光學顯微鏡的使用和革蘭氏染色

1、光學顯微鏡的使用和革蘭氏染色作者：郭森 地址：山東大學生命科學學院微生物樓341微生物實驗室 摘要：這次實驗我們進行的是微生物革蘭氏染色，并用光學顯微鏡中的油鏡對其進行觀察，目的是了解并掌握革蘭氏染色和光學顯微鏡的原理和簡單操作。首先我們使用接種環(huán)和酒精燈將金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和枯草桿菌三種微生物固定到一個載玻片上；然后使用革蘭氏染色法對其進行染色；最后使用光學顯微鏡對其形態(tài)和顏色進行觀察。實驗結(jié)果是枯草桿菌和金黃色葡萄球菌顯紫色為革蘭氏陽性菌，大腸桿菌顯紅色為革蘭氏陰性菌。結(jié)果表明，不同微生物的細胞壁有著兩種不同的結(jié)構(gòu)和組成，因此，可以通過革蘭氏染色對微生物進行分類和鑒別。關(guān)鍵詞：革蘭氏

2、染色；光學顯微鏡；油鏡前言：微生物的細胞壁由于其肽聚糖層厚度、脂質(zhì)的含量以及其結(jié)構(gòu)的不同，對染料有著不同的滯留能力，分別顯革蘭氏陽性和革蘭氏陰性，經(jīng)過革蘭氏染色后分別顯藍紫色和紅色，本次實驗即通過對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和枯草桿菌進行革蘭氏染色，希望可以通過顏色分辨其為革蘭氏陽性還是陰性，以此來增進我們對革蘭氏染色的理解和掌握。本次實驗首先要進行制片然后對三種微生物進行革蘭氏染色，之后是使用光學顯微鏡中的油鏡（為了不使通過物鏡的光線因折射和反射而減少，點上香柏油和二甲苯）對經(jīng)過革蘭氏染色后的三種微生物進行形態(tài)和顏色的觀察。本實驗報告首先介紹了本次實驗的材料和方法，然后是實驗結(jié)果及其分析，最后

3、是對實驗的小結(jié)。1 材料與方法1、1 材料1、1、1 菌種金黃色葡萄球菌，枯草芽孢桿菌，大腸桿菌1、1、2 溶液和試劑香柏油，二甲苯，革蘭氏染液，草酸銨結(jié)晶紫染液，盧戈式碘液，95%乙醇，番紅復染液等1、1、3 儀器和其他用品普通光學顯微鏡，擦鏡紙，酒精燈，載玻片，雙層瓶（內(nèi)裝香柏油和二甲苯），接種環(huán)，試管架，鑷子，濾紙，滴管等。1、2 步驟和方法1、2、1 制片在潔凈玻片上分別滴上三滴蒸餾水，取活躍生長期菌種按常規(guī)方法（使用接種環(huán)刮取菌苔和酒精燈）涂片、干燥和固定，注意，涂片要均勻，使之成一薄層，要使用鑷子夾著玻片將其放到酒精燈上干燥和固定，以免燙傷。1、2、2 染色1、2、2、1 初染滴加

4、草酸銨結(jié)晶紫染液覆蓋凃菌部位，染色12 min后傾去染液，水洗至流出水無色。1、2、2、2 媒染先用盧戈式碘液沖去殘留水跡，再用碘液覆蓋1 min，傾去碘液，水洗至流出水無色。1、2、2、3 脫色將玻片上殘留水用吸水紙吸去，在白色背景下用滴管流加95%的乙醇脫色（一般2030s），當流出液無色時立即用水洗去乙醇。1、2、2、4 復染將玻片上殘留水用吸水紙吸去，用番紅復染液染色2 min，水洗，洗去殘水晾干。1、2、3 鏡檢在玻片凃菌部位滴加香柏油后，使用光學顯微鏡中的油鏡進行觀察。2 結(jié)果與分析2、1 實驗結(jié)果見表1和圖13 表1 革蘭氏染色結(jié)果記錄表 菌名菌體顏色菌體形態(tài)結(jié)果（G+,G-）金

5、黃色葡萄球菌紫紅色球狀，多聚集成團G+大腸桿菌紅色橢圓狀G-枯草芽孢桿菌紫色雙桿狀G+圖1 金黃色葡萄球菌顯微觀察圖圖2 大腸桿菌顯微觀察圖圖3 枯草芽孢桿菌顯微觀察圖2、2 結(jié)果分析本次實驗的結(jié)果讓我們對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和枯草芽孢桿菌的外部形態(tài)以及革蘭氏陽性與陰性有了一個初步的了解。實驗結(jié)果表明，金黃色葡萄球菌為一般聚集成團，大腸桿菌為橢圓狀桿菌而枯草芽孢桿菌為雙桿菌，同時他們分別為革蘭氏陽性菌、革蘭氏陰性菌和革蘭氏陽性菌。因此，金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌的細胞壁中肽聚糖的含量較高，壁比較厚且脂質(zhì)含量低；大腸桿菌的細胞壁中肽聚糖含量低，交聯(lián)度底，壁比較薄且脂質(zhì)含量高。因此，通過革蘭

6、氏染色和顯微觀察，可以對三種不同的微生物的外部形態(tài)和細胞壁結(jié)構(gòu)有一個初步的了解。3 小結(jié)本次實驗主要是通過對三種微生物菌種進行革蘭氏染色并在油鏡下進行觀察，來使我們對革蘭氏染色和光學顯微鏡有一個更深的了解并掌握該過程中的制片、染色及油鏡觀察等實驗方法。本次實驗中，有幾點需要注意的地方，分別是：在制片時，一開始蒸餾水的量應當適中，之后用接種環(huán)涂片時要涂布均勻，使之成一薄層；對玻片上菌種進行干燥和固定時應當注意要用鑷子夾住玻片，以免燙傷皮膚；對菌種進行革蘭氏染色時，注意不要讓染料沾到自己的衣物上；進行革蘭氏染色的時間不可過長；使用酒精時注意避免靠近火焰；使用接種環(huán)刮取菌苔時注意無菌操作，要在酒精燈火焰旁對試管“封口”；染色結(jié)束后要洗手；使用油鏡前后要注意對油鏡鏡頭的清潔。經(jīng)過這次實