DNA分子熒光探針

1、DNA 分子熒光探針陳秀英 彭孝軍 *(大連理工大學精細化工國家重點實驗室 大連 116012摘 要 介紹了各種 DNA 熒光探針的結構特征、熒光性質和與 DNA 的作用方 式,概述了 DNA 探針在生物分子分析方面的應用,并展望了 DNA 熒光探針的發(fā)展 趨勢和應用前景。關鍵詞 熒光探針 DNA 花菁染料 光穩(wěn)定性 量子點DNA Fluorescence ProbesChen Xiuying, Peng Xiaojun*(State Key Laboratory of Fine Chemicals, Dalian University of Technology, Dalian 116012

2、Abstract The structure characters, fluorescence properties and the functional ways of the various kinds of probes for DNA, including some applications on the detection of biomolecules, were reviewed, and the trends and prospect on the progress of DNA fluorescence probes were discussed too.Key words

3、Fluorescence probe, DNA, Cyanine, Photostability, Quantum dotDNA 是生命遺傳的重要物質, DNA 分子的定量分析和特異識別對基因組學、病毒學、分 子生物學等相關學科的發(fā)展具有十分重要的意義。由于生物分子自身的熒光較弱,目前多采用 熒光探針法檢測。熒光探針法較傳統(tǒng)的同位素檢測速度快,重復性好,用樣量少,無輻射,在 DNA 自動測序、抗體免疫分析、疾病診斷、抗癌藥物分析等方面已得到廣泛應用 1,2。 DNA 熒 光探針的靈敏度是影響檢測結果的重要因素,因而開發(fā)更靈敏的熒光探針,同時避免生物熒光 背景的干擾已成為目前研究的熱點。下面對

4、DNA 分子熒光探針的結構、功能及對 DNA 的分析 應用技術方面作一介紹。1 吖啶、菲啶類吖啶、菲啶類染料是應用最早的核酸熒光探針,它們通過嵌入或靜電吸引與 DNA 分子結 合,使 DNA 的熒光大大增強,是序列非特異的小分子探針。N(H3C 2N N(CH3 2HCl吖啶橙陳秀英 女, 28歲,博士生,現(xiàn)從事生物探針方面的研究。 *聯(lián)系人 E-mail: pengxj教育部重大項目和國家自然科學基金項目 (20128005, 20376010吖啶的基本結構為二苯并吡啶,在水溶液中呈弱堿性。 1940年,發(fā)現(xiàn)當吖啶橙與酸性物質 連接或存在于酸性物質中時,其特征光譜會發(fā)生一定的變化,至此一直被

5、用于生物體的染色。 吖啶橙可與 DNA 或 RNA 作用,與雙鏈 DNA(dsDNA結合后的熒光激發(fā) /發(fā)射波長分別為 502/538nm(水 3。為提高染料穩(wěn)定性及熒光強度,大量的吖啶衍生物被合成。 Pavel 等 4合成了 系列硫代吖啶,并用毛細管液相色譜對其定量純化分析。 Naofumi 5合成了 10-羧甲基吖啶酯, 其熒光及穩(wěn)定性都有很大提高,同時含有的羧基活性基可與生物分子共價結合。 Cao 等 6在吖 啶橙給體與番紅 T 受體之間建立了熒光共振能量轉移 (FRET定量測定 DNA 的方法,其中給體 的最大發(fā)射波長要與受體的吸收波長重疊,對小牛胸腺 DNA 的檢測限為 2.6

6、15;10-7mol ·L -1。該 法雖然靈敏度較高,但易受到牛血清白蛋白和人血清白蛋白的干擾。一些吖啶的絡合物,會對 小溝及 DNA 序列特異識別,有望成為 DNA 的轉錄抑制劑,控制核酸的表達 7,8。對位氨基取代 的喹吖啶化合物對三鏈 DNA 有高度的穩(wěn)定作用及選擇性,而且該類化合物表現(xiàn)出光活性,成 為 DNA 的光切斷劑 9。溴乙錠是應用較廣的菲啶類探針,溴乙錠可結合單鏈 (ssDNA、雙鏈及多鏈 DNA ,與核酸 結合后,熒光增強 2030倍,激發(fā)波長紅移 3040nm ,發(fā)射波長發(fā)生藍移, Stokes 位移較大。 雙嵌入劑乙錠均二聚物 (Ethidium homodi

7、mer, EthD 的嵌入部分使染料分子與 DNA 之間形成十H 2NNH 22CH 3BrH 2N22 32 22 32H 2N4Cl 溴乙錠乙錠均二聚物分牢固的親和力,連接常數(shù)約 1011(溴乙錠僅為 105 ,同時對三鏈 DNA 有高親和作用,因而更 利于應用到抗體、抗癌藥物的基因水平的研究。 Gherghi 等 10用汞滴電極研究了溴乙錠、吖啶橙 與 dsDNA 的作用,結果顯示它們的作用方式完全不同。利用 488nm 氬離子激光激發(fā)和共聚焦 熒光成像掃描系統(tǒng)對 EthD 與 DNA 的復合物檢測, 瓊脂糖凝膠電泳后, 檢測靈敏度可達 pg(10-12g 級 11。溴乙錠探針研究 ds

8、DNA 與樹枝狀大分子 (Dendrimer的相互作用 12,對于細胞修復、分 子識別等基因生命學有深遠意義。富含堿基 G 的 ssDNA 可以形成分子內(nèi)四鏈結構,溴乙錠的 一些衍生物可以增加 DNA 四鏈結構的穩(wěn)定性并作為研究四鏈結構的熒光探針 13。它們的一些 光譜性質見表 13,14,15。2 菁類染料2.1 TOTO 類吖啶橙、溴乙錠類染料雖然與核酸結合穩(wěn)定,但未結合的染料自身的熒光會造成高的熒光 背景, 干擾檢測, 同時溴乙錠具有很大毒性。 TOTO 和 YOYO 是由 Glazer 等開發(fā)的一類對 dsDNA 具有高度親和力的不對稱菁染料 16,17。染料在溶液中無熒光,降低了檢測

9、過程中的熒光背景干 擾。與 dsDNA 結合后發(fā)生強烈的熒光,熒光增強約 1000倍,染料分子與 DNA 的堿基對最大 比例可達 1/4,在瓊脂糖凝膠和丙烯酰胺凝膠電泳中穩(wěn)定。它們分別由單體噻唑橙 TO 和噁唑黃 YO 通過一個多亞甲基胺柔性鏈連接成二聚體。 YOYO 是 TOTO 的類似物,只是其中用苯并噁唑替換了苯并噻唑。 改變多亞甲基鏈兩端的染料分子, 可以得到不同的異二聚體 TOTAB 、 TOTIN 等。該類染料還有 POPO 、 BOBO 以及不對稱單亞甲基菁染料 PO-PRO 、 BO-PRO 、 TO-PRO 、 YO-PRO 等,共軛鏈碳數(shù)增加,吸收及發(fā)射波長產(chǎn)生紅移。 Ry

10、e 等認為 ssDNA-TOTO 復合物穩(wěn) 定性及光譜性質的變化在于 TOTO 頭部基團與單鏈堿基之間的堆積作用和鏈上兩個陽離子正電 荷與 DNA 骨架上的負電荷之間的庫侖力共同作用的結果 18。 TOTO 可高選擇性地用于 dsDNA 的非序列特異性的檢測,它對所有的 dsDNA 表現(xiàn)出極高的親和作用,但更易嵌入 dsDNA 的 (5'-CTAG-3' 2位,大約是 100倍的選擇性,其次是 (5'-CTGA-3'2位,大約 50倍的選擇性 19。 Jason 等 20用溶液粘度測定法和原子力顯微鏡解釋了 TOTO 與 DNA 的雙嵌入作用。MeSO 4n4I

11、 4IY=O, YO n =0,Y=S, TOTO; n =0,Y=O, YOYO TOTIN Y=S, TO n =1,Y=S, TOTABMeSO 4 4I 3 3 nY=O, PO Y=S, BOBO n =0, Y=O, PO-PRO-1; n =0, Y=S, BO-PRO-1Y=S, BO Y=O, POPO n =1, Y=O, PO-PRO-2; n =1, Y=S, BO-PRO-2與 DNA 的高度嵌合使這類染料熒光極大增強,廣泛用于 DNA 的染色。利用激光激發(fā)共聚 焦熒光凝膠掃描檢測系統(tǒng), 瓊脂糖凝膠電泳, TOTO 及 YOYO 與 dsDNA 復合物的檢測限是 4p

12、g , 較傳統(tǒng)的溴乙錠染色用量低 500倍 21。 Zhu 等 22利用毛細管電泳分離 DNA 碎片, TOTO 染色后 靈敏度可達到每區(qū)帶 24amol(10-18mol 堿基對。 Stephan 等以共聚焦掃描熒光檢測的方法,對 TOTO 染色過的微量 DNA 碎片尺寸定量分析,不同長度的 DNA 碎片熒光強度不同,可檢測到 長度為 214kbp(bp,指堿基對 的碎片,不確定度為 7%14%。該法采用玻璃覆蓋的載片,表面涂有廉價的聚賴氨酸等涂層,具有很好的應用前景 23。 YOYO-1可以作為新的 DNA 縮合作 用探針,弱酸性 (pH5.7條件下, YOYO 嵌入的單個 DNA 分子

13、(48.5kbp 被破壞成直徑為 100 150nm 的環(huán)狀結構,用光捕捉可觀測到單個與縮合的 DNA 分子之間的構象轉化,達到 150ms 的時間分辨 24。 Claire 等 25發(fā)現(xiàn),在 DNA 存在時 YO 和 YOYO 會產(chǎn)生光漂白,其原因主要在 于氧化的堿基 8-氧代 -7,8-二羥基脫氧鳥嘌呤能使嵌入的 YOYO 熒光猝滅。TOTAB 、 TOTIN 、噻唑橙和溴乙錠異二聚物 TOED1、 TOED2、熒光素和溴乙錠異二聚物 FED 等可用于研究在給體與受體之間的能量轉移。與 dsDNA 結合后,給體熒光團發(fā)射的熒光 約 90%被猝滅,而受體熒光團的熒光較同樣條件下的單體熒光增強

14、 100倍以上,提高了分析靈 敏度。用于 DNA 自動序列分析中,單一波長的光源激發(fā)染料對,經(jīng)過 FRET 過程后,在不同 波長下發(fā)射,因而實現(xiàn)了單一光源激發(fā)多色檢測。 TOTO 類染料雖然價格貴,但標記快速,接 近生理 pH 條件,對生物分子的功能活性影響小。染料與 dsDNA 結合后的性質見表 1。表 1染料與 dsDNA 結合后的熒光性質Tab.1 Fluorescence properties of dyes coupled with dsDNA染料 量子產(chǎn)率 最大激發(fā) /發(fā)射波長 /nm熒光增強倍數(shù) 連接常數(shù) ×10-4/(L·mol -1·cm -1

15、信噪比 參考文獻 吖啶橙 0.43502/5381.53.1×1045.3(DMSO或 DMF 1.23溴乙錠 0.15526/604211.5×1050.32(DMSO或 DMF 1.33 YOYO-10.52491/5094606×1089.9(DMSO或 DMF 3.93 TOTO-10.34514/53314001.1×10911.7(DMSO或 DMF _3TOTIN 吸收波長 506;547發(fā)射波長 531;673367.9;14.64(甲醇 14TOTAB 吸收波長 507;636發(fā)射波長 532;6581267.76;10.1(甲醇 14

16、POPO-1434/4569.2(水或甲醇 15BOBO-1462/48111.4(水或甲醇 15PO-PRO-1435/4555.0(水或甲醇 15BO-PRO-1462/4815.8(水或甲醇 15值由 DNA-染料復合物在水或甲醇中與單體染料對照的結果2.2 花菁染料2.2.1花菁染料的特點 嵌入式熒光染料對 DNA 序列不能特異識別,且其最大發(fā)射波長一般小 于 600nm ,然而生物分子在紫外區(qū)有弱熒光,為避免生物分子的自熒光,開發(fā)近紅外熒光染料已 成為研究的熱點?；ㄝ既玖系哪栁障禂?shù)大,熒光發(fā)射波長范圍寬,一般在 6001000nm 的 近紅外區(qū),可大大避免生物自身的熒光背景干擾,

17、與成本較低的激發(fā)光源如半導體激光器匹配, 用于 DNA 自動測序、聚合酶鏈反應 (PCR檢測及抗體免疫分析等。由 Waggoner 等 26開發(fā)的一 類多甲川類花菁染料,當中間的共軛雙鍵數(shù) n 是 1、 2、 3時,分別為 CY3、 CY5、 CY7系列菁12 R 4R 312R 3R 4染料。每增加一個共軛雙鍵,最大吸收波長紅移 100nm ,共軛雙鍵數(shù)越多,染料越不穩(wěn)定。苯 并噻唑或苯并吲哚取代吲哚環(huán)后,最大吸收發(fā)生紅移。近紅外菁染料共價標記具有特異性,標記更穩(wěn)定,貯存期長。2.2.2光穩(wěn)定性 活性氧如單線態(tài)氧、超氧化物、過氧化物等氧化還原活性物質被認為是熒光團 產(chǎn)生光降解而褪色的主要原因

18、?；ㄝ既玖系墓馄资怯捎趩尉€態(tài)氧對多亞甲基鏈的攻擊。為了 提高染料的光穩(wěn)定性,常將母體中的多亞甲基鏈改變?yōu)榉剿岘h(huán)、環(huán)戊烯、環(huán)己烯等剛性環(huán)結構, 或在分子外部共價引入或摻雜環(huán)糊精等 27,28。姚祖光等發(fā)現(xiàn)染料用含氯環(huán)己烯取代亞甲基鏈結 構并將吲哚的 1位用大體積的芳環(huán)取代后,染料的光穩(wěn)定性會顯著增強 29。2.2.3染料的標記 (標記試劑的生成 將染料標記在一定序列的寡核苷酸上可獲得具有特異性的 寡核苷酸探針,同時運用熒光 PCR 擴增技術,可得到高靈敏度的探針?；ㄝ既玖吓c寡核苷酸的共價標記位一般在吲哚環(huán)的 R 1 位上, R1位的活性基團通過琥珀酰亞胺酯活化后,與連接臂的一端結合,連接臂的另

19、一端與寡核苷酸的核糖或堿基共價連接。活性基團一般為含羧基的取代基,為提高染料的水溶性及穩(wěn)定性,常在吲哚環(huán)的 R 3 、 R4位引入水溶性基團,如磺酸基等。有的在 R 3 、 R4位引入活性基,而在 R1、 R2位引入磺酸基。也可采用鄰苯二甲酰亞胺酯或異硫氰酸酯。一般寡核苷酸的多處標記會使熒光信號增強 30,但由于染料之 間及染料與核酸間的聚集 (Aggregation,多處標記后的寡核苷酸會發(fā)生一些性質的變化,如降 低了探針的穩(wěn)定性和熒光亮度。同時,寡核苷酸的尺寸很小,因此要想增強探針的靈敏度,必 須考慮改變熒光團的結構以抑制染料的聚集。連接臂的長度也會影響探針的靈敏性,連接臂過 短,會影響探

20、針的穩(wěn)定性及后面的雜交檢測。 Waggoner 等 31經(jīng)過體外實驗,獲得了優(yōu)化探針, 即每隔 6個堿基通過連接臂標記一個 CY3染料。2.2.4應用 花菁染料廣泛用于 DNA 自動測序和核酸、蛋白質及抗體的標記等。 Duthie 等 32合 成了菁染料 CY5、 CY5.5標記的二脫氧核糖三磷酸酯結構用于單色 DNA 測序。 James 等 33合成 了近紅外花菁染料異氰酸酯和琥珀酰亞胺酯作為生物探針標記試劑,但酯化反應收率及純度都 很低。 鄭洪等 34以近紅外花菁染料的熒光猝滅測定核酸, 測定范圍是 0.081.2µg/mL。 Yang 等 35將羧基引入近紅外花菁染料,毛細管電

21、泳激光誘導熒光檢測,可以處理并檢測 0.8amol 的染料。 由于染料水溶性好,需高效液相色譜 (HPLC分離,因而限制了其應用。 Wellington 等 36用三步 合成了穩(wěn)定性較好的近紅外菁染料 NIR820(激發(fā)與發(fā)射波長分別為 790和 820nm ,并避免了 HPLC 分離 , 使產(chǎn)品分離能力達到克量級,解決了標記用染料的合成及純化問題 , 促進了生物標記 試劑的發(fā)展。HOOC3-HO 3SNIR8203 熒光素和羅丹明類熒光素 1是 1871年由 V on Bayer合成的,最大吸收 /發(fā) s 射在 492/571nm(水中 ,量子產(chǎn)率 為 0.92(pH>837。由于熒光

22、強度大,大量的熒光素衍生物被合成并用作熒光檢測試劑。如 5(6- 化學通報 2004 年 第 67 卷 w68 羧基熒光素 2、5(6-羧基熒光素琥珀酰亞胺酯 3、5-碘乙酰胺熒光素 4、熒光素異硫氰酸酯 5 等 是應用最廣泛的熒光衍生試劑，用于病毒學、細胞學及免疫組織化學。將熒光素共價連接到核 酸、寡核苷酸、藥物、蛋白質及其它分子來合成探針，用于基因病毒的檢測及表達38。熒光素 也存在一些缺點：如熒光素共軛體不穩(wěn)定，熒光測試儀的強激光，使之發(fā)生不可逆轉的光漂白， X HO Y O X O Y COOH X=H, Y=H, R=H 1 R=COOH 2 O

23、R=CO2N O 3 R=NHCOCH2I 4 R=NCS 5 X=H, Y=F, R=COOH 6 X=Y=F, R=COOH 7 R O O N O OCH3 O O O O OH O N OH O 8 9 導致熒光信號的迅速下降；熒光素在水溶液中以離子形式存在，吸收及熒光性質易受 pH 影響； 與標記物共軛連接后，易發(fā)生猝滅。Sun 等38在熒光素分子中引入氟使其光穩(wěn)定性有很大提高并 降低了離子化的 pH。Gao 等39合成了光穩(wěn)定性好的含單羧基的熒光素衍生物，其中 8 的穩(wěn)定性 是 1 和 BODIPY 熒光染料的 10 倍， 但是熒光強度卻較 1 下降了 4 倍。 它們的光譜性質見表

24、 238。 表2 熒光素衍生物 1 2 6 7 pH 9.0 磷酸緩沖溶液 吸收/發(fā)射波長/nm 492/517(水 492/516 492/517 510/534 熒光素的光譜性質 量子產(chǎn)率 0.92 0.92 0.92 0.59 /(L·mol-1·cm-1 90000 84700 78100 Tab.2 Spectral properties of fluoresceins 羅丹明染料由于分子呈剛性平面，有較高的熒光量子產(chǎn)率，故熒光較強，已成為商品化染 料；但 Stokes 位移較小，吸收區(qū)域的低能量部分與發(fā)射區(qū)的高能量部分重疊，導致染料的激發(fā) 輻射損失。 常見的有羅

25、丹明 B、 羅丹明 6G、 羅丹明 101、 德克薩斯紅等。 等40合成了 Phosphin3R Zhu H N NH2 COOH COOH NO3 N O ClO4 羅丹明 101 N (C2H52N O ClO4 羅丹明 B N(C2H52 NH2 Phosphin3R 探針，該探針成本較低，是一種基于熒光猝滅來快速檢測核酸的熒光染料，最大激發(fā)/發(fā)射波長 6 化學通報 2004 年 第 67 卷 w68 為 468/505nm。核酸存在時，熒光會顯著猝滅，對小牛胸腺 DNA 的檢測限為 5.0ng/mL，沙門 桿菌的檢測限是 6.0ng/mL。 4 噻

26、嗪和噁嗪類染料 這類染料分子結構簡單，合成方便，但熒光量子產(chǎn)率較低，限制了其應用。主要有耐爾藍、 耐爾紅和噁嗪 750 等。耐爾藍通過與 DNA 作用，染料的熒光被猝滅，通過熒光強度的減弱來 檢測 DNA 的含量。JA242 噁嗪染料與發(fā)夾結構寡核苷酸端基連接形成智能探針(Smart probe， 雜交前被莖桿結構處互補的鳥嘌呤殘基所高度猝滅。當與特異的靶序列結合時，發(fā)夾打開，染 料與鳥嘌呤分離，熒光增強約 6 倍，可以檢測 pmol (10-12mol級的核酸濃度41。 CH3 N N C2H5 N C2H5 耐爾藍 N NH2 C2H5 N C2H5 噁嗪 720 H 3C H3 C N

27、C2 H5 O N (CH23 COOH O O NH2 JA242 5 BODIPY(Boron dipyrromethene difluoride染料 BODIPY 染料熒光量子產(chǎn)率高，熒光波長范圍寬，可以通過調(diào)節(jié) R1、R2 取代基，獲得不同 的熒光發(fā)射波長，一般用于熒光共振能量轉移探針。BODIPY 熒光標記的 G 三磷酸酯核苷類似 物作為 G 蛋白親和探針(Affinity probe，毛細管電泳激光誘導熒光檢測，檢測限為 2nmol42。 N R1 B N R2 F F BODIPY 6 其它類別探針 6.1 稀土元素探針 稀土離子也是一類核酸探針的檢測試劑。 在水溶液中僅有 Tb

28、(和 Eu(發(fā)出熒光， DNA 與 配合后仍保留熒光性能，可特異識別核苷酸。Tb(和 Eu(與一些小分子配體配合，由于配 體本身性質、中心離子-配體成鍵及溶劑等因素影響，使配合物的激發(fā)態(tài)壽命達到 ms 級，并發(fā) 出窄而強的熒光。Tb(和 Eu(與小分子的配合物探針通過共價鍵與靶 DNA 共價結合后多用 于實時定量熒光 PCR 反應產(chǎn)物的分析及雜交測試。該類探針要求稀土配合物易于合成并且足夠 穩(wěn)定，同時熒光發(fā)射強度大。Nurmi 等43用 Tb(和 Eu(標記的探針進行實時同步擴增及前 列腺特異抗原的測定，信噪比要高于傳統(tǒng)的 TaqMan 探針，而循環(huán)閾值則降低。 6.2 量子點熒光探針 量子點

29、熒光探針是由-族和-族元素組成的半導體納米顆粒，將核酸連接到量子點 的表面，做成探針，通過體外雜交常規(guī)熒光(FISH分析，發(fā)現(xiàn)染色體的異常及變異，可取代一 些有機熒光染料進行生物分子檢測。研究較多的有 CdSe、CdTe、ZnS 等。量子點探針可以在有 機溶劑中制備，但須經(jīng)過一定的化學修飾，使其表面具有一定的水溶性基團，同時又具備一些 7 化學通報 2004 年 第 67 卷 w68 與生物分子偶連的活性基團，因而反應條件苛刻，步驟復雜，成本較高。盡管在水溶液中制備 的成本低，但量子點的熒光產(chǎn)率低，尺寸分布較大。目前較多采用在有機溶劑中合成。在強激 光下易

30、發(fā)生光漂白，是有機類熒光染料最普遍的缺陷。量子點探針較傳統(tǒng)的有機熒光染料具有 一定的優(yōu)越性。首先，熒光光譜范圍寬，通過改變納米晶體材料和尺寸，獲得的激光誘導熒光 光譜范圍在 400nm2µm；其次，熒光光譜范圍可調(diào)，穩(wěn)定性好，熒光壽命長，且可用單一波 長的激發(fā)光源同時激發(fā)不同大小尺寸的量子點，得到不同熒光發(fā)射波長的檢測信號，相對于有 機熒光染料的單一光源激發(fā)得到單一熒光發(fā)射信號，降低了實驗成本并簡化了分析步驟。1998 年，Bruchez 等44制備了 CdSe-ZnS 核-殼結構的納米晶體，之后又增加了 SiO2 層，使其具有水 溶性，同時 SiO2 經(jīng)過修飾后可以與生物分子結合，

31、量子產(chǎn)率高且穩(wěn)定。Nie 等45將量子點的表 面連接上巰基乙酸，使量子點不僅具有水溶性，同時可與生物分子連接。Pathak 等46將量子點 表面用眾多的羥基修飾，解決了量子點探針雜交過程中的水溶性問題，同時降低了量子點表面 大分子的非特異連接，穩(wěn)定性也大大增加。以上量子點都是在有機溶劑中合成的，林章碧等47 以巰基乙酸為穩(wěn)定劑，在水溶液中，合成了尺寸為 3nm 的 CdTe 半導體納米粒子?？傊孔?點熒光探針用于生物熒光標記，是一個具有廣闊應用前景的領域。 7 結語 目前，DNA 熒光探針要解決的問題是提高靈敏度，增強光穩(wěn)定性，降低合成成本。不同的 DNA 熒光探針各有優(yōu)缺點，有機類染料中

32、近紅外染料具有一定的優(yōu)勢，尤其是近紅外菁染料將 會更多的被合成并應用于生物分子的檢測，其光穩(wěn)定性有待提高。量子點探針作為一個新興的 領域，必將受到越來越多的重視。相信不久的將來，隨著新型、性能優(yōu)異的熒光探針的開發(fā)， 人類將能夠實現(xiàn)對一些生物過程運用多種方法、多種參數(shù)進行實時觀測、動態(tài)研究，這將極大 地推動基因組學及相關學科的發(fā)展。 參考文獻 1 J W Richard, M P Jose, T Victor et al. Applied Spectroscopy, 1997, 51:836843. 2 K Licha, C Hessenius, A Becke et al. Bioconjug

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