檢驗方法驗證和確認管理規(guī)程

1、分發(fā)部門及份數：質量管理部1份目的：明確檢驗方法的驗證和確認的管理規(guī)程，確保所采用的檢驗方法科學、合理，符合檢驗要求并能有效控制藥品的內在質量。范圍：僅適用于本公司對物料、產品的理化檢驗方法的驗證和確認；清潔驗證方法的驗證。職責：質量管理部QC、QA人員、質量管理部負責人對本規(guī)程的實施負責。內容：1. 方法驗證及確認工作職責分工1.1 質量控制部QC負責驗證或確認方案的起草、驗證或確認工作具體實施以及報告的填寫。1.2質量控制部負責人或其指定人員負責驗證或確認方案、報告的審核，組織驗證或確認工作的實施，對驗證或確認工作中出現的問題及時糾正。1.3 質量保證部QA負責驗證或確認方案、報告的審核，

2、監(jiān)督確認工作實施，對確認工作中出現的問題提出改進意見并監(jiān)督落實。確保檢驗方法驗證或確認程序達到符合性要求，程序被遵照執(zhí)行，并且方法的預定用途被有效的且以文件記錄的數據所支持。1.4 質量管理部負責人負責驗證或確認方案及報告的審核批準。2 方法驗證2.1 定義：方法驗證就是根據檢驗項目的要求，預先設置一定的驗證內容和驗證標準要求，并通過設計合理的實驗來驗證所采用的分析方法是否符合檢驗項目的要求。2.2 目的：方法驗證是證明采用的方法適合于相應檢測要求。2.3 適用范圍：符合下列情形之一的，應當對檢驗方法進行驗證：（1）采用新的檢驗方法；（2）檢驗方法需變更的；（3）采用中華人民共和國藥典及其他法

3、定標準未收載的檢驗方法；（4）法規(guī)規(guī)定的其他需要驗證的檢驗方法。頁次：共 11 頁 第 2 頁2.3.1 在建立藥品質量標準時，應對分析方法中的各檢驗項目進行完整的驗證。2.3.2 當藥品生產工藝變更時，制劑的組分變更、原分析方法修訂時，可根據變更的內容決定對分析方法進行部分驗證還是完全驗證。2.3.3 當原料藥合成工藝發(fā)生變更時，可能引入新的雜質，雜質檢查方法和含量測定方法的專屬性就需要進行驗證，以證明有關物質檢查方法能夠檢測新引入的雜質，且新引入的雜質對主成分的含量測定應無干擾。2.3.4 當質量標準中某一項目分析方法發(fā)生部分改變時，如采用高效液相色譜法測定含量時，檢測波長發(fā)生改變，則需要

4、重新進行檢測限、定量限、專屬性、準確度、精密度、線性等內容的驗證，證明修訂后的分析方法的合理可行。2.3.5 當變更達到一定程度時，則需要完整的驗證。如分析方法完全改變，則應按新方法進行完整的驗證。2.4 方法驗證的一般原則2.4.1 通常情況下，檢驗方法需進行方法驗證。對于僅需按照實驗室日常測試操作步驟即可測定的檢驗項目不需進行方法驗證，如外觀、崩解時限、密度、重量、pH值、灰分、裝量、硫酸鹽等。2.4.2 方法驗證的內容應根據檢驗項目的要求，結合所采用分析方法的特點確定。2.4.3 同一檢驗方法用于不同的檢驗項目會有不同的驗證要求。2.5 方法驗證中需要驗證的檢驗項目2.5.1 檢驗項目是

5、為控制藥品質量，保證藥品安全有效而設定的測試項目。根據檢驗項目的設定目的和驗證內容的不同，將需驗證的檢驗項目分類如下：（1）鑒別試驗；（2）雜質的限度檢查；（3）雜質的定量檢查；（4）含量測定，包括原料藥或制劑中有效成分的含量，制劑中其他成分（如防腐劑等）的含量，溶出度與釋放度等檢查中的溶出量以及含量均勻度。除此之外還有一些物理項目的檢測如粒徑分布、旋光度、熔點和硬度，其要求與其它檢驗項目有所不同，通常在進行分析方法驗證應有不同的要求。頁次：共 11 頁 第 3 頁2.5.2 鑒別的目的在于判定被分析物是目標化合物，而非其它物質。用于鑒別的分析方法要求具有較強的專屬性和耐用性。2.5.3 雜質

6、檢查主要用于控制主成分以外的雜質，如無機雜質，有機雜質等。雜質檢查分為限度檢查和定量測定兩部分。用于限度檢查的分析方法驗證側重專屬性、檢測限和耐用性。用于定量測定的分析方法驗證強調專屬性、準確度、精密度、線性、范圍、定量限和耐用性。2.5.4 含量測定對準確度要求較高，因此所采用的分析方法要求具有一定的專屬性、準確度和線性等要求。2.5.5 檢驗項目和驗證內容，詳見下表1：表1 檢驗項目和驗證內容備注：*：已有重現性驗證，不需要驗證中間精密度；*：如一種方法不夠專屬，可用其他檢驗方法予以補充； *：視具體情況予以驗證；“是”表示通常要驗證的項目，“否”表示通常不需要驗證的項目。 3.方法驗證內

7、容主要依據中國藥典2010年版附錄 A藥品質量標準分析方法驗證指導原則。頁次：共 11 頁 第 4 頁3.1 準確度 準確度系指用該方法測定的結果與真實值或參考值接近的程度，一般用回收率（)表示。準確度應在規(guī)定的范圍內測試。3.1.1 驗證方法：準確度應在規(guī)定的范圍內建立，至少用9個測定結果進行評價。例如，設計3個不同濃度，每個濃度各分別制備3份供試品溶液，進行測定。3.1.2 準確度是定量測定的必要條件，因此含量測定、雜質定量測定均需驗證準確度。3.1.3 含量測定準確度的驗證方法3.1.3.1 原料藥可用已知純度的對照品或供試品進行測定，或用本法所得結果與已知準確度的另一個方法測定的結果進

8、行比較。3.1.3.2 制劑可用含巳知量被測物的各組分混合物進行測定。如不能得到制劑的全部組分，可向制劑中加人已知量的被測物進行測定，或用本法所得結果與已知準確度的另一個方法測定結果進行比較。3.1.3.3 如該檢驗方法已經測試并求出了精密度、線性和專屬性，在準確度也可推算出來的情況下，這一項可不必再做。3.1.4 雜質的定量測定準確度驗證方法3.1.4.1 可向原料藥或制劑中加人已知量雜質進行測定。3.1.4.2 如不能得到雜質或降解產物，可用本法測定結果與另一成熟的方法進行比較，如藥典標準方法或經過驗證的方法。3.1.4.3 在不能測得雜質或降解產物的響應因子或不能測得對原料藥的相對響應因

9、子的情況下，可用原料藥的響應因子。應明確表明單個雜質和雜質總量相當于主成分的重量比（)或面積比（)。3.1.5 數據要求應報告已知加人量的回收率（)，或測定結果平均值與真實值之差及其相對標準偏差或可信限。3.2 精密度精密度系指在規(guī)定的測試條件下，同一個均勻供試品，經多次取樣測定所得結果之間的接近程度。精密度一般用偏差、標準偏差或相對標準偏差表示。頁次：共 11 頁 第 5 頁在相同條件下， 由同一個檢驗人員測定所得結果的精密度稱為重復性；在同一個實驗室，不同時間由不同檢驗人員用不同設備測定結果之間的精密度，稱為中間精密度；在不同實驗室由不同檢驗人員測定結果之間的精密度，稱為重現性。3.2.1

10、 驗證方法：精密度可從重復性、中間精密度、重現性三個層次考察。3.2.3 重復性在規(guī)定范圍內，至少用9個測定結果進行評價。例如，設計3個不同濃度，每個濃度各分別制備3份供試品溶液，進行測定，或將相當于100%濃度水平的供試品溶液，用至少測定6次的結果進行評價。3.2.4 中間精密度為考察隨機變動因素對精密度的影響，應設計方案進行中間精密度試驗。變動因素為不同日期、不同分析人員、不同設備。3.2.5 重現性法定標準采用的檢驗方法，或在不同實驗室之間進行方法轉移時，應進行重現性試驗。例如，建立藥典分析方法時，通過協(xié)同檢驗得出重現性結果。協(xié)同檢驗的目的、過程和重現性結果均應記載在起草說明中。應注意重

11、現性試驗用的樣品本身的質量均勻性和貯存運輸中的環(huán)境影響因素，以免影響重現性結果。3.2.6 數據要求均應報告標準偏差、相對標準偏差和可信限。3.3 專屬性專屬性系指在其他成分(如雜質、降解產物、輔料等）可能存在下，采用的方法能正確測定出被測物的特性。鑒別反應、雜質檢査和含量測定方法，均應考察其專屬性。如方法不夠專屬，應采用多個方法予以補充。3.3.1 專屬性驗證方法3.3.1.1 鑒別試驗用于確認被測成分符合其特征。專屬性要求證明其其能與可能共存的物質或結構相似化合物區(qū)分，含被測成分的供試品呈正反應，而不含被測成分的供試品以及結構相似或組分中的有關化合物，應均呈負反應。對于藥品，輔料不得干擾其

12、有效成分的鑒別。頁次：共 11 頁 第 6 頁3.3.2 雜質測定，包括限度檢查和定量測定。作為純度檢查，所采用的分析方法應確?？蓹z出被分析物中雜質的含量測定，如有關物質、重金屬、有機溶劑等。因此雜質檢查要求分析方法有一定的專屬性。其專屬性驗證的有：方法1：在雜質可獲得的情況下，可向試樣中加入一定量的雜質，考察雜質與共存物質能得到分離和檢出，并具有適當的準確度與精密度。方法2：在雜質或降解產物不能獲得的情況下，專屬性可通過測定含有雜質或降解產物的試樣，與另一個已驗證的方法或藥典方法比較結果?；驅υ嚇佑脧姽庹丈洌邷?，高濕，酸（堿）水解或氧化的方法進行加速破壞，以研究可能的降解產物和降解途徑，并

13、比對破壞前后檢出的雜質個數。必要時可采用二極管陣列檢測和質譜檢測，進行峰純度檢查。3.3.3 含量測定含量測定的目的是得到試樣中被分析物的含量測定或效價的準確結果。其專屬性驗證的有：方法1：在雜質可獲得的情況下，可向試樣中加入雜質或輔料，考察測定結果是否受干擾，并可與未加雜質和輔料的試樣比較測定結果。方法2：在雜質或降解產物不能獲得的情況下，專屬性可通過測定含有雜質或降解產物的試樣，與另一個已驗證的方法或藥典方法比較結果。或對試樣用強光照射，高溫，高濕，酸（堿）水解或氧化的方法進行加速破壞，用兩種方法進行含量測定，比較測定結果。必要時可采用二極管陣列檢測和質譜檢測進行峰純度檢查，證明含量測定成

14、分的色譜峰中不包含其他成分。和色譜法和其他分離方法，應附代表性圖譜，以說明方法的專屬性，并應標明諸成分在圖中的位置，色譜法中的分離度應符合要求。3.3.4 色譜法和其他分離方法，應附代表性圖譜，以說明方法的專屬性，并應標明諸成分在圖中的位置，色譜法的分離度應符合要求。3.4 檢測限檢測限（LOD或DL）系指試樣中被測物能被檢測出的最低量。藥品的雜質測定，應通過測試確定方法的檢測限。常用的方法如下：方法1 ：非儀器分析目視法，即用已知濃度的被測物，試驗出能被可靠地檢測出的頁次：共 11 頁 第 7 頁最低濃度或量。 方法2 ：信噪比法，用于能顯示基線噪音的分析方法，即把已知低濃度試樣測出的信號與

15、空白樣品測出的信號進行比較，計算出能被可靠地檢測出的最低濃度或量。一般以信噪比為3：1 或2：1 時相應濃度或注入儀器的量確定檢測限。3.4.1 非儀器檢驗目視法用已知濃度的被測物，試驗出能被可靠地檢測出的最低濃度或量。3.4.2 信噪比法用于能顯示基線噪聲的檢驗方法，即把已知低濃度試樣測出的信號與空白樣品測出的信號進行比較，算出能被可靠地檢測出的最低濃度或量。一般以信噪比為3:1或2:1時相應濃度或注人儀器的量確定檢測限。3.4.3 數據要求應附測試圖譜，說明測試過程和檢測限結果。3.5 定量限3.5.1 定量限（LOQ或QL）系指試樣中被測物能被定量測定的最低量，其測定結果應具一定準確度和

16、精密度。雜質和降解產物用定量測定方法研究時，應確定方法的定量限。3.5.2 雜質定量測定驗證方法常用信噪比法確定，一般以信噪比為10:1時相應濃度或注人儀器的量確定定量限。3.6 線性3.6.1 線性系指在設計的測定范圍內，檢測結果與試樣中被測物的濃度直接呈正比關系的程度。線性是定量測定的基礎，涉及定量測定的項目，如雜質定量測定和含量測定均需驗證線性。3.6.2 線性的驗證方法應在規(guī)定的測定范圍內測定線性關系。可用一貯備液經精密稀釋，或分別精密稱樣，制備一系列供試樣品的方法進行測定，至少制備5個濃度的供試樣品，每個濃度各一份，每份供試樣品檢測3次，以測得的響應信號作為被測物濃度的函數作圖，觀察

17、是否呈線性，用最小二乘法進行線性回歸。必要時，響應信號可經數學轉換，再進行線性回歸計算。頁次：共 11 頁 第 8 頁3.6.3 數據要求應列出回歸方程、相關系數和線性圖。3.7 范圍 3.7.1 范圍系指能達到一定精密度、準確度和線性，測試方法適用的高低限濃度或量的區(qū)間。3.7.2 范圍應根據檢驗方法的具體應用和線性、準確度、精密度結果和要求確定。3.7.2.1 原料藥和制劑含量測定，需涵蓋的最低濃度范圍應至少為標示量的80%120%；3.7.2.2 制劑含量均勻度檢査，需涵蓋的最低濃度范圍應至少標示量的為70%130%，根據劑型特點，如氣霧劑和噴霧劑，范圍可適當放寬；3.7.2.3 溶出度

18、或釋放度的溶出量測定，需涵蓋的最低濃度范圍應為限度的±20% ,對于具有不同劑量的同種藥品，但測試溶液濃度一樣的前提下，只需進行一個劑量的線性試驗（應涵蓋限度的±20%），該試驗即可用于該種藥品的所有劑量。 如規(guī)定了限度范圍，則應為下限的-20%至上限的+20%；3.7.2.4 雜質測定，需涵蓋的最低濃度范圍應根據初步實測，擬訂為規(guī)定限度的±20 %。如果含量測定與雜質檢查同時進行，用百分歸一化法，則線性范圍應為雜質規(guī)定限度的-20%至含量限度（或上限）的+20%。推薦包含LOQ規(guī)定限度的+20%。3.8 耐用性3.8.1 耐用性系指在測定條件有小的變動時，測定結

19、果不受影響的承受程度，為使方法可用于常規(guī)檢驗提供依據。3.8.2 開始研究檢驗方法時，就應考慮其耐用性。經試驗，應說明小的變動能否符合系統(tǒng)適用性試驗要求，以確保方法有效。如果通過耐用性研究發(fā)現分析方法對某個或某些測試條件敏感或要求苛刻，則應在方法中予以寫明。3.8.3 方法耐用性的影響因素3.8.3.1 被測溶液的穩(wěn)定性、樣品的提取次數、時間等。3.8.3.2 高效液相色譜法（HPLC）中典型影響耐用性的變動因素有：流動相的組成和pH值；不同品牌或不同批號的同類型色譜柱；柱溫、流速等。3.8.3.3 氣相色譜法（GC)中典型影響耐用性的變動因素有：不同品牌或不同批號的同頁次：共 11 頁 第

20、9 頁類型色譜柱、固定相、不同類型的載體；柱溫、進樣口和檢測器溫度等。 4 方法確認4.1 方法確認的目的是通過方法確認來證明方法在本實驗室條件下的適用性。 4.2 方法確認適用于：物料和產品中不需要進行驗證的檢驗方法以及藥典方法和其它已驗證的法定標準，在實驗室批準使用前需做方法確認。4.3 方法確認不適用于：實驗室日常測試操作步驤不需要進行方法確認，例如（包括但不限于）干燥失重、熾灼殘渣、各種濕法化學步驟如酸值和簡單的儀器方法如pH計，除非有特殊要求。4.4 方法確認的確認方式對于方法確認，通常采用如下兩種方式：方式一：由兩名檢驗人員分別獨立對同一批產品進行檢驗（如有可能，使用不同的儀器），

21、比較兩人的檢測結果來證明方法在本實驗（人員、分析儀器、試劑等）的適用性。方式二：根據確認目的和評估結果選擇相關檢驗項目進行確認，如表2所示：表2 檢驗項目確認內容備注：“是”代表該項內容需要確認，“否”代表該項內容不需要確認。“可能”代表該項內容需根據實際情況評估確認。如遇特殊情況，仍應根據具體檢驗對象和情況而定。 5. 方法再驗證頁次：共 11 頁 第 10 頁5.1 方法再驗證適用范圍 5.1.1 在某些情況下，如原料藥合成工藝改變、制劑處方改變、分析方法發(fā)生部分改變等，均有必要對分析方法再次進行部分或完整的再驗證，以保證分析方法可靠。5.1.2 當原料藥合成工藝發(fā)生改變時，可能引入新的雜質，雜質檢查方法和含量測定方法的專屬性就需要再進行驗證，以證明有關物質檢查方法能夠檢測新引入的雜質，且新引入的雜質對主成份的含量測定應無干擾。5.1.3 當制劑的處方組成改變、輔料變更時，可能會影響鑒別的專屬性、溶出度和含量測定的準確度，因此需要對鑒別、含量測定方法再驗證。當原料藥產地來