒng)多發(fā)性病變的診斷。NIND組為對(duì)照組, 均為非炎性神經(jīng)系統(tǒng)疾患, 腦脊液生化, 常規(guī)

4、檢測(cè)正常。受試者血清樣本均在入院當(dāng)日或次晨于治療前留取, 并分管封存于-70冰箱待測(cè)。1.2 方法1.2.1 血清中IL12p40、 IL18和IFN水平的ELISA檢測(cè) 血清中IL12p40、 IL18和IFN水平的檢測(cè)采用雙抗體夾心ELISA法, 其中IL12p40與IFN的檢測(cè)原樣加樣, 而IL18水平的檢測(cè)需12稀釋, 并嚴(yán)格遵循試劑盒說(shuō)明書(shū)檢測(cè)。1.2.2 IL18及IL12p40的檢測(cè) (1)抗IL18 （或IL12p40）mAb已預(yù)先包被于酶標(biāo)板上。(2)在每一孔中加入相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)品、 樣本和對(duì)照, 孵育。(3)洗板后在所有孔中加入生物素化的抗IL18mAb, 在200 r/min

5、微板振蕩器上孵育, 洗板, 加辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的親和素入所有孔, 以上述方式孵育。IL12p40的檢測(cè)于此步驟與IL18不同, 在洗板后加入的是辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的鼠抗IL12p40多克隆抗體。(4)洗板后在所有孔中加入相應(yīng)的顯色劑, 避光孵育。(5)加入終止液, 在450 nm波長(zhǎng)處讀取A值。1.2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用x±s表示, 組間采用PEMS3.1軟件行兩樣本均數(shù)比較的t檢驗(yàn), 并對(duì)IL12p40和IL18進(jìn)行相關(guān)性分析。2 結(jié)果ELISA檢測(cè)結(jié)果顯示, 與NIND組相比, RRMS組血清中IL12p40水平明顯下降（P0.05）, IL18水平明顯升高（P0.05

6、）, 而IFN水平在NIND和RRMS兩組對(duì)比中無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05, 表1） 。RRMS組血清中IL12p40與IL18水平呈顯著負(fù)相關(guān)(r=-0.89, P0.01), 血清中IL18與IFN水平呈顯著正相關(guān)(r=0.89, P0.01)。表1 NIND與RRMS組血清中IL18、 IL12p40及IFN的水平3 討論IL12是由P40和P35這2個(gè)亞基組成的異二聚體的細(xì)胞因子P70, 具有生物活性的IL12p70是介導(dǎo)MS始發(fā)階段免疫反應(yīng)的重要因子, 可正向調(diào)節(jié)Th1型免疫反應(yīng)使病情加重, 同時(shí)可抑制Th2型細(xì)胞的增殖, 在MS發(fā)作期后的緩解期和繼發(fā)進(jìn)展期起關(guān)鍵作用。IL12

7、p40可通過(guò)與IL12p70競(jìng)爭(zhēng)高親和力的IL12受體而拮抗IL12p70的效應(yīng)2, 因此, P40基因啟動(dòng)子的活性及其調(diào)節(jié)機(jī)制對(duì)于IL12表達(dá)的調(diào)節(jié)更有重要意義。已有研究表明, 相比于活動(dòng)期MS, 穩(wěn)定期MS者IL12p40的表達(dá)升高3, 且未治療過(guò)的MS者其外周血單核細(xì)胞產(chǎn)生IL12p40重鏈的量明顯減少, IL12p40mRNA的表達(dá)及IL12p40蛋白水平也減少4, 而于治療后IL12p40血清水平升高5。在本研究中, RRMS組血清中IL12p40水平明顯減少, 而此時(shí)的RRMS患者正處于臨床活動(dòng)期, 因此有理由認(rèn)為在RRMS的活動(dòng)期, IL12p40水平的下調(diào), 使IL12p70的

8、生物學(xué)活性增強(qiáng), 通過(guò)促進(jìn)Th1型免疫反應(yīng), 發(fā)揮其在RRMS中的重要的免疫病理?yè)p傷機(jī)制, 治療后隨著IL12p40水平的增高, IL12 p70水平的下調(diào), RRMS進(jìn)入穩(wěn)定期。本研究還發(fā)現(xiàn), 隨著IL12p40水平的降低, 同時(shí)伴隨著IL18水平的明顯升高, 且IL12p40與IL18水平呈顯著負(fù)相關(guān), 表明了Th1表型的IL18在RRMS的急性期具有的重要的促發(fā)作用, 與IL12p40在其中的作用相反, 兩者之間具負(fù)相關(guān)性, 進(jìn)一步的關(guān)聯(lián)有待更深入的研究。因此在MS的發(fā)病機(jī)制中, 免疫系統(tǒng)的激活參與其中, IL12p40與 IL18的作用尤為重要, Th1和Th2兩種類(lèi)型的細(xì)胞因子相互之

9、間的作用與MS的發(fā)展和緩解密切相關(guān), 而IL12在其中作用關(guān)鍵, 被證明可能是為數(shù)不多的可始發(fā)并使MS的免疫反應(yīng)持續(xù)存在的細(xì)胞因子之一6。在MS的免疫病理?yè)p傷機(jī)制中, IFN的合成作用重要, 雖然在我們的研究中, RRMS組血清中IFN水平無(wú)明顯升高, 這不同于以往的研究, 但可見(jiàn)其與IL18水平之間呈顯著正相關(guān), 故不能否認(rèn)IFN在MS發(fā)病機(jī)制中調(diào)節(jié)CK的“級(jí)聯(lián)作用模式”及具有的增強(qiáng)免疫應(yīng)答的作用, 方法學(xué)上的障礙、 小樣本的數(shù)據(jù)分析、 細(xì)胞因子短的半衰期及細(xì)胞因子被檢測(cè)時(shí)不同的疾病階段均有可能導(dǎo)致此因子檢測(cè)結(jié)果陰性。【參考文獻(xiàn)】1 Matejuk A, Dwyer J, Ito A, et

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