穿心蓮內(nèi)酯對(duì)大鼠心肌肥厚及抗氧化作用的影響

1、穿心蓮內(nèi)酯對(duì)大鼠心肌肥厚及抗氧化作用的影響                       作者：鐘富有， 李良東， 黃志華， 熊麗嬌，曾靖 【摘要】  目的 觀察穿心蓮內(nèi)酯對(duì)異丙腎上腺素（ISO）所致大鼠心肌肥厚的保護(hù)作用并探討其對(duì)抗氧化作用的影響。方法采用ISO 1 mg·kg-1·d-1，背部皮下注射，連續(xù)10 d，建立大鼠心肌肥厚模型

2、。造模第2天開始給大鼠皮下注射不同濃度的穿心蓮內(nèi)酯、溶劑或NS，連續(xù)14 d。取心臟稱重后全心重量指數(shù)及左心室重量參數(shù)；取血，分離血清，測定血清超氧化物歧化酶（SOD）、乳酸脫氫酶（LDH）、肌酸激酶（CK）的活性及丙二醛（MDA）的含量。結(jié)果大鼠心肌肥厚模型組心臟重量參數(shù)及左心室重量指數(shù)明顯提高，血清LDH、CK活性及MDA 含量升高，SOD活性降低；與模型組相比，穿心蓮內(nèi)酯組左心室重量指數(shù)及心臟重量參數(shù)下降，血清SOD活性顯著升高、MDA 含量降低、LDH及CK活性降低。結(jié)論穿心蓮內(nèi)酯對(duì)ISO所致大鼠心肌肥厚具有保護(hù)作用，其作用機(jī)制與提高大鼠的抗氧化能力有關(guān)。 【關(guān)鍵詞】  穿心

3、蓮內(nèi)酯； 心肌肥厚； 抗氧化作用； 大鼠          穿心蓮內(nèi)酯(Andrographolide，AP)為爵床科植物穿心蓮的有效成分之一，具有抗菌消炎，止咳平喘等作用，臨床上用于治療多種感染性疾病。有研究表明AP具有免疫調(diào)節(jié)、抗病毒、抗腫瘤、抗糖尿病、降血壓、抑制血小板聚集及抗血栓形成、對(duì)心肌及腦缺血再灌注損傷保護(hù)等作用110。本實(shí)驗(yàn)旨在通過ISO皮下給藥制作大鼠心肌肥厚模型，觀察AP對(duì)心肌肥厚的保護(hù)作用，并探討其對(duì)大鼠抗氧化能力的影響。1  材料與儀器1.1  藥品和試劑穿心蓮

4、內(nèi)酯（由沈陽藥科大學(xué)提供），實(shí)驗(yàn)時(shí)用DMSO溶解成高濃度后，再用生理鹽水稀釋成所需濃度；鹽酸異丙腎上腺素注射針劑（上海禾豐制藥有限公司，批號(hào)：H31021344），超氧化物歧化酶（SOD）、乳酸脫氫酶（LDH）、肌酸激酶（CK）及丙二醛（MDA）測定試劑盒購自南京建成生物工程研究所。1.2  儀器722N可見光分光光度計(jì)（上海精密儀器有限公司）；賽多利斯BS224S型天平(北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司)，7600-020+ISE全自動(dòng)生化分析儀(日本日立)。1.3  動(dòng)物SD大鼠，雄性，體質(zhì)量200250 g，購自江西中醫(yī)學(xué)院動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK（贛）2006-0001。

5、2  方法2.1  分組及給藥雄性SD大鼠30只，隨機(jī)分成5組，分別為正常對(duì)照組、心肌肥厚模型組、溶劑對(duì)照組、AP低劑量（0.1 mmol·kg-1）及高劑量組（0.3 mmol·kg-1）。正常對(duì)照組給予皮下注射生理鹽水，其余各組背部皮下注射ISO 1mg·kg-1·d-1，連續(xù)10 d，制作心肌肥厚模型。于造模后第2天開始各組分別皮下注射等體積的NS（模型組）、DMSO（溶劑對(duì)照組）、AP 0.1 mmol·kg-1（AP低劑量組）及0.3 mmol·kg-1（AP高劑量組），1次/d，連續(xù)14 d。2.2&#

6、160; 心臟重量指數(shù)和左心室重量參數(shù)的測定末次給藥后禁食12 h，稱重后麻醉斷頭取血，取出心臟，去除結(jié)締組織，用生理鹽水洗凈，濾紙吸干后稱全心重量，剪除心房和右心室，稱左心室重量，計(jì)算心臟重量指數(shù)和左心室重量參數(shù)。心臟重量參數(shù)=全心重(mg)體質(zhì)量(g)； 左心室重量指數(shù)(LHWWBW)=左心室重(mg)體質(zhì)量(g)。2.3  血清LDH、CK、SOD活性及MDA含量測定大鼠斷頭取血，于4，2 000 r/min，離心10 min，分離血清，嚴(yán)格按試劑盒說明，測定血清LDH、CK、SOD活性及MDA含量。2.4  統(tǒng)計(jì)學(xué)分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用Graphpad prism 4.0

7、軟件進(jìn)行單因素方差分析,結(jié)果以柱狀圖表示，P0.05認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3  結(jié)果3.1  AP對(duì)心肌肥厚大鼠心臟重量指數(shù)和左心室重量參數(shù)的影響心肌肥厚模型組及溶劑對(duì)照組心臟重量指數(shù)及左心室重量參數(shù)較正常對(duì)照組明顯增大(P<0.001)。AP低劑量組與心肌肥厚模型組比較心臟重量指數(shù)及左心室重量參數(shù)顯著下降(P<0.01)（見表1）。提示AP有保護(hù)大鼠心肌肥厚的作用。表1  AP對(duì)心肌肥厚大鼠心臟重量指數(shù)及左心室重量參數(shù)的影響(略)3.2  AP對(duì)心肌肥厚大鼠血清LDH及CK活性的影響如表2所示，與正常對(duì)照組比較，心肌肥厚模型組及溶劑對(duì)照組血清L

8、DH（P<0.05）及CK（P<0.05）活性均升高；給予高劑量及低劑量AP后，血清LDH（P<0.05）及CK（P<0.001，P<0.05）均降低，但未發(fā)現(xiàn)有劑量依賴效應(yīng)。表2  AP對(duì)心肌肥厚大鼠血清LDH及CK活性的影響(略)3.3  AP對(duì)心肌肥厚大鼠血清MDA含量及SOD活性的影響與正常對(duì)照組比較，心肌肥厚模型組血清MDA含量明顯升高(P<0.01)，SOD活性明顯降低(P<0.05)。給予高劑量及低劑量AP治療后，血清MDA明顯下降（P<0.05）、SOD活性顯著升高（P<0.05）但無劑量依賴性（見表3）

9、。表3  AP對(duì)心肌肥厚大鼠血清MDA含量及SOD活性的影響(略)1         4  討論    心肌肥厚特別是左室肥厚是導(dǎo)致中風(fēng)、心肌梗塞、心律失常、猝死、心絞痛、心力衰竭和腎衰竭的主要危險(xiǎn)因素。    本實(shí)驗(yàn)研究了AP對(duì)ISO所致大鼠心肌肥厚的保護(hù)作用，結(jié)果表明AP能有效減輕ISO所致大鼠心肌肥厚。異丙腎上腺素為腎上腺素受體激動(dòng)藥，對(duì)受體有很強(qiáng)的激動(dòng)作用，可加快心率、加速傳導(dǎo)，心肌耗氧量明顯增加，環(huán)磷酸腺苷(cAMP)生成和糖

10、原合成增加，從而促進(jìn)心肌細(xì)胞總蛋白和非收縮蛋白合成，心肌細(xì)胞肥大。另外，循環(huán)和心臟局部兒茶酚胺含量增加，可引起脂質(zhì)代謝異常及引起體內(nèi)氧自由基（OFR）生成增加11。OFR可進(jìn)攻生物膜的類脂分子，引起類脂分子中多不飽和脂肪酸的脂質(zhì)過氧化，從而損傷生物膜，產(chǎn)生大量的脂質(zhì)自由基。OFR可致線粒體結(jié)構(gòu)破壞和功能障礙，抑制ATP合成體系中的酶，使ATP合成減少，心肌能量缺乏，導(dǎo)致心肌肥厚的發(fā)生11，12。MDA為脂質(zhì)過氧化的中間產(chǎn)物，實(shí)驗(yàn)中觀察到，模型組血清MDA含量升高，經(jīng)AP后，血清MDA含量降低，提示AP具有抗脂質(zhì)過氧化作用，從而對(duì)心肌細(xì)胞起保護(hù)作用；血清中LDH及CK活性降低，也顯示心肌酶漏出減

11、少，細(xì)胞膜的損傷減輕。    SOD是體內(nèi)清除OFR的重要酶之一，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，大鼠心肌肥厚時(shí)SOD活性降低，而AP治療后，SOD活性明顯升高。因此，AP可能通過提高SOD活性，增強(qiáng)心肌組織的抗氧化能力，降低脂質(zhì)過氧化損傷，減弱心肌細(xì)胞的損傷與重構(gòu)的病理過程，從而起著抗心肌肥厚作用?！尽?#160; 1Iruretagoyena MI, Tobar JA, González PA, et a1. Andrographolide interferes with T cell activation and reduces experimental auto

12、immune encephalomyelitis in the mouse J.Pharmocol Exp Ther, 2005,312(1):3662劉峻，唐慶九，王崢濤，等新穿心蓮內(nèi)酯對(duì)小鼠巨噬細(xì)胞呼吸爆發(fā)及淋巴細(xì)胞增殖的影響J.新藥與臨床雜志，2005，24(3)：2063Kumar RA, Sridevi K, Kumar NV, Nanduri S, et alAnticancer and immunostimulatory compounds from Andrographis paniculataJ.Ethnopharmacol, 2004,92(2/3)：2914Dai GF,

13、 Xu HW, Wang JF, et alStudies on the novel -glucosidase inhibitory activity and structure-activity relationships for Andrographolide analoguesJ.Bioorg Med Chem Lett，2006, 15(10): 27l05孫振華，陳志琳，徐立春，等.“蓮必治”并用生物、化學(xué)療法抑制體內(nèi)腫瘤生長的實(shí)驗(yàn)研究J.浙江中西醫(yī)結(jié)合雜志，2001，11(2)：886Rajagopal S, Kumar RA, Deevi DS, et a1Andrographo

14、lide，a potential cancer therapeutic agent isolated from Andrographis paniculataJ.J Exp Ther Oncol，2003，3(3)：1477Kligler B, Ulbricht C, Basch E , et a1Andrographis paniculata for the treatment of upper respiratory infection: a systematic review by the natural standard research collaborationJ.Explore

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