醇脂質(zhì)體細(xì)菌內(nèi)毒素的檢測(cè)

1、紫格醇脂質(zhì)體細(xì)菌內(nèi)毒素的檢測(cè)中國(guó)醫(yī)藥工業(yè)雜志ChineseJour幾alofPharmaceutlcal2001.32(6文章編R-:1001-8885(2001)06086603紫杉醇脂質(zhì)體細(xì)菌內(nèi)毒素的檢測(cè)張震宇,章小萍,馬玉萍,唐黎明(海市藥品檢驗(yàn)所.上海008230)摘要:對(duì)注射用紫杉醇脂質(zhì)體中的細(xì)苗內(nèi)毒素檢查方法進(jìn)行了研究=以60乙醇溶液作為溶劑破壞脂質(zhì)體后進(jìn)行試驗(yàn).結(jié)果表明,6O的乙醇溶液列細(xì)菌內(nèi)毒索的話性無(wú)明顯影響4的乙醇溶液和0.17rag/m的供試品藩液對(duì)鱟試劑和細(xì)菌內(nèi)毒素的凝集反應(yīng)無(wú)明顯干擾.美建詞:紫杉醇;注射用脂質(zhì)體;細(xì)菌內(nèi)毒素檢查中圈分類號(hào)TQ46O.72文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A

2、目前抗癌藥物常采用脂質(zhì)體為載體,提高其療效和耐受性,降低毒副作用”.紫杉醇(1)是一種由紫杉類植物的樹(shù)干,樹(shù)皮或針葉中提取或半合成的二萜類化臺(tái)物,主要用于卵巢癌和乳腺癌,對(duì)肺癌,大腸癌等也有一定的治療作用0.23.l脂質(zhì)體能均勻地分散于氯化鈉注射液或5葡萄糖注射液中而不析出結(jié)晶,提高了療效.為了保證臨床使用的安全,中國(guó)藥典2000年版規(guī)定必須對(duì)靜脈注射藥物進(jìn)行熱原檢查,但在熱原試驗(yàn)時(shí),抗癌藥物本身的毒性常會(huì)引起家兔體溫的異常變化,影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性.因此目前多采用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法.本文對(duì)注射用1脂質(zhì)體細(xì)菌內(nèi)毒素檢查的方法進(jìn)行研究.1儀器和試藥細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品(批號(hào):80007,lO0EU

3、,ml中國(guó)藥品生物制品檢定所)1鱟試劑(批號(hào):9807i5,0.5EU/ml;批號(hào):090410A-=003EU/ml,湛扛安度斯生物有限刮1細(xì)菌內(nèi)毒紊楗查用水(批號(hào):080811.湛江安度斯生物有限公司);l對(duì)照品(批號(hào);108182r古量97.9.BristolMyersSquibb公司)i炔諾酮(批號(hào)920301,卜海第十二制藥廠)Il脂質(zhì)體樣品(規(guī)格:15rag瓶上海醫(yī)藥工業(yè)研究院);甲酵,乙酵均為光譜純Agilent111()型高教踱相色譜儀(美國(guó)AgilentTechnologies公司)1XW一80A型旋渦混合器(上海醫(yī)科大學(xué)儀器廠)l8O1型臺(tái)式離心機(jī)(上海手術(shù)器槭廠J;Nik

4、on顯微鏡(日豐Nikoa公司】2方法和結(jié)果2一樣品處理供試品溶液的配制:取樣品l瓶,加6O乙醇6ml,混旋5min,離0(3000r/rain)15min,取上清液作為供試品溶液.取供試品溶液于顯微鏡(15×40)下觀察,并與用注射用水代替60乙醇配得的溶液比較,結(jié)果見(jiàn)圖1-_1原料1樣品以注射用承配制1樣品以60乙醇溶液配制圄l樣品藩j喪顯被鏡觀察結(jié)果取供試品溶液,參照文獻(xiàn)【進(jìn)行含量測(cè)定,結(jié)果表1含量測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1.收稿日期:20010219作者筒卉:張震宇(1g68),男,主管藥師從事藥品橙駐,藥物丹析丑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究T.02164703139*3Email:shypiysc中國(guó)

5、醫(yī)藥工業(yè)雜志Chlnese由圖1,表1可知,60乙醇溶液已基本破壞了1脂質(zhì)體的卵磷脂層.2.2內(nèi)毒素檢查方法確證試驗(yàn)2.2.1乙醇對(duì)細(xì)菌內(nèi)毒素與鱟試劑凝集反應(yīng)的干擾試驗(yàn)預(yù)試驗(yàn):取細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品1支,以6O的乙醇溶液溶解后,分別用檢查用水及相應(yīng)濃度的乙醇溶液稀釋成行檢查.結(jié)果顯示6批供試品細(xì)菌內(nèi)毒素含量均小于0.18EU/mg.3討論3.1細(xì)菌內(nèi)毒素檢查系利用鱟試劑與細(xì)菌內(nèi)毒素產(chǎn)生凝集反應(yīng)的機(jī)理,以判斷供試品中細(xì)菌內(nèi)毒素的限量是否符合規(guī)定的一種方法(中國(guó)藥典2000年版,附錄86;美國(guó)藥典24版,1829)通常須將供試品溶于細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水后進(jìn)行測(cè)定.由于脂質(zhì)體系將藥物包裹在卵磷脂內(nèi).要

6、測(cè)定藥物所含的內(nèi)毒素就必須采用特殊的溶劑先破壞其卵磷脂層.將藥物釋放出來(lái).因此我們參考文獻(xiàn).選擇了6O乙醇溶液作為溶劑本試驗(yàn)提取方法提取后的溶液以顯微鏡觀察顯示(圖1)脂質(zhì)體已被破壞,1呈結(jié)晶狀態(tài);含量測(cè)定結(jié)果均在規(guī)定的范圍之內(nèi).表明6O乙醇已基本破壞其卵磷脂層.3.2為觀察6O的乙醇溶液是否對(duì)細(xì)菌內(nèi)毒素的活性及內(nèi)毒素與鱟試劑的凝集反應(yīng)有影響,本試驗(yàn)(下轉(zhuǎn)第288頁(yè))中圍藥丁雜志Chinese3ourna】OfPharmaceuticals200】.32(6ArylpropionicAcidsHUAiX1.CA()ShengChun.DONGX/anMing!一WENLingFet1(lleg

7、eChemistrynnd(VcemicalE!neeng,H0!i,Changsha410082YechangEducationCollege,Yichang443300)ABSTRACT:Opticalresolutionof2-arypropionicacidsbyenzymecatalyzedhydrolysisandester1icatjonarereviewed.KeyWords:2arylpropionicacid;enzymecatalyzedhydrolysis;esterification;resolution,(上接第265頁(yè))采用了將6O的乙醇溶液直接溶解細(xì)菌內(nèi)毒素工作

8、標(biāo)準(zhǔn)品,并將乙醇濃度稀釋至5以下的方法結(jié)果表明,60的乙醇溶液對(duì)細(xì)菌內(nèi)毒素的活性無(wú)明顯影響.可作為供試品細(xì)菌內(nèi)毒素檢查時(shí)破壞其卵磷脂層的溶劑;同時(shí)4的乙醇溶液對(duì)內(nèi)毒素與鱟試劑的凝集反應(yīng)也無(wú)明顯干擾作用3.3供試品溶液用檢查用水稀釋成0.17mg/ml的稀釋液(其中乙醇濃度約4).以此稀釋液配制的內(nèi)毒素溶液測(cè)得的鱟試劑靈敏度與檢查用水配制的內(nèi)毒素溶液測(cè)得的結(jié)果一致,表明該濃度下的供試品對(duì)內(nèi)毒素與鱟試劑的凝集反應(yīng)無(wú)明顯干擾作用.3.46批供試品的細(xì)菌內(nèi)毒素含量均小于0.18EU/mg.根據(jù)文獻(xiàn)i,l臨床劑量為l3j175mg/m,加至500l000ml的氯化鈉注射液或5葡萄糖注射液中,靜脈滴注3h

9、參照文獻(xiàn)將0.4Eumg作為供試品內(nèi)毒素的限值,人體表面積按1.5m,體重按60kg計(jì)算,并加上大輸液中可能含有的內(nèi)毒素量(按中國(guó)藥典2000年版規(guī)定的0.5EUm1),則每小時(shí)輸入體內(nèi)的內(nèi)毒素最大量約為3.4EU/kg.小于中國(guó)藥典2000年版規(guī)定的閾值5EUkg?h,因此我們認(rèn)為該限值可作為供試品內(nèi)毒素的限值,以保證臨床使用的安全.參考文獻(xiàn):1SharmaA,StraubingerR.Noveltaxoformulations:Preparationandcharacteriaatonoftaxocontainingliposomesl_J.PharmaRes,1994,11(6):889

10、899.:2陳新謙.金有豫.新編藥物學(xué)M.北京:人民1;_生出版社.1997.522523.-3WS405(x350)95,紫杉醇注射液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn):s.:4U.SFDAGuidelineonvalidationoftheLALasanendproductendotoxintesforhumanandanimalparenteradrugs,biologicalproductsandmedicaldevicess-.DeterminationofBacteria1EndotoxinsinPaclitaxe1LiposomesZHANGZhenYu,ZHANGXiaoPing,MAYuPing,TANGLiMmg(SangkaiInstituteJotDrugc.nEm!.Shahhai200233)ABSTRACT!Abacterialendotoxintestwasdevelopedfordeterminationofpaclitaxe1iposomesforinjection,using60ethanolforpretreatment.TheresultSshowedthattheactivityofthebacterialendotoxinwasnotaffectedby60ethano1.an