微囊化轉(zhuǎn)TH基因人成纖維細(xì)胞腦內(nèi)移植治療帕金森病大鼠模型的研究

1、    微囊化轉(zhuǎn)TH基因人成纖維細(xì)胞腦內(nèi)移植 治療帕金森病大鼠模型的研究        【摘要】目的探討微囊化轉(zhuǎn)酪氨酸羥化酶(TH)基因的細(xì)胞在帕金森病(PD)大鼠模型腦內(nèi)存活、組織反應(yīng)及對(duì)異常行為的治療效果。方法以人TH基因作為目的基因，重組到逆轉(zhuǎn)錄病毒載體感染人成纖維細(xì)胞，將細(xì)胞包裹在APA半透膜中進(jìn)行微囊化后，植入6-羥多巴胺單側(cè)損毀的PD大鼠模型紋狀體內(nèi)，觀察移植物的存活狀況和功能作用16周。結(jié)果體外和植入體內(nèi)的微囊化轉(zhuǎn)基因細(xì)胞具有良好的存活能力。移植微囊化

2、細(xì)胞可以使大鼠異常運(yùn)動(dòng)明顯改善，移植位點(diǎn)周圍的免疫反應(yīng)較小。結(jié)論微囊化對(duì)轉(zhuǎn)基因細(xì)胞異種移植以進(jìn)行基因治療具有顯著意義?！娟P(guān)鍵詞】帕金森??；基因治療；酪氨酸羥化酶；人成纖維細(xì)胞；微囊；大鼠【中分類號(hào)】R74.25【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A【文章編號(hào)】0529-1356(2000)04-317 AN EXPERIMENTAL STUDY ON GENE THERAPY WITHINTRACEREBRAL TRANSPLANTATION OF MICROCAPSULATEDHUMAN FIBROBLASTS EXPRESSING TH GENEIN RAT MODEL OF PARKINSON DISEASE

3、DAI Xiao-lingZHANG Jin-luXU Qun-yuanZHAO Chun-liZHAO Huan-yingSUN Xiao-hongZHENG Shao-peng（Beijing Institute for Neuroscience, Capital University of Medical Sciences, Beijing 100054, China）【Abstract】ObjectivesThe aim of this study was to evaluate the survival of the grafts, their immune response fro

4、m hostissue and improvement of the locomotion after the intracerebral transplantation of microcapsulated genetically modified cells in the rat model of Parkinson Disease(PD). MethodsThe human tyrosine hydroxylase(TH) gene was recombined into a retrovirus vector and the newly constructed vector was t

5、hen transfected into primary cultured human fibroblasts in vitro.These human fibroblasts were microcapsulated by the alginate-polylysine-alginate(APA)semipermeable membrane. The rat model of PD was made by unilateral 6-OHDA injection in the midbrain. These microcapulated genetically modified human f

6、ibroblasts were transplanted into the brain of the rat models. ResultsThe microcapsulated cells could survive well in vivo at least 16 weeks. The grafting of these cells could induce a marked decrease in abnormal locomotion for the animal models and make a less immunorejection from host tissue. Conc

7、lusionThe APA-microcapsulation may help gene therapy by use of xenograft with genetically modified cells.【Key words】Parkinson disease; Gene therapy; Tyrosine hydroxylase; Human fibroblast; Microcapsule; Rat帕金森病(Parkinson Disease, PD)的主要病理特征為中腦黑質(zhì)多巴胺(dopamine, DA)能神經(jīng)元變性，使紋狀體內(nèi)的DA顯著減少而出現(xiàn)一系列臨床癥狀。將分泌多巴胺的胚

8、胎中腦細(xì)胞或腎上腺髓質(zhì)細(xì)胞進(jìn)行紋狀體內(nèi)移植，能一定程度地逆轉(zhuǎn)或改善患者的癥狀。此外，新近發(fā)展起來(lái)的基因治療方法，即利用各種轉(zhuǎn)基因技術(shù)，將外源性基因如DA合成限速酶-酪氨酸羥化酶(tyrosine hydroxylase,TH)基因轉(zhuǎn)入某種體外培養(yǎng)的細(xì)胞內(nèi)，再將此基因工程細(xì)胞植入模型動(dòng)物腦內(nèi)，使之在紋狀體表達(dá)TH1，2，而達(dá)到提高DA水平的目的。但是，大量研究證明，無(wú)論用哪種細(xì)胞植入腦內(nèi)都存在宿主免疫排斥的問(wèn)題，在進(jìn)行同種異體基因和異種基因細(xì)胞移植中尤為顯著3。現(xiàn)有報(bào)道，將丙烯共聚物微囊植入大鼠腦內(nèi)誘導(dǎo)的宿主組織反應(yīng)較小。這種通過(guò)分子量界值為50 000道爾頓的微囊半透膜容許營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、生長(zhǎng)因子和

9、神經(jīng)遞質(zhì)等小分子自由擴(kuò)散，但能阻止大分子的免疫球蛋白和宿主細(xì)胞跨過(guò)微囊膜攻擊移植細(xì)胞，從而對(duì)移植物提供免疫隔離4，故用微囊包裹的細(xì)胞移植勢(shì)必大大減少宿主的免疫排斥并提高移植物的存活率。據(jù)此，本研究擬對(duì)轉(zhuǎn)TH基因的人成纖維細(xì)胞進(jìn)行藻酸鹽-多聚賴氨酸-藻酸鹽(alginate-poly-lysine-alginate,APA)半透膜聚合物微囊包裹后植入大鼠紋狀體內(nèi)，以探求用成纖維細(xì)胞進(jìn)行腦內(nèi)異種移植治療帕金森病實(shí)際應(yīng)用的可能性。材料和方法1.大鼠PD模型的建立將體重190200g的雌性SD大鼠(首都醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物部提供)用6%水和氯醛(0.05ml/kg腹腔注射)麻醉，置于腦立體定位儀行開(kāi)顱手術(shù)

10、；在腦內(nèi)兩點(diǎn)定位注射1%6-OHDA(6-hydroxydopamine, Sigma)各4l5，以損毀腦一側(cè)黑質(zhì)神經(jīng)元。術(shù)后1周，大鼠頸部皮下注射Apomorphine(0.05mg/kg)，然后置于PD大鼠模型旋轉(zhuǎn)記錄儀6上進(jìn)行行為學(xué)檢測(cè)。每周1次，每次40min，連續(xù)測(cè)量4周；出現(xiàn)向損毀對(duì)側(cè)旋轉(zhuǎn)次數(shù)大于7圈min的大鼠可視為PD動(dòng)物模型，共38只，供腦移植用。2.運(yùn)載細(xì)胞人成纖維細(xì)胞的培養(yǎng)取臨床消毒后流產(chǎn)胎兒(胎齡4個(gè)月)皮膚，剪碎后用0.1%胰蛋白酶消化30min，血清中和后離心去上清；Hank液洗12遍，用含10%胎牛血清的DEME培養(yǎng)基(DEMEFCS，GibcoBL)反復(fù)吹打，制

11、成細(xì)胞懸液；將其按5×1054 DNA連接酶作用(12，過(guò)夜)下進(jìn)行連接反應(yīng)，兩者連接后可使hTH基因插入載體中。然后轉(zhuǎn)化到XL1-Blue大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞。挑選轉(zhuǎn)化后過(guò)夜生長(zhǎng)的12個(gè)連接轉(zhuǎn)化菌落，用煮沸法從中小量提取質(zhì)粒DNA，并用限制性內(nèi)切酶EcoRI、XhoI和BamHI進(jìn)行酶切和電泳分析，以驗(yàn)證質(zhì)粒是否攜帶hTH基因和其插入方向是否正確。經(jīng)確認(rèn)后，用堿裂解法大量提取質(zhì)粒pLhTHSN以用于基因轉(zhuǎn)移。4.pLhTHSN質(zhì)粒轉(zhuǎn)染培養(yǎng)的人成纖維細(xì)胞用含hTH基因的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體pLhTHSN用磷酸鈣沉淀法轉(zhuǎn)染單向包裝細(xì)胞系-2，48h后收集含-2細(xì)胞出芽的病毒顆粒的上清，感染雙相

12、包裝細(xì)胞系PA317；用G418對(duì)PA317進(jìn)行篩選，對(duì)形成的抗G418細(xì)胞克隆分別進(jìn)行擴(kuò)增培養(yǎng)，并用抗人TH的單克隆抗體進(jìn)行細(xì)胞免疫組織化學(xué)染色；當(dāng)抗性細(xì)胞表現(xiàn)為T(mén)H免疫組織化學(xué)染色陽(yáng)性而表明有TH基因表達(dá)后，大量擴(kuò)增培養(yǎng)，收集病毒上清；用整合有pLhTHSN的PA317細(xì)胞克隆產(chǎn)生的病毒上清感染人成纖維細(xì)胞，用抗人TH抗體進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色；經(jīng)證實(shí)能表達(dá)TH后，將細(xì)胞大量擴(kuò)增，制成細(xì)胞懸液用于微囊化處理和大鼠紋狀體內(nèi)移植。5.微囊化轉(zhuǎn)人TH基因的成纖維細(xì)胞將轉(zhuǎn)染的人成纖維細(xì)胞送301醫(yī)院臨床基礎(chǔ)研究所，用微囊靜電發(fā)生器進(jìn)行微囊化處理，微囊為APA微囊7。6.轉(zhuǎn)入TH基因的成纖維細(xì)胞大鼠紋

13、狀體內(nèi)移植將PD大鼠模型作為宿主動(dòng)物分為3組，微囊化人成纖維細(xì)胞移植組(組)和未微囊化人成纖維細(xì)胞移植組(組)各15只，空囊移植組(C組)8只作為對(duì)照組。3組動(dòng)物均經(jīng)腹腔注射6%水和氯醛(0.05ml/kg)麻醉，置于腦立體定位儀上，進(jìn)行開(kāi)顱手術(shù)。將上述轉(zhuǎn)入TH基因的微囊化和未微囊化的人成纖維細(xì)胞，按照每只1×106的細(xì)胞數(shù)，分別為15l和20l細(xì)胞懸液，分兩點(diǎn)立體定位注射到大鼠PD模型一側(cè)腦內(nèi)紋狀體(尾殼核)內(nèi)。在對(duì)照組的大鼠腦內(nèi)移植空囊懸液。7.行為學(xué)及形態(tài)學(xué)檢測(cè)在經(jīng)相同方法進(jìn)行移植后，術(shù)后動(dòng)物分別存活216周。對(duì)上述3組植入不同移植物的動(dòng)物按照不同的存活時(shí)間分成小組，所有動(dòng)物都

14、在術(shù)后按前述制作模型的方法進(jìn)行旋轉(zhuǎn)實(shí)驗(yàn)。根據(jù)不同的存活期灌殺動(dòng)物，即經(jīng)升主動(dòng)脈先注入溫生理鹽水200ml，然后注入4含4%多聚甲醛的0.1mol/L磷酸緩沖液(pH7.4)250 ml；灌殺后立即取腦，置于含30%蔗糖的4%多聚甲醛中后固定24h后，進(jìn)行冰凍連續(xù)切片(50m)，將切片分組后分別行TH，膠質(zhì)細(xì)胞酸性蛋白(glial-fibrillary-acidic-protein,GFAP)和CD8免疫組織化學(xué)染色，即順序?qū)⑶衅敕謩e用小鼠抗TH抗體(11 000，Sigma公司)、GFAP抗體和單克隆小鼠抗T細(xì)胞CD8抗體(1100，DAKO公司)作為一抗、用生物素標(biāo)記的羊抗鼠IgG抗體(1

15、300,Vector公司)作為二抗和HRP標(biāo)記的抗生物素復(fù)合物作為三抗的0.1mol/L磷酸緩沖液中，然后用含0.5%DAB的0.1mol/L磷酸緩沖液進(jìn)行染色，以顯示其免疫活性。染色后取部分切片進(jìn)行焦油固紫復(fù)染。結(jié)果     1新構(gòu)建的質(zhì)粒pLhTHSN基因，其中TH基因插入方向正確Fig.1 The gene map of the reconstructed plasmid pLhTHSN.2.轉(zhuǎn)基因成纖維細(xì)胞的基因表達(dá)將新構(gòu)建的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體pLhTHSN導(dǎo)入培養(yǎng)的人成纖維細(xì)胞，23d后，TH免疫組織化學(xué)方法染色可見(jiàn)50%細(xì)胞被染成棕色(2)，顯示

16、有TH表達(dá)。3.微囊化細(xì)胞的體外培養(yǎng)經(jīng)微囊包裹后，光鏡下體外觀察可見(jiàn)細(xì)胞存活(3)，細(xì)胞密度隨培養(yǎng)時(shí)間增長(zhǎng)；存活細(xì)胞中也可見(jiàn)細(xì)胞的重影和碎片，這主要發(fā)生在囊的中央。對(duì)微囊化細(xì)胞的TH染色在任何時(shí)間均呈陽(yáng)性。    2pLhTHSN轉(zhuǎn)染人成纖維細(xì)胞后的TH免疫細(xì)胞化學(xué)染色。示TH反應(yīng)陰性細(xì)胞，其他均為T(mén)H反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞×200Fig.2The immunocytochemical staining of TH in pLhTHSN transfected human fibroblasts. Arrows indicate TH-negative

17、fibroblasts, the other fibroblasts are TH-positive.×200    3微囊化轉(zhuǎn)TH基因的人成纖維細(xì)胞×40Fig.3 Microcapsulated TH-expressed human fibroblast.×40    4移植后PD大鼠模型腦切片。TH免疫細(xì)胞化學(xué)染色。a. 微囊化轉(zhuǎn)TH基因細(xì)胞移植組(組)的TH免疫細(xì)胞化學(xué)染色，術(shù)后存活2周。示微囊化的細(xì)胞。示微囊×200b. 未微囊化轉(zhuǎn)TH基因細(xì)胞移植組(組)的TH免疫

18、細(xì)胞化學(xué)染色，術(shù)后存活16周。示移植物×100Fig.4 Photomicrograph of the immunocytochemical staining of TH in the brain section of the PD rat model after transplantation.a, The immunocytochemical staining of TH in microcapsulated TH-expressed human fibroblasts transplantation group( Group).The arrow indicates the m

19、icrocapsulated fibroblasts. The triangle indicates the microcapsule. The post-transplantation time is 2 weeks.×200b, The immunocytochemical staining of TH in non-microcapsulated TH-expressed human fibroblasts transplantation group( Group). The arrow indicates the graft. The post-transplantation

20、 time is 16 weeks.×100    5移植后PD大鼠模型腦切片CD8免疫細(xì)胞化學(xué)染色。a.微囊化轉(zhuǎn)基因細(xì)胞移植組(組)的CD8免疫細(xì)胞化學(xué)染色，術(shù)后存活2周。示微囊×100b.未微囊化轉(zhuǎn)基因細(xì)胞移植組(組)的CD8免疫細(xì)胞化學(xué)染色，術(shù)后存活2周。示移植物×100Fig.5 Photomicrograph of the immunocytochemical staining of CD8 in the brain section of the PD rat model after transplantation

21、.a, The immunocytochemical staining of CD8 in microcapsulated TH-expressed human fibroblasts transplantation group( Group). The triangle indicates the microcapsule. The post-transplantation time is 2 weeks. ×100b, The immunocytochemical staining of CD8 in non-microcapsulated TH-expressed human

22、fibroblast transplantation group( Group). The arrow indicates the graft. The post-transplantation time is 2 weeks. ×100    6移植后PD大鼠模型腦切片GFAP免疫細(xì)胞化學(xué)染色。a.微囊化轉(zhuǎn)基因細(xì)胞移植組(組)的GFAP免疫細(xì)胞化學(xué)染色，術(shù)后存活4周。示微囊×100b.未微囊化轉(zhuǎn)基因細(xì)胞移植組(組)的GFAP免疫細(xì)胞化學(xué)染色，術(shù)后存活4周。示星型膠質(zhì)細(xì)胞示移植物×100Fig.6 Photomicrogra

23、ph of the immunocytochemical staining of GFAP in the brain section of the PD rat model after transplantation.a, The immunocytochemical staining of GFAP in microcapsulated TH-expressed human fibroblasts transplantation group( Group). The triangle indicates the microcapsule. The post-transplantation t

24、ime is 4 weeks.×100b,The immunocytochemical staining of GFAP in non-microcapsulated TH-expressed human fibroblasts transplantation group( Group). The arrows indicate the astrocytes. The triangle indicates the graft. The post-transplantation time is 4 weeks. ×1004.動(dòng)物行為的檢測(cè)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物組和組在移植手術(shù)后1周行為即有

25、改變：組動(dòng)物的旋轉(zhuǎn)圈數(shù)由術(shù)前12.1圈min(n=15)減少至3.7圈min(n=15)，持續(xù)到16周；組動(dòng)物的旋轉(zhuǎn)圈數(shù)由術(shù)前11.9圈min(n=15)減少至5.6圈min(n=13)；C組動(dòng)物的旋轉(zhuǎn)圈數(shù)術(shù)前術(shù)后均為13.7圈min(n=8)(7)。     7PD動(dòng)物模型腦內(nèi)移植轉(zhuǎn)基因成纖維細(xì)胞前后單側(cè)旋轉(zhuǎn)測(cè)試Fib.7 The rotation test of PD rat modelpre-and post-transplantation.5.腦內(nèi)移植物形態(tài)學(xué)檢測(cè)在動(dòng)物不同存活期腦切片上可見(jiàn)：組動(dòng)物腦內(nèi)可見(jiàn)呈球形微囊輪廓的移植物，囊中有深棕色TH

26、免疫反應(yīng)的成纖維細(xì)胞(4a)，移植物周圍(囊外)有TH免疫反應(yīng)物質(zhì)浸潤(rùn)；移植物細(xì)胞和浸潤(rùn)區(qū)的大體數(shù)量和范圍在16周內(nèi)無(wú)明顯變化。組動(dòng)物腦內(nèi)移植物也呈深棕色TH免疫反應(yīng)，周圍也有TH免疫反應(yīng)物質(zhì)浸潤(rùn)，但隨時(shí)間延長(zhǎng)其表達(dá)下降，從第8周起范圍明顯減少，第16周時(shí)僅見(jiàn)少量(4b)，有時(shí)還出現(xiàn)壞死。C組動(dòng)物腦內(nèi)未出現(xiàn)TH陽(yáng)性反應(yīng)。組動(dòng)物移植位點(diǎn)周圍GFAP和CD8免疫反應(yīng)相對(duì)較強(qiáng)烈，出現(xiàn)深棕色CD8陽(yáng)性顆粒(5b)，GFAP陽(yáng)性的星形膠質(zhì)細(xì)胞多且明顯(6b)；組動(dòng)物和C組動(dòng)物移植位點(diǎn)周圍GFAP和CD8免疫反應(yīng)相似，CD8陽(yáng)性顆粒(5a)和GFAP陽(yáng)性細(xì)胞(6a)數(shù)量和范圍少于組動(dòng)物。討論本研究是將能表

27、達(dá)TH基因的pLhTHSN質(zhì)粒轉(zhuǎn)入人成纖維細(xì)胞，再經(jīng)APA人工半透膜包囊后植入PD大鼠模型紋狀體內(nèi)。實(shí)驗(yàn)證明，它與未微囊化的轉(zhuǎn)基因細(xì)胞一樣能有效改善PD大鼠模型的不正常運(yùn)動(dòng)行為。不僅如此，微囊化的異種轉(zhuǎn)TH基因細(xì)胞在腦內(nèi)引起的免疫排斥反應(yīng)比未微囊化的細(xì)胞小，預(yù)示其能存活和表達(dá)更長(zhǎng)時(shí)間。因此可以認(rèn)為，APA半透膜微囊包裹既對(duì)轉(zhuǎn)基因細(xì)胞的營(yíng)養(yǎng)無(wú)明顯不利影響，又能在異體移植中對(duì)宿主的免疫排斥反應(yīng)起隔離作用。從以往研究8，9看，植入的微囊化細(xì)胞在體內(nèi)的存活狀況可能與某些因素有一些關(guān)系。其中靶細(xì)胞選擇有一定的作用。有報(bào)道指出，成纖維細(xì)胞是一種廣泛使用、適合于基因工程改造的供移植的細(xì)胞，即它易于獲取、能夠

28、在體外培養(yǎng)、植入腦內(nèi)不易形成腫瘤。本研究證明，在體內(nèi)和體外不同的環(huán)境中，轉(zhuǎn)入TH基因的成纖維細(xì)胞在微囊內(nèi)皆存活良好，能較好表達(dá)TH活性。由此可知，成纖維細(xì)胞是一種可供臨床基因治療選擇的運(yùn)載細(xì)胞。其次，移植位點(diǎn)選擇也有一定影響。有報(bào)道說(shuō)，當(dāng)移植微囊化PC12細(xì)胞治療PD時(shí)，移入側(cè)腦室并無(wú)效果，而移入紋狀體內(nèi)則有明顯效果10，這說(shuō)明囊內(nèi)細(xì)胞分泌的物質(zhì)必須擴(kuò)散到靶組織中才有作用。本研究實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)了微囊化轉(zhuǎn)基因細(xì)胞可在紋狀體內(nèi)長(zhǎng)期存活，可以明顯改善動(dòng)物模型的單側(cè)旋轉(zhuǎn)運(yùn)動(dòng)。但從切片看，其TH擴(kuò)散程度有限。因此，多點(diǎn)、多量定位移植是使用微囊化細(xì)胞移植必需考慮的因素。移植細(xì)胞的數(shù)量和體積直接影響到移植手術(shù)

29、的復(fù)雜程度和移植物的存活度。大鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)中神經(jīng)活性物質(zhì)的需求量相對(duì)較少，一般移植的細(xì)胞數(shù)目約為106107個(gè)，因此從理論上講，微囊技術(shù)更適用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)的移植。本研究各組所移植的細(xì)胞數(shù)目基本相同(1×106)，但由于微囊化后所占體積增大，因此移植物的體積比以往實(shí)驗(yàn)有所加大11(20l)。體積加大對(duì)腦組織的影響尚需進(jìn)一步觀察，但從本研究看，尚未見(jiàn)到其有顯著影響。盡管腦是免疫“豁免”部位，但這種“豁免”并不是絕對(duì)的3。本實(shí)驗(yàn)中未微囊化細(xì)胞組移植部位TH免疫反應(yīng)細(xì)胞在第8周后顯著減少，呈現(xiàn)一定的免疫排斥現(xiàn)象；而微囊化細(xì)胞組則未見(jiàn)明顯排斥，這說(shuō)明人工微囊確實(shí)起到了免疫隔離的作用。本研

30、究顯示微囊化組盡管比未微囊化組的免疫反應(yīng)較弱，但仍然存有免疫反應(yīng)。這表示微囊并不能做到絕對(duì)的免疫隔離。微囊對(duì)巨嗜細(xì)胞和其他免疫細(xì)胞所分泌的一些低分子量的物質(zhì)，如對(duì)細(xì)胞具有非特異性毒性的細(xì)胞因子(1030kD)、自由基、H2O2和NO等并不能起到隔離作用12；微囊壁上的孔徑并不均一，呈正態(tài)分布，部分小孔面積足以允許抗體和補(bǔ)體通過(guò)13。這些都會(huì)影響移植物在體內(nèi)的長(zhǎng)期存活，但微囊化后的異種細(xì)胞在植入腦內(nèi)后遭受宿主的免疫排斥畢竟較小。另外，還需進(jìn)一步研究營(yíng)養(yǎng)支持對(duì)微囊化轉(zhuǎn)基因細(xì)胞的影響。Tomac等14曾報(bào)告，在腦內(nèi)用膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(GDNF)對(duì)黑質(zhì)紋狀體多巴胺系統(tǒng)具有保護(hù)和恢復(fù)雙重功能。已

31、證實(shí)將牛嗜鉻細(xì)胞與一種分泌NGF的細(xì)胞系一同微囊化后移植，可顯著增加DA的釋放，改善異常的旋轉(zhuǎn)行為15。因此將來(lái)應(yīng)考慮用轉(zhuǎn)基因細(xì)胞和分泌生長(zhǎng)因子的細(xì)胞一同微囊化后移植以實(shí)施基因治療的戰(zhàn)略。無(wú)論如何，微囊化轉(zhuǎn)基因細(xì)胞異體移植對(duì)PD動(dòng)物模型的基因治療顯示了有價(jià)值的應(yīng)用前景，這對(duì)基因治療的臨床應(yīng)用具有重要意義。本實(shí)驗(yàn)中微囊化處理得到了301醫(yī)院臨床基礎(chǔ)研究所薛毅瓏教授的大力幫助，謹(jǐn)致謝意。本文26見(jiàn)插第8頁(yè)【基金項(xiàng)目】國(guó)家自然科學(xué)基金國(guó)際合作項(xiàng)目【作者簡(jiǎn)介】戴曉玲(1972)，女(漢族)，吉林市人，碩士，講師戴曉玲（首都醫(yī)科大學(xué)北京神經(jīng)科學(xué)研究所，北京100054）張進(jìn)祿（首都醫(yī)科大學(xué)北京神經(jīng)科學(xué)研

32、究所，北京100054）徐群淵（首都醫(yī)科大學(xué)北京神經(jīng)科學(xué)研究所，北京100054）趙春禮（首都醫(yī)科大學(xué)北京神經(jīng)科學(xué)研究所，北京100054）趙煥英（首都醫(yī)科大學(xué)北京神經(jīng)科學(xué)研究所，北京100054）孫曉紅（首都醫(yī)科大學(xué)北京神經(jīng)科學(xué)研究所，北京100054）鄭少鵬（首都醫(yī)科大學(xué)北京神經(jīng)科學(xué)研究所，北京100054）參考文獻(xiàn)1During MJ, Naegele JK, O'Malley KL, et al. Long-term correction of rat model of Parkinsoniam rats by a HSV vector expressing tyrosine

33、hydroxylaseJ. Science, 1994,226(5189):1399-1403.2Jiao SS, Gurevich V, Wolff JA. Long-term correction of rat model of Parkinson's disease by gene therapyJ. Nature, 1993,362(6419):450-453.3Duan WM. Immunological and inflammatory responses against intrastriatal neural grafts in the ratJ. Lund:Lund

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35、opamine-lesioned striatumJ. Neuroscience,1992,46(4)：943-957.6王克權(quán)，張進(jìn)祿，徐群淵，等.BIN-1型大鼠帕金森病旋轉(zhuǎn)記錄儀的研制J.醫(yī)療設(shè)備信息，1995，10(4)：13.7Sagen J. Chromaffin cell transplantation. In:Lanza RP, Chick WL(eds). Yearbook of Cell and Tissue TransplantationM. Dordrecht:Kluwer Academic Press,1996:71-89.8Aebischer P, Tresco PA, Winn SR, et al. Long-term cross-species brain transplantation of a polymer-encapsulated dopamine secreting cell lineJ. Experimental Neurology,1991,111(3):269-275.9Hughes M, Vassilakos A, Andrews DW,