煙草野火病病原菌對農用鏈霉素的抗藥性測定

1、煙草野火病病原菌對農用鏈霉素的抗藥性測定?328?ChineseAgriculturalScienceBulletinVo1.23No.122007December煙草野火病病原茵對農用鏈霉素的抗藥性測定李梅云(云南省煙草科學研究所,玉溪653100)摘要:為合理防治煙草野火病,減少抗藥性產生,減少農藥殘留.從云南省8個地州分離煙草野火病茵茵株43個,并就分離茵株對農用鏈霉素的抗藥性進行了測定,結果表明,供試43個茵株中高抗茵株8個,中抗茵株比例較高17個,低抗茵株18個.不同來源的煙草野火病原茵株的抗藥性存在差異,文山,昆明的茵株抗藥性最高,紅河茵株抗藥性最低,抗性倍數最高達2000多倍,其

2、余地州抗藥性居中.不同地州分離菌株高,中,低抗茵株的比例存在明顯差另l】.分離自文山邱北縣雙龍營鎮(zhèn)的25#茵株抗藥性最強.抗性倍數達45907.75,來自文山硯山縣阿猛鎮(zhèn)租白村的34#茵株抗藥性最低.43株煙草野火病茵茵株對農用鏈霉素的EC50值平均為4.65,范圍在0.004183.631.高,中,低抗茵株的平均抗性倍數分別為6124.69,49.72,6.40.關鍵詞:煙草野火病;農用鏈霉素;抗藥性中圖分類號:$572文獻標識碼:ADeterminationofPseudomonassyngaepv.tabaciResistancetoAgriculturalStreptomycinLiM

3、eiyun(TobaccoScienceResearchInstitute,YunnanYuxi653100)Abstract:Tocontroltobaccowildfirediseaserationally,reduceresistanceandreducepesticidepollution,43strainsofPseudomonassyringaepv.tabaciwereisolatedfrom8regionofYunnanprovinceandalli8olatesweredeterminedtheirresistancetoagriculturalstreptomycin.Th

4、eresultsindicatedthatofalltestedisolates,therewere8highresistance,17middleresistanceand18lowresistanceisolatesrespectively.Ileis1).-latesfungicideresistancefromdifferentregionwasdifferentobviously,thehighestresistantisolatecomefromWenshanandKunmingregion.Hongheisolateshadthelowestresistanceamongallt

5、estedisolates.I1leevi-dentdisparityofhighresistance.midresistanceandlowresistanceisolatesratiowasexistatdifferentregion.25#fromWenshanQiubeiwasthehighestagriculturalstreptomycinresistantisolate,itsresistancemultiplearrivedto45908comparedtothelowestresistanceisolate34#,whichfromYanshanofWenshan.I1leE

6、C50of43Pseudomonassyringaepv.tabaciisolatesagainstagriculturalstreptomycinwas4.65inaver-age.wasintherangeofO.004-183.631.,I1leaverageresistancemultipleofhighresistance,midresistanceandlow-resistanceisolateswas6124.69,49.72,6.40respectively.Keywords:tobaccowildfirediseases,agriculturalstreptomycin,fu

7、ngicideresistance煙草野火病是由煙草假單胞桿菌(Pseudomonassyringaepv.tabaci)起的細菌性病害,是一種世界普遍發(fā)生的爆發(fā)性,毀滅性病害m,Wolf和Foser首次報道報道在美國北卡羅來納州【.該病害于2O世紀4O年代末期在中國云南煙區(qū)零星發(fā)生,以后隨著煙草栽培面積逐漸擴大而漸趨嚴重【3.煙草主要病害的綜合治理一直以來是煙草生產中的重要問題之一,而化學防治在煙草主要病害防治中長期占據重要地位.由于基金項目:云南省煙草公司計劃資助項目”煙草主要病害抗藥性調查及治理技術研究”(04A17).第一作者簡介:李梅云,女,1971年出生,碩士學歷,助理研究員,從事

8、煙草病害與微生物研究,發(fā)表論文20余篇.通信地址:653100云南省玉溪市聶耳路47號云南省煙草科學研究所.Tel:08772075027,E-maihmyli2008yahoo,COllkcn收稿日期:200707-24,修回日期:2007-0820.中國雇學通報第23卷第12期2007年12月?329?煙草生產上化學農藥的長期大量使用以及使用技術的不合理,使一些煙草主要病害產生了抗藥性.它們在生產上直接表現為防效降低,病害防治困難.由于生產上缺乏對這些主要病害抗藥性狀況的了解,一味增加用藥量及用藥次數,造成更加有利于病原菌抗藥性產生的現狀,導致煙葉生產成本提高,對環(huán)境污染加重,特別是煙葉農

9、藥殘留偏高,對煙葉出口和卷煙安全性帶來不利影響.煙草野火病是煙草生產上一類常見的細菌性病害,危害嚴重,其病原對農用鏈霉素的抗藥性至目前尚未見報道,筆者就云南省不同地區(qū)煙草野火病病菌對農用鏈霉素的抗藥性進行了研究.1材料與方法1.1供試藥劑1000萬單位農用鏈霉素可溶性粉劑,由山東魯抗生物農藥有限責任公司生產.1.2供試培養(yǎng)基牛肉蛋白胨培養(yǎng)基【】1.3試驗時間與地點該試驗于2005年在云南省煙草科學研究所實驗室完成.1.4煙草野火病病原茵的分離,純化與鑒定參照方中達41,葛莘5】等的方法.從云南省各州市收集煙草野火病病株,經平板劃線法分離,純化,致病性測定,染色反應,形態(tài)特征,培養(yǎng)性狀,生理生化

10、測定及營養(yǎng)利用等測定后得到43個菌株.1.5農用鏈霉素對煙草野火病菌的室內毒力測定采用抑菌圈法,將細菌稀釋液與焙化冷卻至50左右的牛肉蛋白胨培養(yǎng)基混勻后倒平板.用D-.=6nm-的濾紙圓片蘸取不同濃度(分別為2xlO.,1xlO.,5x10,2.5×10,1×10,5x10”Smg/m1)的藥液及無菌水,貼在培養(yǎng)基平板中央,24-28C下翻轉培養(yǎng)3d,測抑菌圈直徑.每一濃度設三次重復,計算抑菌圈平均直徑.1.6數據處理與分析試驗數據用浙江大學唐啟義,馮明光61編的實用統(tǒng)計分析及其DPS數據處理系統(tǒng)進行分析.2結果與分析2.1病原的分離鑒定2004年在云南省8個主產煙區(qū),成功

11、分離到43個煙草野火病菌株,其中文山州23個,昆明2個,玉溪2個,楚雄2個,昭通5個,曲靖7個,紅河1個,臨滄1個.表1各地州菌株數及其平均抗性地州菌株個數平均EC(mg/m1)平均抗性倍數高抗中抗敏感文山昆明玉溪臨滄昭通曲靖楚雄紅河總計2.2各地州分離菌株的抗藥性水平抗性表型劃分:以菌株在農用鏈霉素濃度平板上菌落生長致死中濃度(Ec50)為標準,劃分為3類:EC500.05為敏感;0.05<EC5o<0.5為中抗;EC卯t>0.5為高抗.云南省8個地州分離菌株的抗藥性測定結果表明(表1),不同來源的煙草野火病原菌株的抗藥性存在差異,以文山,昆明的菌株

12、抗藥性最高,紅河菌株抗藥性最低,抗性倍數最高達2000多倍,其余地州抗藥性居中.不同來源的菌株高,中,低抗菌株的比例差異較大,文山23個菌株高,中,低抗比例分別為26.1%,30.4%,43.5%,曲靖7個菌株中高,中,低抗菌株分別占0%,28.6%,71,4%,昭通5個菌株中0%為高抗,80%為中抗,20%低抗,而玉溪僅2個菌株中就有1株高抗,1株低抗,臨滄,昭通,曲靖,楚雄,紅河未檢測到高抗菌株,這說明不同地區(qū)由于用藥程度上存在差別,其抗藥性就存在明顯差別.按照上述劃分標準,43個菌株中高,中,低抗比例為8:17:18.2,3不同抗性菌株的地理分布通過對所有分離純化的煙草野火病菌菌株的抑菌

13、率測定發(fā)現(表2一表4),供試菌株對農用鏈霉素均有不同程度的抗藥性,菌株間抗藥性差異較大.分離自mlOOl5lO7Oll42ll”6llOOOOO8瑚0埽;隗孤/嬲m,8OOOOOOO22l572l?330?ChineseAgriculturalScienceBulletin”9o1.23No.131150#文I西疇縣興街鎮(zhèn)多依坪Y=O.513x+5.69469#167#55#67#文山廣南縣珠琳鎮(zhèn)上寨Y=O.242x+5.334曲靖師宗大同鄉(xiāng)Y=O.652x+5.915文山廣南縣珠琳鎮(zhèn)Y=O.479x+5.679曲靖市陸良城外Y=O.7o7x+6.0286

14、0#文山西疇縣興街鎮(zhèn)多依坪Y=O.489x+5.71532#52#76撐文山邱北普者黑水溝壩Y=O.741x+6.084文山邱北縣錦屏鎮(zhèn)Y=O.885x+6.412昆明石林縣路美邑Y=O.487X+5.809O.87o.965o.897o.982o.929中高抗,敏感菌株的劃分標準不同.文山邱北縣雙龍營鎮(zhèn)的25#菌株抗藥性最強,抗性倍素對煙草野火病病菌最高抗性菌株25#與最敏感菌數達45907.75,來自文山硯山縣阿猛鎮(zhèn)租白村的34#株34#的生長抑制情況,不同菌株在不同濃度范圍菌株抗藥性最低.43株煙草野火病菌菌株對農用鏈霉增大幅度有所不同,25#菌株在5個濃度下抑菌率分素的EC5o值平均為

15、4.65mg/ml,范圍在別為8.56%,9.78%,10.89%,11.33%,13%,15.56%,0.004183.631.高,中,低抗菌株的平均抗性倍數分別而34#菌株的抑菌率分別為1O.56%,30.78%為6124.69,49.72,2%,37.56%,38.11%,43%.實驗過程中還發(fā)現不2.4農用鏈霉素對煙草野火病病菌的抑茵率同菌株在不同濃度時反映出抗藥性強弱有差異,但通過對所有分離純化的煙草野火病病菌的抑菌差異不大(表5),在1×1042×103mg/ml濃度范圍內率測定,結果說明所有菌株隨著農藥鏈霉素濃度的某一濃度下抑菌率測定值可基本

16、反映該菌株的整體逐漸增大抑制率也明顯增大.圖1反應了農用鏈霉抗藥程度.加坫O?332ChineseAgriculturalScienceBulletinVo1.23No.122007Decemberhttp:3討論雖然此實驗中有些地州樣品量少,很難反映該地州的整體水平,但是如果每個地州都采很多樣,工作量太大,可以從個別地州如文山,曲靖,昭通入手詳細分析,也能反映各地州抗藥性可能存在的情況,各地州用藥情況有待進一步調查,旨在分析和研究煙草野火病抗藥性治理措施,為生產農藥低殘留煙葉奠定良好的基礎.對煙草野火病菌菌株的抑菌率測定發(fā)現,不同菌株對農用鏈霉素有不同程度的抗藥性,來自不同地域的菌株抗藥性不同.來自不同地州的菌株中高抗,中抗和低抗菌株的比例有很大差異,這說明不同地區(qū)由于用藥程度上存在差別,其抗藥性就存在明顯差別.實驗過程中還發(fā)現不同菌株在不同濃度時反映出抗藥性強弱有差異,但差異不大,這說明在農藥一定濃度范圍內,不用測菌株的EC卯,而直接用某一濃度的抑菌率反映菌株的抗藥性,這樣即可以大大減少工作量,又可以在較短的時間內監(jiān)測出某地區(qū)菌株的抗藥性水平,更快地提出抗藥性治理解決方案,盡快減少農藥殘留對人類的危害,減少環(huán)境污染.參考文獻11袁美麗,高潔,張佳環(huán),等.煙草野火病藥劑防治研究【J1.吉林農業(yè)大學,1994,16(4):18.23.2】LUCASG