氨基轉(zhuǎn)換作用

1、實(shí)驗(yàn)六氨基轉(zhuǎn)換作用目的要求：了解轉(zhuǎn)氨酶在代謝過(guò)程中的重要作用 學(xué)習(xí)應(yīng)用紙層析法鑒定氨基轉(zhuǎn)換反應(yīng)實(shí)驗(yàn)原理體內(nèi)a氨基酸的*氨基在氨基轉(zhuǎn)換酶的作 用下，移換至e酮酸的過(guò)程，稱氨基轉(zhuǎn)換作1=1=1=用。轉(zhuǎn)氨酶(aminotransferase) 轉(zhuǎn)換酶中的一類。催化氨基酸和a酮酸或) 醛酸之間的氨基轉(zhuǎn)換反應(yīng)，生成與原來(lái)的a酮 酸或醛酸相應(yīng)的a氨基酸或co-氨基酸，原來(lái)氨 基酸轉(zhuǎn)變成相應(yīng)的酮酸。轉(zhuǎn)氨酶催化的反應(yīng)都 是可逆的。IP是人體代謝過(guò)程轉(zhuǎn)氨酶參與氨基酸的分解和合成, 中必不可少的“催化劑”；以谷丙轉(zhuǎn)氨酶（GPT）和谷草轉(zhuǎn)氨酶（GOT）最為重要。 GPT主要存在于肝臟、心臟和骨骼肌中，在肝臟中 活力

2、最大。GPT升高是肝臟功能出現(xiàn)問(wèn)題的一個(gè)重 要指標(biāo)。1=本實(shí)驗(yàn)是將谷氨酸與丙酮酸在肌肉糜中 谷氨酸一丙酮酸氨基轉(zhuǎn)換酶（簡(jiǎn)稱谷一丙轉(zhuǎn) 氨酶）的作用下進(jìn)行氨基轉(zhuǎn)化反應(yīng)，然后用 紙層析法檢查反應(yīng)體系中丙氨酸的生成。OOH谷丙轉(zhuǎn)氨酶COOHr=o cooh谷氨酸、 谷氨酸、 冬氨酸。 丙酮酸: 環(huán)。丙酮酸脫氫酶系催化生成乙酰輔酶A,進(jìn)入TCA循在反應(yīng)體系中添加漠乙酸以抑制谷氨酸和丙酮酸的其他代謝過(guò)程。丙酮酸（丙酮酸竣化酶系）一一糖異生途徑 草酰乙酸在谷草轉(zhuǎn)氨酶（GOT）催化轉(zhuǎn)氨基生成天試劑和器材試劑1%谷氨酸溶液（用1% KOH調(diào)到 中性）；1%丙酮酸鈉溶液（用材料1% KOH調(diào)到中性）；0. 1%K

3、HCO3溶液；0.025% 漠 醋酸溶液（用1% K0H調(diào)到中 性）；2% Hac溶液；0. 1%標(biāo)準(zhǔn)肌肉糜：取兔子肌肉lg,置 研缽中，加0.9%氯化鈉溶 液3ml,在低溫下研磨成細(xì) 漿，離心5分鐘（3000轉(zhuǎn)/III谷氨酸；0.1%標(biāo)準(zhǔn)丙氨酸。展開(kāi)劑：酚飽和水溶液：2份 酚加1份水混合放入分液漏斗， 振蕩。靜置24小時(shí)顯色劑：0.1%前三酮正丁醇溶分）,棄去沉淀，得肌肉糜 提取液。液。操作方法、轉(zhuǎn)氨酶作用IE1in1取試管2只編號(hào)（1、2）,向每個(gè)試管各加0.5mL1%谷氨 酸溶液,0.5mL 1 %丙酮酸鈉溶液，05mL 0.1% KHCO3和 0.25mL 0.025%漠醋酸,混勻。然

4、后分別加入肌肉糜提取液 0.5ml,混勻，將其中一試管立即在沸水浴中加熱23分鐘做 對(duì)照。用試管帽塞住另一只試管，置于45弋水浴中保溫40minoIII2保溫完畢，取出試管。向每只試管中各加2% HAc溶液4滴， 再置于沸水浴中2min,使蛋白質(zhì)完全沉淀。過(guò)濾收集濾液 待用。（二、層析驗(yàn)證1.取9厘米培養(yǎng)皿一個(gè)，加入酚飽和水溶液約0.5cm高， 取圓形濾紙一張，在中心剪一直徑約2mm的小孔，并以匚 心約1cm為半徑劃一圓作為底線。在此底線上，用鉛筆點(diǎn)四 個(gè)等距離的原點(diǎn)并標(biāo)明1, 2, 3, 4；酸2點(diǎn)聊醫(yī)敞®験WW 能太大，一般賣銓場(chǎng)0.2cm%宜。3另取一條濾紙卷成實(shí)心筒狀，直徑約23mm?將此小筒 插入濾紙中心小孔（不可突出紙面之上）,使層嶄濾紙通過(guò) 此小筒與酚溶液相連。然后將濾紙平放在盛梅和酚的培養(yǎng)皿 ±o另取一女小稠同敢培養(yǎng)皿蓋在濾紙上，此時(shí)酚溶液即由 濾紙中心孔向四闊擴(kuò)散。:4當(dāng)酚溶液擴(kuò)展到直徑約7cm時(shí)，取出濾紙。用鉛筆畫下酚溶液擴(kuò)展邊緣，用吹風(fēng)機(jī) 吹干。用噴霧器噴以0.1%帝三酮正丁醇溶液， 再用熱風(fēng)吹干。用鉛筆圈下各顯色點(diǎn)。測(cè)定 各顯色點(diǎn)的Rf值，并解釋之。III:注意：當(dāng)溫度、濾紙質(zhì)量和展開(kāi)劑等都相同時(shí), 對(duì)于一個(gè)化合物比移值Rf是一個(gè)特有的常數(shù)。三、計(jì)算公式1=原點(diǎn)至斑點(diǎn)中心的距離/原點(diǎn)至溶