高壓氧結合電針治療帕金森病大鼠的實驗研究

1、高壓氧結合電針治療帕金森病大鼠的實驗研究            【關鍵詞】  高壓氧    電針    帕金森病    大鼠    實驗研究    觀察高壓氧(hyperbaric oxygen， HBO)結合電針刺激對帕金森病大鼠紋狀體內多巴胺含量的影響及對行為學的治

2、療作用。用6-羥基多巴胺毀損單側黑質建立大鼠向健側旋轉運動的帕金森病動物模型;將造模成功的大鼠隨機分為HBO治療組、電針治療組、HBO結合電針組、模型未治療組;通過高效液相電化學法檢測各組大鼠紋狀體內多巴胺含量，評價各組實驗大鼠的旋轉行為學治療效果。HBO組、電針組實驗大鼠行為學改善的療效及腦紋狀體內多巴胺含量的增加，與模型未治療組比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);HBO結合電針組與模型未治療組比較，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。HBO結合電針療法可有效提高帕金森病大鼠紋狀體內多巴胺的含量，對其病變產生的側向旋轉行為有顯著的治療作用。為臨床治療帕金森病提供了理論和實驗基礎。

3、帕金森病是中老年人常見的一種以震顫、肌肉強直、運動弛緩為臨床特征的中樞神經退行性疾病。其最主要發(fā)病機制之一是黑質紋狀體多巴胺神經遞質水平低下，紋狀體多巴胺含量顯著減少，從而使錐體外系的運動調節(jié)功能失調。本研究旨在探討高壓氧(HBO)結合電針對帕金森病大鼠紋狀體多巴胺含量的影響，以及對模型鼠旋轉行為學的治療效果，為臨床治療提供依據。1材料與方法1.1實驗動物健康清潔級Sprague Dawley(SD)大鼠共32只，雄性，體質量210240 g，由軍事醫(yī)學科學院動物中心提供。按數字表法隨機分成HBO治療組、電針治療組、HBO結合電針組和模型未治療組。每組8只大鼠。1.2儀器與試劑6-羥基多巴(美

4、國Sigma公司)、阿樸嗎啡(青海制藥廠有限公司)、KOPF立體定向儀(德國KOPF公司)、微量注射控制器(美國WPI公司)、Biofuge Stratos型低溫高速離心機(德國Heraeus公司)、Agilentl 100型高效液相色譜儀(美國安捷倫科技有限公司)、N2000色譜工作站(浙江大學智能信息工程研究所)、G-6805II型電針治療儀(上海華誼醫(yī)療儀器廠)、FAJD2023高壓氧實驗動物艙(煙臺冰輪高壓氧艙有限公司)。1.3帕金森病大鼠模型制備1.3.16-羥基多巴溶液配制避光稱取10 mg 6-羥基多巴，加入5 ml生理鹽水，溶解，混勻后分裝，-70低溫冰箱中密封避光保存?zhèn)溆谩?

5、.3.2阿樸嗎啡溶液配制避光稱取20 mg阿樸嗎啡，溶入100 ml生理鹽水內，混勻，室溫下避光保存。1.3.3動物模型制備成年SD大鼠，按1 ml/100 g體質量腹腔注射水合氯醛麻醉，麻醉后在KOPF立體定位儀上固定。以前囟為坐標原點，參照大鼠腦立體定向圖譜，確定右側內側前腦束坐標位置：第1位點為前囟后1.8 mm，右側2.5 mm，進針深度7.5 mm。第2位點為前囟后1.8 mm，右側2.5 mm，進針深度8.0 mm。所采用的坐標系統(tǒng)為：門齒鉤平面比外耳道連線(耳桿尖中心連線)低2.4 mm。根據前后囟參數確定針尖位置。挑開硬腦膜，微量注射器吸取8 l 6-羥基多巴，注射器針尖斜面的

6、1/2降至硬膜下，此時深度定為0。緩慢進針達到7.5 mm處，微量注射控制儀調節(jié)進藥速度，緩慢注入4 l 6-羥基多巴(0.5 l/min，約10 min)，留針6 min。再次進針至8.0 mm處，同樣緩慢進藥，留針6 min后，緩慢拔針， 消毒縫合切口，編號，記錄時間和一般狀況，將大鼠放入籠中喂養(yǎng)。1.3.4阿樸嗎啡誘發(fā)旋轉試驗術后觀察大鼠的自主行為，1周后在同一安靜環(huán)境下進行試驗。按照1 mg/kg體質量的劑量將阿樸嗎啡注射于大鼠項部皮下。計數30 min內旋轉次數，再計算每分鐘轉數，7 r/min為成功模型。1.3.5模型大鼠行為學觀察成功模型大鼠表現為少動、動作遲緩、尾僵直、豎毛，部

7、分出現頭、身體向健側偏斜，納食少，體質量增加緩慢，大鼠向損傷對側旋轉，以旋轉側后肢為支撐點，原地轉動，首尾相接。1.3.6紋狀體多巴胺含量檢測14 d治療結束后，各組大鼠斷頭，迅速無菌摘除注射6-羥多巴胺側紋狀體，-70冰箱中保存。測定時，取出組織，按每100 mg樣本加入1 ml預冷的高氯酸(0.1 mol/L，含0.02% EDTA)溶液，冰浴超聲粉碎，并低溫高速15 000 g離心15 min。取上清液待測。用Agilent 1100型高效液相色譜儀、N2000色譜工作站檢測多巴胺的含量。色譜柱：Hypersil SiO2,4.0 mm×300 mm，粒徑10 m。流速為1.0

8、 ml/min，進樣量10 l。檢測條件：工作電壓0.7 V，靈敏度20 nA。多巴胺出峰時間(2.95±0.02) min。1.4治療方法帕金森病大鼠的HBO治療壓力為0.15 MPa。純氧洗艙，調節(jié)升壓速率1.5統(tǒng)計學處理采用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件處理，數據采用均數±標準差(x±s)表示，組間比較采用t檢驗。2結果行為學檢測結果見表1。表1各組治療前后經阿樸嗎啡誘發(fā)的大鼠旋轉行為學變化表2治療后各組大鼠腦紋狀體內DA含量比較3討論帕金森病是中老年人常見的一種帶有部位選擇性、老化性的中樞神經系統(tǒng)的變性疾病，主要病變在大腦的黑質和紋狀體，主要病理改變?yōu)楹谫|紋狀

9、體系統(tǒng)多巴胺能神經元進行性變性、壞死、脫失以及膠質細胞增生、路易氏小體形成，導致腦部多巴胺缺乏，引起一系列病理生理改變，以靜止性震顫、運動遲緩、肌肉強直和姿勢步態(tài)異常等為臨床特征。HBO醫(yī)學作為一種現代物理治療方法，有其獨特的治療機制。HBO醫(yī)學的研究和臨床實踐已表明，HBO通過提高血氧含量、血氧分壓及彌散能力，改善腦血管舒縮功能，增加缺血區(qū)和椎-基底動脈供血量，促進側枝循環(huán)的建立，從而改善或修復受損腦組織和腦功能。有研究報道，帕金森病患者的全腦血流量均有下降，在HBO下，氧彌散滲入缺氧暗區(qū)的能力增強，使腦組織含氧量增加，改善腦組織的缺氧狀態(tài)，使受損的多巴胺神經元功能恢復。同時HBO還可興奮交

10、感-腎上腺髓質系統(tǒng)，使腎上腺素-多巴胺分泌增加，臨床癥狀得以改善。HBO還可使線粒體ATP酶活性增強，加速電子傳遞過程，使ATP產生增加，恢復大腦神經元的能量供應。通過抑制星形膠質細胞增生，HBO可以提高黑質-紋狀體內谷胱甘肽過氧化物酶及超氧化物歧化酶活性，降低脂質過氧化水平，加快自由基清除速度，從而增強多巴胺能神經元功能對6-羥基多巴胺的耐受能力，促進其神經功能恢復。同樣，HBO也可改善膽堿能系統(tǒng)的功能，提高學習記憶的能力等。帕金森病屬中醫(yī)“痙證”范疇。內經稱震顫為“掉”和“振掉”，而隨意運動障礙被稱為拘攣。靈樞?邪客篇指出：“邪氣惡血，固不得住留，住留則傷筋絡骨節(jié)，機關不得曲伸，故拘攣也”

11、。中醫(yī)認為，本病病機為本虛標實，本為肝腎不足、氣血兩虧、心虛神弱等;標為痰濕阻絡、風陽內動、肝郁血瘀等，是風邪作祟所致，認為“風氣內動”是本病的發(fā)病關鍵。百會穴是益氣補虛、醒腦開竅的要穴，具有平肝息風、醒腦開竅之效，對神經系統(tǒng)的病證均有顯著療效。風府穴為督脈要穴，也是太陽、陽維與督脈之交會穴，主治癲狂、癇證、癔病、中風不語、悲恐驚悸、半身不遂、眩暈、頸項強痛等癥。針刺百會穴，配合督脈經的風府穴，可達到息風止痙、疏經活絡、激發(fā)經氣、通調腦絡、滋養(yǎng)腦髓、定痙止顫之治療目的。本研究實驗發(fā)現，與帕金森病模型組大鼠相比，HBO組和百會、風府穴電針治療組大鼠的紋狀體多巴胺含量都有明顯增高，行為學明顯改善;

12、HBO結合電針組大鼠的紋狀體多巴胺含量和行為學有顯著增高改善，說明3種治療方案都有著提高多巴胺含量改善行為學的作用，能有效促進帕金森病模型大鼠腦內多巴胺的合成、釋放，補充黑質紋狀體系統(tǒng)多巴胺含量的不足，提高多巴胺能神經元的活性，緩解帕金森病的癥狀，且HBO結合電針的療效會更為顯著。    【參考文獻】  1吳江. 神經病學. 北京：人民衛(wèi)生出版社， 2005： 245-246.2包新民，舒斯云. 大鼠立體定位圖譜. 北京：人民衛(wèi)生出版社， 1999： 60-68.3華興邦. 大白鼠穴位圖譜的研究. 實驗動物與動物實驗， 1991， 12(1)：

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