不同中藥對豚鼠膽色素結(jié)石模型的生化學(xué)影響

1、不同中藥對豚鼠膽色素結(jié)石模型的生化學(xué)影響 08-10-02 10:42:00 作者：張靜喆, 章學(xué)林, 編輯：studa20【摘要】 目的：觀察中藥清膽膠囊和養(yǎng)肝利膽顆粒對豚鼠膽囊膽色素結(jié)石模型的生化學(xué)影響。方法：雄性豚鼠皮下注射林可霉素建立膽色素結(jié)石模型，并設(shè)立空白組、模型組、清膽膠囊干預(yù)組和養(yǎng)肝利膽顆粒干預(yù)組，觀察各組動(dòng)物的成石率、膽汁中總膽紅素（total bilirubin, TBIL）、游離膽紅素（unconjugated bilirubin, UCB）和鈣離子濃度等指標(biāo)的變化。結(jié)果：與模型組比較，清膽膠囊組和養(yǎng)肝利膽顆粒組成石率均顯著降低（P0.01），膽汁中總膽紅素、游離膽紅素和

2、鈣離子濃度也明顯降低（P0.05，P0.01）。結(jié)論：清膽膠囊和養(yǎng)肝利膽顆?？赏ㄟ^降低膽汁中總膽紅素、游離膽紅素和鈣離子含量而逆轉(zhuǎn)成石膽汁，起到預(yù)防膽色素結(jié)石形成的作用。 【關(guān)鍵詞】 利膽劑 膽色素類 膽結(jié)石 豚鼠Methods: An animal model of pigment gallstones was established in male guineapigs by hypodermic injection of lincomycin. The guineapigs were randomly divided into blank control group, untreated

3、 group, QDC group and YGLDG group. There were 8 guineapigs in each group. After tenday treatment, animals were sacrificed and sampled to calculate the rate of stone formation, total bilirubin (TB), unconjugated bilirubin (UCB) and Ca2+ density in bile of the four groups.Results: In comparison with t

4、he untreated group, the rates of stone formation in the QDC and YGLDG groups were significantly decreased (P0.01). TBIL, UCB and Ca2+ content of bile in both QDC and YGLD groups was also significantly decreased (P0.05, P0.01).Conclusion: QDC and YGLD have good effects on biochemical changes of anima

5、l model of pigment gallstone in reversing the lithogenesity of bile by reducing the content of TB, UCB and Ca2+, hence resulting in clinical treatment and prevention of pigment gallstone disease.Keywords: choleretics; bile pigments; cholelithiasis; guineapigs肝膽管結(jié)石的主要類型為膽色素結(jié)石，這類膽石病在我國的發(fā)病率很高1。膽色素結(jié)石主要存

6、在于肝內(nèi)膽管，但膽囊內(nèi)亦可發(fā)生。近年來關(guān)于膽囊色素性結(jié)石的研究已經(jīng)引起人們的重視，其病理成因比較復(fù)雜，至今仍未完全闡明?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)觀點(diǎn)認(rèn)為膽色素結(jié)石的發(fā)病主要與膽道細(xì)菌感染、膽汁淤滯和膽道寄生蟲病等多種因素密切相關(guān)，其中膽道動(dòng)力學(xué)異常和膽汁淤積是生石的重要條件2。目前，臨床治療肝膽管結(jié)石多采用手術(shù)（肝葉或肝段切除，重建膽管通路）和各種途徑（溶石、碎石、取石等）相結(jié)合的綜合治療措施，但效果尚未達(dá)到理想程度，因此，非手術(shù)療法的研究一直備受重視。目前中醫(yī)藥在肝膽管結(jié)石治療中的優(yōu)勢日顯突出。本學(xué)科的前期研究工作表明，清膽膠囊和養(yǎng)肝利膽顆粒對膽石病具有肯定的臨床療效3。為進(jìn)一步論證此兩種藥物的作用機(jī)制，尤

7、其是對膽色素結(jié)石的作用，我們進(jìn)行了以下的研究。1 材料和方法1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 普通級豚鼠，雄性，300350 g，共32只，由上海市奉賢縣泰日鎮(zhèn)銀根養(yǎng)兔室提供，合格證編號為SCXK（滬）20030002。1.2 實(shí)驗(yàn)藥物和致石方法 清膽膠囊和養(yǎng)肝利膽顆粒為上海中醫(yī)藥大學(xué)龍華醫(yī)院的院內(nèi)制劑，均由龍華醫(yī)院制劑室生產(chǎn)提供。清膽膠囊由生大黃、陳皮、虎杖三味中藥組成（規(guī)格：0.3 g60粒/瓶；批號：滬藥制字Z05170981）；養(yǎng)肝利膽顆粒由白芍、何首烏、枸杞子、陳皮、甘草組成，8 g/包，每克干粉相當(dāng)于4.5 g生藥（批號：滬藥制字Z05170982）。 鹽酸林可霉素注射液，規(guī)格：0.3 g/ml（

8、上海旭東海普藥業(yè)有限公司，批號：070411）。致石飼料配方4：正常飼料45.43 g和致石性藥物（酪蛋白l g、蔗糖1.5 g、豬油l g、微晶纖維素l g、膽酸0.02 g、膽固醇0.05 g）4.57 g（上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司）。1.3 動(dòng)物分組、造模及藥物處理 實(shí)驗(yàn)豚鼠隨機(jī)分為空白組、模型組、清膽膠囊組和養(yǎng)肝利膽顆粒組，每組各8只。皮下注射林可霉素60 mg/（kgd），同時(shí)給予致石飼料，連續(xù)7 d，建立豚鼠膽囊膽色素結(jié)石動(dòng)物模型4，5。造模期間不限飲食、攝水?？瞻捉M喂正常飼料的同時(shí)皮下注射等體積生理鹽水，連續(xù)7 d。清膽膠囊組和養(yǎng)肝利膽顆粒組均于造模前3 d開始給予相應(yīng)的藥

9、物（制備成混懸液）灌胃，藥物劑量以成人用藥劑量（60 kg體質(zhì)量，清膽膠囊2.7 g/d，養(yǎng)肝利膽顆粒16 g/d）按實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體型系數(shù)換算法計(jì)算6，清膽膠囊按0.22 g/（kgd）計(jì)算，養(yǎng)肝利膽顆粒按1.28 g/（kgd）計(jì)算，連續(xù)給藥10 d?？瞻捉M和模型組均予等體積生理鹽水灌胃。各組灌胃時(shí)間均為2次/d，灌胃10 d后取材。1.4 標(biāo)本采集和制備 各組動(dòng)物均于第10天灌胃結(jié)束后禁食不禁水，次日取材。以15%烏拉坦腹腔麻醉，抽血處死。肉眼觀察膽汁中成石情況，抽取膽汁，迅速完整切除膽囊后放于冰盤上，再次仔細(xì)觀察膽囊內(nèi)成石情況，隨后置于4 預(yù)冷的生理鹽水中，洗去余血，和膽汁分別于80 冰箱保

10、存?zhèn)錅y。1.5 膽石紅外光譜定性 采用美國Nicolet公司Mgna FTIR750型紅外光譜儀測定膽石成分。1.6 指標(biāo)測定 膽汁中總膽紅素（total bilirubin, TBIL）和游離膽紅素（unconjugated bilirubin, UCB）含量用重氮試劑法測定，膽汁中鈣離子（Ca2）用甲基麝香草酚藍(lán)比色法測定，試劑盒均由南京建成生物工程研究所提供。1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 計(jì)數(shù)資料采用率表示，采用確切概率法檢驗(yàn)。計(jì)量資料用xs表示，組間均數(shù)比較采用單因素方差分析。所有運(yùn)算程序均在計(jì)算機(jī)上運(yùn)用SPSS 11.5統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行。2 結(jié)果2.1 豚鼠膽結(jié)石生成情況 空白組有1只動(dòng)物發(fā)生膽結(jié)石（12.5），模型組8只全部有結(jié)石形成（100%），其成石率顯著高于空白組（P0.01）。清膽膠囊組有3只動(dòng)物成石（37.5%），養(yǎng)肝利膽顆粒組有5只動(dòng)物成石（62.5%），均明顯低于模型組膽石生成率（P0.01）。2.2 膽石定性 肉眼見膽囊及膽管內(nèi)有棕黑色泥沙樣或棕色絮狀沉淀物。經(jīng)紅外光譜檢測可見在1 652.7 cm1處有一膽紅素吸收峰，在1 033.7 cm1處有一焦磷酸鹽吸收峰，為膽紅素焦磷酸鹽類色素型結(jié)石。2.3 各組豚鼠膽汁總膽紅素含量 模型組豚鼠TBIL含量明顯高于空白組（P0.01），