工業(yè)分析與檢驗論文

1、目 錄一、 前言31、 山梨酸簡介32、使用范圍43、用量介紹54、應(yīng)用實例55、 主要測定方法9二、 實驗部分121、 試驗原理122、 實驗儀器與試劑 123、 實驗方法13三、 方法研究131、 吸收光譜和測量波長的選擇 132、 氧化反應(yīng)溫度 143、 顯色酸度154、顯色劑用量165、 工作曲線17四、 樣品測定181、 樣品溶液的制備和測定方法 182、 精密度實驗183、 樣品分析19五、 結(jié)論20參考文獻20致謝21食品中山梨酸含量的測定王偉0901工業(yè)分析摘 要食品中添加的山梨酸超標(biāo)嚴(yán)重，消費者長期服用，在一定程度上會抑制骨骼生長，危害腎、肝臟的健康，因此食品中山梨酸含量是一

2、項極其重要的指標(biāo)。 本文采用分光光度 冋 法測定食品中山梨酸的含量。以雙氧水-硫酸溶液為山梨酸氧化體系，氧化產(chǎn)物丙二醛進一步與硫代巴比妥酸進行顯色反應(yīng)。在吸收波長530nm處，氧化反應(yīng)溫度 60C,顯色劑用量 4.0mL,0.15mol/LH 2SO溶液用量1.4mL 測定效果最佳。山梨酸濃度在01.066卩g/mL范圍內(nèi)呈線性相關(guān)，線性范圍內(nèi)吸光度與山梨酸濃度(卩g/mL)間的關(guān)系為：A=0.3715c+0.0047 , R =0.9998，回收率為 99.0%101.1%。關(guān)鍵詞分光光度法；山梨酸；過氧化氫 -硫酸；硫代巴比妥酸Food in the sorbic acid content

3、 is determ inedWang Wei0901 In dustrial An alysisAbstract : The food additives sorbic acid exceed the standard seriously, the consumerIong-term use, to a certainextent, inhibitbone growth, harmful to renal,liver health, so the content of sorbic acid in food is a very important in dex. This paper ado

4、pts spectrophotometer determ in ati on of sorbic acid content.Hydroge n peroxide sulfuric acidsoluti onfor sorbic acidoxidati on, oxidati on product malon dialdehyde further and thiobarbituric acid chromoge nic react ion.In the absorpti on wavele ngth of 530nm, oxidati ontemperature of 60C , chromog

5、enic agent4.0mL,0.15mol/ LH2SC41.4mL solutiondosage determ in ati on of best.c oncen trati onsin 0 1.066g/mL range showeda linearcorrelation,linear range and absorbanee of sorbic acid2concen tratio n ( g/mL ) relatio nship is: A =0.3715c+0.0047, R= 0.9998,the recovery rate was 99%101.1%.Key words :

6、Spectrophotometry ; The sorbic acid ; Hydrogen peroxide-Sulphuric acid;Sulfur generation without inflicting一、前言1、山梨酸簡介山梨酸及山梨酸鉀3-4（以下簡稱山梨酸及鉀鹽）是一種良好的食品防腐劑，在西方發(fā)達國家的應(yīng)用量很大，但在中國國內(nèi)的應(yīng)用范圍還不廣。作為 一種公認(rèn)安全、高效防腐的食品添加劑，山梨酸在我國食品行業(yè)的應(yīng)用必將 會越來越廣泛。為白色或微黃白色結(jié)晶性粉末；有特臭。本品在乙醇中易溶，在乙醚中溶解，在水中極微溶解。我們在選購包裝（或罐裝）食品時，配料一項中常常看到“山梨酸”的字

7、樣，人們往往會誤認(rèn)為可能是水果“梨”的成 份。其實他們是常用的食品添加劑！不管他們對人體有沒有危害，明明白白 的消費確是非常必要的，以下是有關(guān)山梨酸的有關(guān)資料僅供參考：山梨酸 （化學(xué)名稱：2，4己二烯酸 分子式：CefQ山梨酸是國際糧農(nóng)組織和衛(wèi)生組織推薦的高效安全的防腐保鮮劑，廣泛 應(yīng)用于食品、飲料、煙草、農(nóng)藥、化妝品等行業(yè)，作為不飽和酸，也可用于樹脂、香料和橡膠工業(yè)。2、安全性由于山梨酸（鉀）是一種不飽和脂肪酸（鹽）它可以被人體的代謝系統(tǒng) 吸收而迅速分解為二氧化碳和水，在體內(nèi)無殘留。ADI 0-25mg/kg （以山梨酸計， FAO/WHO994），LD50 4920mg/kg （大 鼠、經(jīng)

8、口）， GRAS （ FDA 182.3640 1994），其毒性僅為食鹽的 1/2，是苯 甲酸鈉的1/40。但是如果食品中添加的山梨酸超標(biāo)嚴(yán)重，消費者長期服用， 在一定程度上會抑制骨骼生長，危害腎、肝臟的健康。3、穩(wěn)定性山梨酸（鉀）在密封狀態(tài)下穩(wěn)定，暴露在潮濕的空氣中易吸水，氧化而 變色。山梨酸鉀對熱穩(wěn)定性較好，分解溫度高達270C。4、使用范圍目前已廣泛地用于食品、飲料、醬菜、煙草、醫(yī)藥、化妝品、農(nóng)產(chǎn)品、 飼料等行業(yè)中，從發(fā)展趨勢看，其應(yīng)用范圍還在不斷擴大。山梨酸(鉀)屬酸性防腐劑，在接近中性(pH= 6.06.5)的食品中仍有較好的防腐作用，而苯甲酸(鈉)的防腐效果在pH>4時，效

9、果已明顯下降，且有不良味道。5、主要特點(1) 防霉效果良好。山梨酸及鉀鹽的防霉能力明顯高于苯甲酸及鹽類，山梨酸鉀的防霉效果是苯甲酸鈉的510倍。山梨酸的用量一般在0.21.0g/kg 之間。(2) 產(chǎn)品毒性低、安全性高。山梨酸鹽的毒副作用只是苯甲酸鹽的1/4、食鹽的1/2。山梨酸及鉀鹽在人體內(nèi)的安全使用范圍為：每天每千克體重的 使用量不超過25毫克。(3) 不改變食品特性。山梨酸是一種不飽和脂肪酸，進入人體后，參與人體的新陳代謝過程，代謝產(chǎn)物為二氧化碳和水。所以，山梨酸可以看作是 食品的一部分，在食品中應(yīng)用，不會破壞食品的色、香、味和營養(yǎng)成分。應(yīng)用范圍寬廣。山梨酸及鉀鹽可以用于飲料、酒、調(diào)味

10、品、肉制品、 水產(chǎn)制品、醬腌菜等多種食品的防腐之中，且對水果保鮮也有效果。(5)使用方便。在使用山梨酸及鉀鹽時，可以直接添加，也可以 噴灑或者浸漬。正是由于其具有使用靈活的特點，所以，聯(lián)合國糧農(nóng)組織、世界衛(wèi) 生組織、美國、英國、日本以及中國、東南亞國家，都推薦山梨酸及鉀鹽作 為多種食品的防腐保鮮劑。6、主要指標(biāo)山梨酸的質(zhì)量指標(biāo)：應(yīng)符合GB1905-2000技術(shù)要求。(1 )色澤及外形：白色結(jié)晶粉末。(2) 熔點:132 135C。(3) 含量(以干基計)：99.0%101.0%。(4) 灼燒殘渣：w 0.2%。(5) 重金屬(以 Pb 計)：w 0.001%。(6) 砷牖以 As計牘：w 0.

11、0002%。(7) 水分：w 0.5%。(8) 貯存：存放在陰涼干燥處，避光，禁止與有毒有害物品共同存放。7、用量介紹山梨酸類有山梨酸、山梨酸鉀和山梨酸鈣三類品種。山梨酸不溶于水使用時須先將其溶于乙醇或硫酸氫鉀中，使用時不方便且有刺激性，故一般不 常用；山梨酸鈣 FAO/WHOfi定其使用范圍小，所以也不常使用；山梨酸鉀則 沒有它們的缺點，易溶于水、使用范圍廣，我們經(jīng)?？梢栽谝恍╋嬃?、果脯、罐頭等食品看到它的身影；在這里我重點介紹一下山梨酸鉀：它為不飽和六 碳酸；一般市場上出售的山梨酸鉀呈白色或淺黃色顆粒，含量在98% 102%;無臭味、或微有臭味，易吸潮、易氧化而變褐色，對光、熱穩(wěn)定，相對密

12、度 1.363，熔點在270T分解，其1%溶液的pH=78。山梨酸鉀為酸性防腐劑， 具有較高的抗菌性能，抑制霉菌的生長繁殖；其主要是通過抑制微生物體內(nèi) 的脫氫酶系統(tǒng)，從而達到抑制微生物的生長和起防腐作用，對細菌、霉菌、 酵母菌均有抑制作用；其效果隨pH的升高而減弱，pH達到3時抑菌達到頂峰，pH達到6時仍有抑菌能力，但最底濃度(MIC)不能底于0.2%，實驗證明pH=3.2比pH=2.4的山梨酸鉀溶液浸漬， 未經(jīng)殺菌處理的食品的保存期短 24倍。山梨酸、山梨酸鉀和山梨酸鈣它們?nèi)N的作用機理相同，毒性比苯甲酸類和尼泊金酯要小，日允許量為25mg/Kg，苯甲酸5倍，尼泊金酯的2.5倍是一種相對安全

13、的食品防腐劑；在我國可用于醬油、醋、面醬類、果醬類、 醬菜類、罐頭類和一些酒類等等食品。&應(yīng)用實例(1) 山梨酸在酒類和飲料中的應(yīng)用。 蘇打類飲料：按照 0.03%0.04%的比例添加山梨酸。 鮮橘汁、山楂汁等飲料：按照0.02%的比例添加山梨酸，可以將保存期延長到6月。 其他類非酒精飲料：按照0.04%0.05%的比例添加山梨酸。(2) 山梨酸在醬油、醬制品和腌菜中的應(yīng)用。 醬油：按照0.01%的比例添加山梨酸，在高溫季節(jié)放置70天，可以使醬油不發(fā)生長霉變質(zhì)的問題。 醬類制品：由于類品比較黏稠，山梨酸在其中不易均勻分散?？梢栽?產(chǎn)品灌裝之前，在加熱的情況下，加入相應(yīng)濃度的山梨酸溶液。

14、 醬油腌菜：可將山梨酸溶解于冰醋酸之中，然后加入腌菜內(nèi)，添加量在1.0g/kg 之內(nèi)，并將 pH值控制在4.04.5之間。 酒糟腌菜：可以先將山梨酸溶解于乙醇、燒酒或者料酒中，然后加入腌菜內(nèi)，添加量為 0.751.00g/kg。 醋腌菜：將山梨酸直接加入到物料之中，添加量為0.5g/kg 。 腌小黃瓜、甜菜根及其他腌菜：可以在含有食鹽的醋中加入適量的山 梨酸鉀(按照食鹽的 0.1%的量添加)。為了防止腌菜鹽水發(fā)生混濁現(xiàn)象，可 以先將食鹽、香料和山梨酸鉀溶解于水中，然后添加醋。(3) 山梨酸及鉀鹽在水產(chǎn)制品中的應(yīng)用 魚糕食品：魚糕類制品的pH值在6.87.2之間。如果降低 pH值，則會影響魚糕的

15、彈性。而山梨酸又是一種酸性防腐劑，所以，山梨酸的用量不宜超過1.0g/kg為了解決pH值和魚糕彈性相矛盾的問題，可以使用山梨 酸和山梨酸鉀的混合物，也可以單獨使用山梨酸鉀。 魚肉香腸：按照0.1%0.2%的用量向魚肉香腸中添加山梨酸和山梨酸 鉀的混合物，在30 C的情況下貯藏兩個星期，這種香腸不會變質(zhì)；而對照樣品在一個星期后就會變質(zhì)。當(dāng)將魚肉香腸的pH值調(diào)節(jié)到小于6時，在1015 C的溫度下，這種魚肉香腸可以保存7個星期而不變質(zhì)。 魚干制品：這類食品的干燥程度很高，水分含量在30%以下的魚干制品，一般不會發(fā)生細菌腐敗問題，但會產(chǎn)生霉變現(xiàn)象。添加山梨酸，可以有 效防止魚干制品中霉變問題的發(fā)生，山

16、梨酸的用量為1.0g/kg。 熏魚制品：在熏魚制品上噴灑濃度為5%10%的山梨酸鉀溶液，噴灑過程可以在熏制前進行，也可以在熏制中或者熏制后實施。 醬油烹煮的魚蝦：按照0.1%用量添加山梨酸的此類食品，在1015C的溫度下，可以貯存兩個月而不變質(zhì)。 鮮魚、鮮蝦及其他水產(chǎn)品：將鮮魚等水產(chǎn)品洗凈后，浸入含有山梨酸 的保鮮溶液中20s，然后排去溶液，將魚冷藏。保鮮溶液的配方為：山梨酸1.0%5.0%、甘油1.0%20% 聚乙烯醇 0.3%3.0%，其余皆為水。(4) 山梨酸在肉制品及香腸中的應(yīng)用 干肉、干香腸、熏火腿和其他類似的干肉制品可以浸泡在濃度為5 %15%的山梨酸鉀溶液中，保持30秒鐘。 一般

17、肉料：先按照0.05%0.1%的用量向肉料中添加山梨酸或者山梨酸鉀，接著按照0.01%0.5%的用量加入C10或者C12脂肪酸甘油酸酯。另 外，在肉料中加入亞硝酸鉀(用量為20ppm30ppm)和六偏磷酸鈉。 肉餡：按照 0.08%0.1%的用量添加山梨酸，或者使用山梨酸和山梨 酸鉀的混合物。 熟雞肉：將熟雞肉放在山梨酸鉀保鮮溶液中浸泡 30秒鐘，然后在4°C的條件下貯存，可以保鮮 20天。山梨酸鉀保鮮溶液的配方為：10%的檸檬酸、6%的山梨酸鉀、34%的改性玉米淀粉、50%的水、保鮮溶液的 pH值為 3.2。 生鮮禽肉：將含有山梨酸的保鮮液噴灑到生鮮禽肉表面，在7 C的條件下儲存，

18、18天后，產(chǎn)品沒有發(fā)生變質(zhì)現(xiàn)象；而對照樣品在 5天后就發(fā)生變 質(zhì)現(xiàn)象。保鮮液的配方為：含有 7.5%山梨酸的丙二醇70份，水20份，甘油 10份。 生鮮雞腿、雞胸：用濃度為10%的山梨酸溶液浸泡雞腿、雞胸30秒，在4C的情況下，可以存放 20天，保鮮時間是對照樣的兩倍。(5 )山梨酸在蔬菜和水果保鮮中的應(yīng)用。 蔬菜、水果：將蔬菜、水果與山梨酸保鮮劑一同放入聚乙烯袋中、密 封，在30C的情況下保存一個月以上，可以保持蔬菜、水果的綠色度不變。山梨酸保鮮劑的配方為：80份過氧化鈣，3份山梨酸，70份沸石，保鮮劑和 水果的重量比為1 : 20。 蘋果：將濃度為 0.05%的保鮮液噴灑在蘋果的表面，在常

19、溫下貯存4個月，僅有3.2%6.0%的蘋果發(fā)生變質(zhì)。保鮮液的配方為：山梨酸 1份，滑 石粉4份，水95份。 蔬菜罐頭：按照 0.1%的比例添加山梨酸，可以防止馬口鐵生銹。 番茄沙司：打開瓶蓋后，可按照 0.025%的比例添加山梨酸。先將山梨 酸溶解于醋酸中，然后加入到番茄沙司中。 干果：用濃度為 2% 5%的山梨酸鉀溶液浸泡或者噴灑干果。 煮制豆類食品：將山梨酸的添加量控制在千分之一以下。要注意調(diào)整 物料的pH值，當(dāng)pH值在7.0以上時，需要在物料中加入少量的食用酸(多 為檸檬酸，將pH值控制在6.36.5之間。(6 )山梨酸在干酪保鮮中的應(yīng)用。 硬干酪：用濃度為20%40%的山梨酸鉀溶液噴灑

20、物料，或者將物料浸泡在山梨酸鉀溶液之中。 干酪粉：可以直接添加粉末狀山梨酸或者山梨酸鈣。 食鹽鹽化干酪：使用山梨酸鉀的方法有3種，一是在鹽溶液中加入山梨酸鉀，用量為0.2%1.0%，然后用這種鹽溶液來制作干酪；二是在干酪成 品出售之前，用濃度為10%的山梨酸鉀溶液浸泡或噴灑。三是用含有一定量酒精的山梨酸溶液浸泡或者噴灑干酪。9、注意事項(1) 山梨酸只有透過細胞壁進入微生物體內(nèi)才能起作用，分子態(tài)的抑菌活 性比離子態(tài)強。當(dāng)溶液pH小于4時，抑菌活性強，而pH大于6時，抑菌活性 降低。(2) 山梨酸與過氧化氫溶液混合使用時，抗微生物活性會顯著增強。(3) 山梨酸主要對霉菌、酵母和好氣性腐敗菌有效，

21、而對厭氣性細菌 和乳酸菌幾乎無作用。山梨酸在微生物數(shù)量過高的情況下發(fā)揮不了作用，因 此它只適用于具有良好的衛(wèi)生條件和微生物數(shù)量較低的食品的防腐。(4) 山梨酸為酸型防腐劑，其作用受pH值影響。但它的酸性較苯甲酸 弱，適宜pH范圍較苯甲酸廣。配制山梨酸溶液時，可先將山梨酸溶解在乙醇、碳酸氫鈉或碳酸鈉的溶液中，隨后再加入食品中。溶解時不要使用銅、 鐵容器。(5) 山梨酸為酸型防腐劑，其作用受pH值影響。但它的酸性較苯甲酸 弱，適宜pH范圍較苯甲酸廣。配制山梨酸溶液時，可先將山梨酸溶解在乙 醇、碳酸氫鈉或碳酸鈉的溶液中，隨后再加入食品中。溶解時不要使用銅、 鐵容器。（6 ）山梨酸用于需要加熱的產(chǎn)品中

22、，為防止山梨酸受熱揮發(fā)，應(yīng)在加 熱過程的后期添加。10、測定方法：（1）紫外分光光度法5-6紫外分光光度法為采用紫外分光光度計，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線法而實現(xiàn)食品中山梨酸鉀含量的測定。山梨酸為共扼型有機化合物，在近紫外光區(qū)具有較強的吸收。并通過實測證實，山梨酸在263nm處具有最大吸收。另一方面，山梨酸在水 中具有適當(dāng)?shù)娜芙舛?。山梨酸?20C時溶解度為0.21g/100mL水，在30C時為 0.25g/100mL水。因此可將標(biāo)樣和樣品處理成水溶液。采用紫外分光光度計,通 過標(biāo)準(zhǔn)曲線法而實現(xiàn)山梨酸鉀含量的測定。該方法具有簡便、快速的特點。（2）氣相色譜法氣相色譜法是在以適當(dāng)?shù)墓潭ㄏ嘧龀傻闹軆?nèi)，利用氣體

23、（載氣）作為移動 相，使試樣（氣體、液體或固體）在氣體狀態(tài)下展開，在色譜柱內(nèi)分離后，各種 成分先后進入檢測器，用記錄儀記錄色譜譜圖。在對裝置進行調(diào)試后，按各單體的規(guī)定條件調(diào)整柱管、檢測器、溫度和載氣流量。進樣口溫度一般應(yīng)高于柱溫 3050C。色譜上分析成分的峰的位置，以滯留時間（從注入試樣液到出現(xiàn)成分 最高峰的時間）和滯留容量（滯留時間X載氣流量）來表示。這些在一定條件下， 就能反應(yīng)出物質(zhì)所具有特殊值，并據(jù)此確定試樣成分。此方法分離效率高，分析 速度快，樣品用量少和檢測靈敏度高，選擇性好，應(yīng)用范圍廣，應(yīng)用的主要領(lǐng)域 有石油工業(yè)、環(huán)境保護、臨床化學(xué)、藥物學(xué)、食品工業(yè)。定量方法可分以下三種： 內(nèi)標(biāo)

24、法：所謂內(nèi)標(biāo)法是將一定量的純物質(zhì)作為內(nèi)標(biāo)物，加入到準(zhǔn)確稱量的試樣中，根據(jù)被測物和內(nèi)標(biāo)物的質(zhì)量及在色譜圖上相應(yīng)的峰面積比，求出某組分的百分含量。當(dāng)只需測定試樣中某幾各組分時，而且試樣中所有組分不能全部出 峰時，可用此法。此法適合于微量物質(zhì)的分析。該法的計算公式如下：m s f si A ix j % 二 一100%m A Q其中，fsi是被測組分相對于內(nèi)標(biāo)物的相對校正因子。該法的優(yōu)點是：受操作 條件的影響較小，定量結(jié)果較為準(zhǔn)確，使用上不象歸一化法那樣受到限制。 該法 的缺點是：每次分析必須準(zhǔn)確稱量被測物和內(nèi)標(biāo)物，不適合于快速分析。內(nèi)標(biāo)物的選擇十分重要。它應(yīng)該是試樣中不存在的物質(zhì)；加入的量應(yīng)接近于

25、 被測組分色譜；同時要求內(nèi)標(biāo)物的色譜峰位于被測組分色譜附近或幾個被測組分 色譜峰的中間，并與這些組分完全分離；內(nèi)標(biāo)物必須不與樣品發(fā)生反應(yīng)等。 標(biāo)準(zhǔn)曲線法：取標(biāo)準(zhǔn)被測成分，按依次增加或減少階段法，各自調(diào)制成標(biāo)準(zhǔn)液，注入一定量后，按色譜圖取標(biāo)準(zhǔn)被測成分的峰面積或峰高為縱坐標(biāo)，而以標(biāo)準(zhǔn)被測成分的含量為橫坐標(biāo)，制成標(biāo)準(zhǔn)曲線。然后按單體中所規(guī)定的方法制備 試樣液。取試樣液按制標(biāo)準(zhǔn)曲線時相同的條件作出色譜，求出被測成分的峰面積和峰高，再按標(biāo)準(zhǔn)曲線求出被測成分的含量。 歸一化法：當(dāng)試樣中各組分都能流出色譜柱且在檢測器上均有響應(yīng)，各組 分的相對校正因子已知時，可用此法定量。組分i在混合物中的百分含量可由下 式

26、計算：f i Aix i %100%V fiAi其中fi可為質(zhì)量校正因子，也可為摩爾校正因子。若各組分的定量校正因 子相近或相同（如同系物中沸點接近的組分），則上式可簡化為：Aix j % 二一 100 %i' Ai該法簡稱為歸一化法。歸一化法的優(yōu)點是：簡便、準(zhǔn)確，當(dāng)操作條件如進樣 量、流速變化時，對定量結(jié)果影響很小。缺點是：對該法的苛刻要求限制了該法 的使用。該法適合于常量物質(zhì)的定量。（3）高效液相色譜法HPLC高效液相色譜法是以液體為流動相， 采用高壓輸液系統(tǒng)，將具有不同極性的 單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動相泵入裝有固定相的色譜柱，在 柱內(nèi)各成分被分離后，進入檢測器進

27、行檢測，從而實現(xiàn)對試樣的分析。高效液相 色譜法有“三高一廣一快”的特點： 高壓：流動相為液體，流經(jīng)色譜柱時，受到的阻力較大，為了能迅速通過 色譜柱，必須對載液加高壓。 高效：分離效能高?？蛇x擇固定相和流動相以達到最佳分離效果，比工業(yè)精餾塔和氣相色譜的分離效能高出許多倍。 高靈敏度：紫外檢測器可達 0.01 ng，進樣量在uL數(shù)量級。 應(yīng)用范圍廣：百分之七十以上的有機化合物可用高效液相色譜分析，特別是高沸點、大分子、強極性、熱穩(wěn)定性差化合物的分離分析，顯示出優(yōu)勢。 分析速度快、載液流速快：較經(jīng)典液體色譜法速度快得多，通常分析一個 樣品在1530分鐘，有些樣品甚至在5分鐘內(nèi)即可完成，一般小于1小時

28、。此 外高效液相色譜還有色譜柱可反復(fù)使用、樣品不被破壞、易回收等優(yōu)點，但也有 缺點，與氣相色譜相比各有所長，相互補充。高效液相色譜的缺點是有“柱外效 應(yīng)”。在從進樣到檢測器之間，除了柱子以外的任何死空間（進樣器、柱接頭、 連接管和檢測池等）中，如果流動相的流型有變化，被分離物質(zhì)的任何擴散和滯 留都會顯著地導(dǎo)致色譜峰的加寬，柱效率降低。使高效液相色譜檢測器的靈敏度 不及氣相色譜。（4）薄層色譜法7-8薄層色譜，或稱薄層層析（thin layer chromatography），是以涂布于支持 板上的支持物作為固定相，以合適的溶劑為流動相，對混合樣品進行分離、鑒定 和定量的一種層析分離技術(shù)進一步說

29、，它就是利用各成分對同一吸附劑吸附能力 不同，使在移動相（溶劑）流過固定相（吸附劑）的過程中，連續(xù)的產(chǎn)生吸附、 解吸附、再吸附、再解吸附，從而達到各成分的互相分離的目的。這是一種快速分離諸如脂肪酸、類固醇、氨基酸、核苷酸、生物堿及其他多種物質(zhì)的特別有效 的層析方法，從50年代發(fā)展起來至今，仍被廣泛采用。（5）高效毛細管電泳（HPCE）高效毛細管電泳（HPCE技術(shù)對具有電化學(xué)活性的物質(zhì)的分離檢測具有優(yōu)勢 . 它是以彈性石英毛細管為分離通道， 以高壓直流電場為驅(qū)動力，依據(jù)樣品中各組 分之間淌度和分配行為上的差異而實現(xiàn)分離的電泳分離分析方法。 他的優(yōu)點是高 靈敏度、高分辨率、高速度。當(dāng)然HPCE5是

30、一種正在發(fā)展中的技術(shù)，有些理論研 究和實際應(yīng)用正在進行與開發(fā)。二、實驗部分1、實驗原理采用雙氧水一硫酸溶液氧化山梨酸，之后進一步與硫代巴比妥酸進行顯色反 應(yīng)，采用分光光度法測定食品中山梨酸的含量。2、儀器與試劑 儀器722E型可見分光光度計水浴裝置25mL比色管容量瓶 試劑山梨酸標(biāo)準(zhǔn)貯備液(213.2mg/L):準(zhǔn)確稱取山梨酸0.2132g于100mL燒杯中， 用0.1mol/LNaOH溶解后，移入1000mL容量瓶中，用上述 NaOH溶液稀釋，定容 至刻度，備用。山梨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液(5.33mg/L):準(zhǔn)確吸取6.25mL 213.2mg/L山梨酸標(biāo)準(zhǔn)貯備液 于250ml容量瓶中，用去離子水稀釋

31、至刻度。5g/L硫代巴比妥酸溶液：稱取 0.50g硫代巴比妥酸溶于20m蒸餾水中，加 1.0mol/L NaO溶液10mL使之完全溶解以后，加1.0mol/L HC!溶液1lmL,用蒸餾 水稀釋至100mL搖勻。0.1 % "02溶液：用量筒量取1.3mL密度為1.11g/mL，質(zhì)量百分?jǐn)?shù)含量為30% 的HQ，移入加有100m!水的燒杯中，轉(zhuǎn)移至250m試劑瓶中稀釋至250mL ,蓋上 瓶塞搖勻。0.15mol/L H 2SO溶液：用量筒量取1.1mL密度為1.84g/mL，質(zhì)量百分?jǐn)?shù)含量 為95.6%的濃硫酸，緩緩注入水中，冷卻后稀釋至 250mL貯存于試劑瓶中。0.1mol/L

32、NaOH溶液：稱取1.0g固體氫氧化鈉于250m燒杯中，加入100m水 溶解后移入試劑瓶中，稀釋至250mL，蓋上瓶塞，搖勻。1.0mol/L NaOH溶液：稱取10.0g固體氫氧化鈉于250m!燒杯中，加入100mL 水溶解后移入試劑瓶中，稀釋至250mL蓋上瓶塞，搖勻。1.0mol/L HCl溶液：用量筒量取20.0mL密度為1.19g/mL，質(zhì)量百分?jǐn)?shù)含量為 37%勺濃鹽酸，移入加有100m水的燒杯中，轉(zhuǎn)移至250m試劑瓶中稀釋至250mL 蓋上瓶塞，搖勻。0.25mol/L NaHC0溶液：稱取5.25g固體NaHC0于250mL燒杯中，加入100mL 水溶解后移入試劑瓶中，稀釋至 2

33、50mL蓋上瓶塞，搖勻。所用試劑均為分析純試劑，所使用蒸餾水均為二次去離子水3、試驗方法準(zhǔn)確吸取5.33mg/L山梨酸標(biāo)準(zhǔn)液4.00mL于25m比色管中，加入0.1%H02溶液 1.0mL和0.15mol/L HS1.2mL,搖勻后至60C水浴中加熱40min,冷水流冷卻后 加5g/L硫代巴比妥酸溶液4.0mL，搖勻，置沸水浴中加熱20min，冷卻后用蒸餾水 稀釋至刻度，以試劑空白作參比，采用1cm比色皿，于530nm波長處測定溶液的吸 光度。三、方法研究1、吸收光譜和測量波長的選擇取4.00mL 5.33mg/L山梨酸標(biāo)準(zhǔn)液，按實驗步驟方法用試劑空白作參比，采 用lcm比色皿，在500560

34、nm波長范圍內(nèi)每隔10nm波長測定一次溶液的吸光度， 在最大吸收峰附近每隔2nm波長測定一次溶液的吸光度，不同波長對應(yīng)的吸光度 曲線。表1不同波長下的吸光度波長/nm500510520522524526528530A0.1700.1850.2060.2310.2630.2950.3130.321續(xù)表1波長/nm532534536538540550560570A0.3160.3040.2950.2830.2710.1570.0840.033由上表數(shù)據(jù)繪制以波長（nm）為橫坐標(biāo)，吸光度（A）為縱坐標(biāo)作吸收曲線 如圖1。圖1吸收曲線測定結(jié)果表明，最大吸光度對應(yīng)的吸收波長為 530nm故選此波長為測定

35、條 件波長。2、氧化反應(yīng)溫度在不同的氧化反應(yīng)溫度時，氧化反應(yīng)進行的程度是不同的，因此測定體系吸 光度也是不同的。按試驗方法，改變氧化反應(yīng)溫度，在 1080C水浴中（溫度間 隔10C）加熱20min。數(shù)據(jù)見表2。表2氧化反應(yīng)溫度對吸光度的影響溫度/ C01020304050607080A00.0680.1360.2010.2630.3090.3160.3120.258由上表數(shù)據(jù)繪制以溫度C）為橫坐標(biāo)，吸光度（A）為縱坐標(biāo)作工作曲線如圖2。溫虔(t)氣化反應(yīng)溫度影響曲線圖2氧化反應(yīng)溫度影響曲線測定結(jié)果表明，在5070C溫度范圍內(nèi)，反應(yīng)體系具有較大吸光度且穩(wěn)定， 選擇氧化反應(yīng)溫度為60C。氧化反應(yīng)溫

36、度高于70E時，由于丙二醛被進一步氧化 生成酸，導(dǎo)致體系吸光度下降。3、顯色酸度顯色反應(yīng)的酸度條件同樣直接影響顯色反應(yīng)程度。在反應(yīng)體系中加入0. 15mol/L HSQ溶液分別為0.02.0mL的用量(用量間隔0.2mL)條件下，按試驗 方法測定不同酸度對吸光度的影響。表3顯色酸度對吸光度的影響HSQ用量/mL0.20.40.60.8A00.0620.1310.2030.284續(xù)表2"Sd用量/mL1.01.21.41.61.82.0A0.3320.4460.4510.4480.4300.409由上表數(shù)據(jù)繪制以0.15mol/L H 2SO用量（mL為橫坐標(biāo)，吸光度（A）為縱坐標(biāo)作工

37、作曲線如圖3圖3顯色酸度對吸光度的影響曲線mol/L測定結(jié)果表明，在0.15mol/LH 2SO4溶液用量為1.21.6mL范圍內(nèi)，體系的吸 光度較大且穩(wěn)定，故采用0.15mol/L H 2SO溶液用量為1.4mL。4、顯色劑用量顯色劑硫代巴比妥酸的用量對測定體系吸光度的影響顯著。在體系中分別加入05.0mL 5g/L硫代巴比妥酸溶液（用量間隔0.5mL），按試驗方法測定溶液的吸 光度。表4顯色劑用量對吸光度的影響顯色劑/mL01.02.03.04.05.0A0.000.1890.2830.3090.3190.315由上表數(shù)據(jù)繪制以顯色劑用量（mL）為橫坐標(biāo)，吸光度（A）為縱坐標(biāo)作工作曲線如圖

38、4圖4顯色劑用量對吸光度的影響曲線結(jié)果表明，當(dāng)顯色劑硫代巴比妥酸的用量在 3.5mL以上時，測定體系的吸光 度較大且保持穩(wěn)定，實際測定時選用顯色劑硫代巴比妥酸的用量為4.0mL。5、工作曲線分別取不同量（07mL）的5.33mg/L山梨酸標(biāo)準(zhǔn)液于25mL比色管中，以下試 驗方法操作，繪制工作曲線如圖5所示。表5工作曲線表濃度1.21.4/ 卩 g/mL0.00.20.40.60.81.0A00.0830.1560.2250.3030.3770.4510.523由上表數(shù)據(jù)繪制以濃度（卩g/mL）為橫坐標(biāo)，吸光度（A）為縱坐標(biāo)作工作曲 線曲線如圖5。工作曲線表圖5工作曲線結(jié)果表明在線性范圍內(nèi)吸光度

39、與山梨酸濃度（卩g/mL）間的關(guān)系為：2A=0.3715c+0.0047 , R =0.9998。四、樣品測定1、樣品溶液的制備和測定方法精確稱取3.9100g已磨細的樣品溶入50m水中，轉(zhuǎn)入100m容量瓶中用蒸餾水 定容、搖勻。移取10m此溶液于250m分液漏斗中，滴加0.15mol/L H 2SQ溶液調(diào) 整pH至2.0，加入l00mL氯仿振蕩提取山梨酸10min。靜置后將大部分氯仿有機相 轉(zhuǎn)移至碘量瓶中，加入5.0g無水NqSO振蕩后靜置。移取上述氯仿溶液50mL轉(zhuǎn)移 至盛有25ml0.25mol/L NaHC03溶液的100m分液漏斗中，振蕩提取山梨酸鈉 5min 后，靜置分層，小心分離棄去氯仿層，得25mL羊品水溶液待測定；以不加樣品的 空白同上處理作空白液，進一步按試驗方法分別測定。2、精密度實驗按1中擬定的樣品溶液的制備和測定方法，對擬合含山梨酸防腐劑的樣品（自 制山梨酸添加量分別為0.302、0.501mg/g的蘋果泥）進行了精密度實驗，同一樣 品測定6次，測定結(jié)果見表6。表6精密