選擇性垂體甲狀腺激素抵抗綜合征患者的臨床特點(diǎn)與THRβ基因突

1、選擇性垂體甲狀腺激素抵抗綜合征患者的臨床特點(diǎn)與THR基因突變的研究         11-01-09 14:03:00     作者：施秉銀，梁靜    編輯：studa20【摘要】  目的 研究2例選擇性垂體甲狀腺激素抵抗綜合征患者的臨床特點(diǎn)及甲狀腺激素受體(THR)基因突變，探索該病的發(fā)病機(jī)制。方法 收集2例患者及其父母的臨床資料并留取外周血標(biāo)本，提取基因組DNA，應(yīng)用PCRDNA直接測(cè)序的方法研究患者及父母的THR基因有

2、無(wú)突變。結(jié)果 2例患者及父母的THR基因第1-10外顯子未發(fā)現(xiàn)突變。結(jié)論 散發(fā)性垂體甲狀腺激素抵抗綜合征患者發(fā)病可能與THR基因突變無(wú)關(guān)。 【關(guān)鍵詞】  激素抵抗；甲狀腺激素受體；基因；突變ABSTRACT: Objective  To study the clinical and THRgene mutation of two cases of pituitary thyroid hormone resistance. Methods  The clinical data and peripheral blood samples of the patients

3、and their family members were collected, and then DNA was isolated. PCR and direct sequencing techniques were performed to determine if there were mutations in their THRgene. Results  No mutation was found in exon 1-10. Conclusion  Pathogenesis of sporadic pituitary resistance to thyroid h

4、ormone usually has no relation with mutation of THRgene.KEY WORDS: hormone resistance; thyroid hormone receptor; gene; mutation甲狀腺激素抵抗綜合征(thyroid hormone resistance syndrome, THRS)是由于甲狀腺作用的靶器官對(duì)甲狀腺激素的反應(yīng)性降低而引起的一種常染色體顯性遺傳性疾病，血清游離T3(FT3)和/或游離T4(FT4)升高，同時(shí)伴有不適當(dāng)正?；蛏叩难宕偌谞钕偌に?TSH)水平是該病的典型生化特征1。以家族性發(fā)病多見，有大約

5、15%的散發(fā)病例。自1967年Refetoff等2報(bào)道第一例患者以來(lái)，目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了250多個(gè)家系，700多例患者34。國(guó)內(nèi)近年來(lái)也有病例報(bào)道5。國(guó)內(nèi)外的研究者從分子遺傳學(xué)、分子生物學(xué)和內(nèi)分泌學(xué)等多側(cè)面對(duì)這些病例進(jìn)行了研究。1988年Usala等6通過(guò)限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性分析證實(shí)該病與甲狀腺激素受體(THR)基因突變有關(guān)。截止目前僅有幾例散發(fā)的THRS病例報(bào)道。本研究采用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)DNA直接測(cè)序的方法，檢測(cè)我院門診2例選擇性垂體甲狀腺激素抵抗綜合征(pituitary resistance to thyroid hormone, PRTH)患者及其父母的THR基因突變率最高的1-1

6、0外顯子，并結(jié)合臨床特點(diǎn)，從分子水平探討該病的發(fā)病機(jī)制。1  資料與方法1.1  臨床資料 患者1，女性，29歲，因“聽力下降27年，怕熱、多汗、心悸3年”就診?；颊哂?歲時(shí)因“發(fā)熱、咳嗽”診斷為肺炎，經(jīng)治療后上述癥狀緩解。但逐漸出現(xiàn)雙耳聽力下降，以左側(cè)為著，伴有語(yǔ)言障礙，發(fā)音不清，電測(cè)聽檢查提示“感音神經(jīng)性耳聾”，治療后無(wú)好轉(zhuǎn)。    3年前體檢時(shí)發(fā)現(xiàn)甲狀腺腫大，伴有輕微怕熱、多汗、心悸，大便次數(shù)增多，每日2-3次，無(wú)多食、消瘦，外院化驗(yàn)血清TT3 473ng/dL(參考值65-240ng/dL)，TT4 27.5g/dL(參考值5

7、.5-13g/dL)，F(xiàn)T3 14.5pmol/L(參考值2.8-8.5pmol/L)，F(xiàn)T4 50.3pmol/L(參考值9.5-26.5pmol/L)，TSH 10.4IU/mL(參考值<10IU/mL)診斷為“甲狀腺功能亢進(jìn)癥”，服用他巴唑30mg/d治療，半年后上述癥狀仍無(wú)緩解，TSH一直高于正常。以后曾在多家醫(yī)院就診，反復(fù)調(diào)整他巴唑的劑量(10-15mg/d)，甲狀腺功能檢查一直未能恢復(fù)正常，為進(jìn)一步診治，于2004年6月來(lái)我院就診。家族中無(wú)類似病史。    發(fā)病以來(lái)，生長(zhǎng)發(fā)育及智力正常。11歲月經(jīng)初潮，經(jīng)期不規(guī)律。體格檢查：體溫36.5，呼吸20

8、次/min，脈搏100次/min，血壓120/75mmHg(1mmHg=0.133kPa)，身高163cm，體重56kg，發(fā)育正常，營(yíng)養(yǎng)中等，查體合作，發(fā)音不清。左耳聽力喪失，右耳聽力嚴(yán)重下降，無(wú)Graves病眼征，甲狀腺度腫大，質(zhì)軟，無(wú)結(jié)節(jié)，無(wú)壓痛，無(wú)震顫及血管雜音。其他檢查無(wú)異常發(fā)現(xiàn)。    輔助檢查：血、尿、糞常規(guī)正常，血糖、肝腎功、血漿蛋白均正常，甲狀腺球蛋白抗體TGAb 1.9%(正常<30%)，甲狀腺微粒體抗體TMAb 1.0%(正常<20%)，HCG<1mIU/mL(正常值<5mIU/mL)，F(xiàn)SH、LH、E、P均正常。頭顱及

9、蝶鞍MRI正常。甲狀腺掃描示甲狀腺?gòu)浡阅[大。患者來(lái)我院后停用他巴唑1月，然后行T3抑制試驗(yàn)7(自實(shí)驗(yàn)第1天起每天給予患者LT3口服，并逐漸增加LT3的劑量，由50g/d增至100g/d和200g/d，每一劑量持續(xù)3d，在實(shí)驗(yàn)前及每一劑量應(yīng)用3d后，分別測(cè)定甲狀腺功能、血清膽固醇、甘油三酯、鐵蛋白、肌酸磷酸激酶、泌乳素、24h尿氮、心率和基礎(chǔ)代謝率(BMR)(表1)。其父母甲狀腺功能測(cè)定正常。表1  T3抑制試驗(yàn)的結(jié)果（略）    之后試用三碘甲狀腺乙酸(TRIAC)治療半年后，月經(jīng)逐漸恢復(fù)正常，甲功結(jié)果檢測(cè)：FT4：54.9pmol/L；FT3：25.

10、3pmol/L；hTSH：5.26IU/mL，第6個(gè)月FT4：54.9pmol/L；FT3：15.9pmol/L；hTSH：6.59IU/mL。    患者2，女性，18歲，因“多汗心悸2年”就診，兩年前無(wú)明顯誘因出現(xiàn)發(fā)熱，體溫波動(dòng)于38-39，自覺心悸，在包頭醫(yī)學(xué)院第三附屬醫(yī)院住院，經(jīng)治療后，發(fā)熱消失，但心悸無(wú)明顯緩解同時(shí)伴有多汗。后轉(zhuǎn)至該院兒科繼續(xù)治療，查心肌酶譜正常，ECG示竇性心動(dòng)過(guò)速，甲功提示FT3：8.8pmol/L(參考值：3.2-9.6pmol/L)，F(xiàn)T4：16pmol/L(參考值：8.6-25.8pmol/L)，hTSH：1.93(參考值：0.

11、35-5.5pmol/L)，未給特殊治療。兩月后，再次復(fù)查甲功，F(xiàn)T3、FT4均升高，hTSH正常(FT3：16pmol/L，F(xiàn)T4：>200pmol/L，hTSH：2.1)，診斷為“甲亢”服用他巴唑30mg/d治療，半年后自行減至25mg/d，后逐步減量，四個(gè)月后減為5mg，并加用甲狀腺素片20mg/d，甲狀腺素片服用兩月后停用，以后一直服用他巴唑5mg/d治療，一年后改服“富馬酸比索絡(luò)爾”5mg/d至今。期間癥狀時(shí)好時(shí)壞，曾在多家醫(yī)院就診，甲狀腺功能檢查一直未能恢復(fù)正常，為進(jìn)一步診治，于2005年6月來(lái)我院就診。家族中無(wú)類似疾病史。    自發(fā)病以來(lái)，生

12、長(zhǎng)發(fā)育及智力正常。11歲月經(jīng)初潮，經(jīng)期不規(guī)律。體格檢查：體溫36.5，呼吸20次/min，脈搏92次/min，血壓120/80mmHg，身高164cm，體重57.5kg，發(fā)育正常，營(yíng)養(yǎng)中等，查體合作，發(fā)音不清。無(wú)Graves病眼征，甲狀腺度腫大，質(zhì)軟，無(wú)結(jié)節(jié)，無(wú)壓痛，無(wú)震顫及血管雜音。其他檢查無(wú)異常發(fā)現(xiàn)。    輔助檢查：血、尿、糞常規(guī)正常，血糖、肝腎功、血漿蛋白均正常。甲功結(jié)果檢測(cè)：FT3：11.28pmol/L；FT4：22.01pmol/L；hTSH：8.43IU/mL，甲狀腺B超：甲狀腺輕度腫大，實(shí)質(zhì)回聲均勻；甲狀腺ECT示：甲狀腺顯影清晰，位置正常，形態(tài)

13、增大，甲狀腺影像放射性分布均勻，對(duì)稱。垂體MRI檢查正常。其父母甲狀腺功能測(cè)定正常。1.2  方法1.2.1  外周血基因組DNA抽提 抽取2例患者及其父母、5名健康對(duì)照的靜脈血各5mL，以復(fù)方枸櫞酸鈉(ACD)抗凝，鹽析法提取外周血白細(xì)胞基因組DNA，用TE緩沖液溶解，以紫外分光光度儀測(cè)定各DNA樣品的純度和濃度。1.2.2  聚合酶鏈反應(yīng) PCR以各DNA樣品為模板，用Primer 5.0軟件對(duì)THR基因的10個(gè)外顯子分別設(shè)計(jì)引物，由上海生工公司合成(表2)，并用雙蒸水溶解，各引物濃度為10pmol/L，PCR反應(yīng)體系如下：Taq Mix(北京天為時(shí)代)25L，DN