殺蟲劑室內(nèi)生物測定

1、1 2第二章 殺蟲劑室內(nèi)生物測定n一、殺蟲劑室內(nèi)生物測定的一般原則n1、供試?yán)ハx盡量一致n蟲態(tài)、蟲齡和生理上盡可能一致n2、控制環(huán)境因素盡量一致n溫度、濕度、光照對殺蟲劑和昆蟲的生理狀態(tài)都有影響3一、殺蟲劑室內(nèi)生物測定的原則n3、必須設(shè)立對照，一般至少設(shè)2種對照n空白對照(溶劑對照)n標(biāo)準(zhǔn)藥劑對照4一、殺蟲劑室內(nèi)生物測定的原則n4、必須設(shè)重復(fù)n生物測定的測試的對象不是昆蟲個體，而是群體。n一般重復(fù)至少4次，每個重復(fù)20-50頭試蟲。n(田間試驗(yàn)重復(fù)35次)。5二、影響殺蟲劑毒力測定的因素n1、殺蟲劑：n一般用原藥，純度95%以上，用丙酮配制。n許多殺蟲劑都有同分異構(gòu)體，測定時應(yīng)用純的化合物。n

2、避免農(nóng)藥加工中的助劑對生物測定的影響。6二、影響殺蟲劑毒力測定的因素n2、昆蟲n2-1、昆蟲的發(fā)育階段n一般殺蟲劑對卵幾乎都沒有毒性：卵殼的特殊保護(hù)作用n蛹一般對殺蟲劑也不太敏感n成蟲的性別、營養(yǎng)及生理?xiàng)l件對其敏感性影響較大。n對幼蟲而言，低齡幼蟲對殺蟲劑比較敏感。7二、影響殺蟲劑毒力測定的因素n2-2、昆蟲的性別與生殖狀態(tài)n性別的影響主要表現(xiàn)在成蟲期，在毒力測定中，對多數(shù)昆蟲，一般都規(guī)定只用一個性別。n雌蟲往往耐藥性更強(qiáng)。n雌蟲產(chǎn)卵后，對殺蟲劑變得敏感些。這可能與體重、脂肪含量和代謝能力有關(guān)。8二、影響殺蟲劑毒力測定的因素n2-3、昆蟲的生理因素n越冬蟲：耐藥性較高n體內(nèi)脂肪含量影響敏感性n

3、新陳代謝率越高，呼吸率越高，對殺蟲劑的敏感性越大。9二、影響殺蟲劑毒力測定的因素n2-4、昆蟲的種群異質(zhì)性nA、自然耐藥力nB、健壯耐藥力nC、殺蟲劑的抗藥性n在毒力測定中，應(yīng)選擇異質(zhì)性小的種群。10二、影響殺蟲劑毒力測定的因素n3、環(huán)境條件對毒力測定的影響n3-1、溫度n正溫度系數(shù)、負(fù)溫度系數(shù)（2030）n溫度的影響：穿透作用、解毒代謝n處理前低溫處理果蠅、蜚蠊等，可提高對DDT的抗性，這與低溫飼養(yǎng)中形成的不飽和脂肪有關(guān)。11二、影響殺蟲劑毒力測定的因素n3、環(huán)境條件對毒力測定的影響n3-1、溫度n處理后的低溫可使死亡增加，但殺死昆蟲的時間延長。30以上的高溫也能使死亡率增加。12二、影響殺

4、蟲劑毒力測定的因素n3、環(huán)境條件對毒力測定的影響n3-2、濕度與水分n相對濕度對熏蒸劑的影響較大n濕度對昆蟲引誘劑及拒避劑有顯著影響。13二、影響殺蟲劑毒力測定的因素n3、環(huán)境條件對毒力測定的影響n3-3、光照n光照對毒力測定的影響是間接的。在光照條件下，家蠅對DDT藥膜的死亡率較高，原因是光照增加了其活動性。14二、影響殺蟲劑毒力測定的因素n3、環(huán)境條件對毒力測定的影響n3-4、營養(yǎng)與饑餓n有的營養(yǎng)物質(zhì)可增加昆蟲體內(nèi)的解毒酶n對胃毒劑的測定，饑餓是必要的。n饑餓可增加敏感性。15三、供試?yán)ハx的處理n室內(nèi)毒力測定原則上用室內(nèi)種群n對野外采集的種群，盡量選用一致的個體。(并在室內(nèi)飼養(yǎng)1-2代)1

5、6三、供試?yán)ハx的處理n1、一般移取法n對棉鈴蟲等大個體昆蟲，可用鑷子n對蚜蟲、紅蜘蛛等，可用毛筆，注意刺吸式口器的口針。 17三、供試?yán)ハx的處理n2、趨光法n家蠅、果蠅等都有趨光性。18三、供試?yán)ハx的處理n3、麻醉法n3-1、二氧化碳法；n3-2、揮發(fā)蒸氣法：乙醚、三氯甲烷與乙醚（1：1）等，家蠅的麻醉時間一般在4分鐘以內(nèi)。n3-3、冷凍法：適于家蠅、蜚蠊等試蟲，一般分兩步，先在5下冷凍10分鐘，再在0 下冷凍2-3分鐘。19三、供試?yán)ハx的處理n4、吸蟲法：n赤擬谷盜、米象等，用真空管等吸蟲。20三、供試?yán)ハx的處理n5、結(jié)果檢查n需要數(shù)清活動力強(qiáng)試蟲時，可把活蟲烘死后再數(shù)。n對紅蜘蛛等可采用下

6、列方法：n局部高溫法。放與60W的燈罩下烘，使活蟲爬走。2122232425卵形玻璃噴頭卵形玻璃噴頭 26 I-沉降噴霧塔；沉降噴霧塔；II-霧化器霧化器 27頗特噴霧塔的噴頭頗特噴霧塔的噴頭 28 29 一對鋼質(zhì)空氣柜一對鋼質(zhì)空氣柜（0.46m0.46m0.46m）和空氣柜相連接的直徑）和空氣柜相連接的直徑0.148m的鋁質(zhì)的鋁質(zhì)圓筒狀風(fēng)道圓筒狀風(fēng)道以及一個以及一個控制臺控制臺。底座左。底座左端有一調(diào)速鼓風(fēng)機(jī)，右端封閉。鼓風(fēng)機(jī)將空氣吹到端有一調(diào)速鼓風(fēng)機(jī)，右端封閉。鼓風(fēng)機(jī)將空氣吹到右邊空氣柜，經(jīng)風(fēng)道進(jìn)入左邊空氣柜排出，而左邊右邊空氣柜，經(jīng)風(fēng)道進(jìn)入左邊空氣柜排出，而左邊空氣柜和實(shí)驗(yàn)室排風(fēng)系統(tǒng)相連

7、。噴頭安在風(fēng)道的右空氣柜和實(shí)驗(yàn)室排風(fēng)系統(tǒng)相連。噴頭安在風(fēng)道的右邊，噴頭的噴嘴可以任意更換，噴嘴直徑邊，噴頭的噴嘴可以任意更換，噴嘴直徑0.045mm。裝試蟲的籠子放在風(fēng)道左端。裝試蟲的籠子放在風(fēng)道左端。氣霧風(fēng)道氣霧風(fēng)道 30313233四、殺蟲劑毒力測定方法n1、胃毒劑毒力測定n基本原理：使殺蟲劑隨食物一起被目標(biāo)昆蟲吞食進(jìn)入消化道而發(fā)揮毒殺作用。n根據(jù)取食量的差異分為無限取食法和定量取食法。34四、殺蟲劑毒力測定方法n1-1 無限取食法n藥量不易掌握，有拒食效應(yīng)時更難獲得滿意結(jié)果n1-1-1飼料混藥喂蟲法n擬谷盜、米象和麥蛾等倉庫害蟲；以藥劑與食物的比例作為含藥濃度的表示方法，一般5-7天檢查

8、死亡情況。35四、殺蟲劑毒力測定方法n1-1 無限取食法n1-1-2 培養(yǎng)基混藥法n人工含毒培養(yǎng)基，果蠅。n其它方法：種子拌藥法、糖漿混藥法、毒耳法。36四、殺蟲劑毒力測定方法n1-2 定量取食法n能準(zhǔn)確地測定吞食的劑量n1-2-1葉片夾毒法（sandwich method）n取食量大的咀嚼式口器昆蟲n按取食多少排列，分為生存組、死亡組和中間組，按中間組計算；250BALD37四、殺蟲劑毒力測定方法n1-2 定量取食法n1-2-2 液滴飼喂法（feeding of measured drop）n舐食性昆蟲，如家蠅、果蠅、蜜蜂等，用微量注射器形成小的液滴(0.010.001ml)，直接飼喂昆蟲。

9、38The leaf sandwich test for insecticide stomach poisoning activityn1、適應(yīng)昆蟲n鱗翅目幼蟲，一般三齡以上，饑餓48小時，選取50頭，電子天平稱重，計算平均體重。n2、藥劑：n原藥，水溶性原藥先用蒸餾水溶解，再用丙酮等有機(jī)溶劑稀釋；水不溶性原藥選用丙酮（或乙醇，二甲基亞砜等）按等比（或等差）稀釋成5-7個濃度。39The leaf sandwich test for insecticide stomach poisoning activityn3、夾毒葉片的制做n用直徑1厘米的打孔器打葉碟，放入培養(yǎng)皿中，保濕。用點(diǎn)滴器從低濃度

10、到高濃度每葉點(diǎn)滴12L藥液，溶劑揮發(fā)后，和另一片涂有淀粉糊的葉碟對合制成夾毒葉片，放入12孔培養(yǎng)板的孔內(nèi)。每處理4個重復(fù)，每重復(fù)至少12個含毒葉片。40The leaf sandwich test for insecticide stomach poisoning activityn4、藥劑處理n每孔接一頭試蟲，于正常條件下培養(yǎng)，接蟲24小時后，待試蟲取食完含毒葉片后，（未取食完含毒葉片的淘汰掉）。加入干凈飼料繼續(xù)觀察。n5、調(diào)查：24小時 后（根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求和目的可適當(dāng)調(diào)節(jié)時間），調(diào)查死蟲數(shù)和活蟲數(shù)。41The leaf sandwich test for insecticide stomac

11、h poisoning activityn6、數(shù)據(jù)處理：可用SAS，DPS軟件。記算毒力回歸方程，LD50，95%置信限，相關(guān)系數(shù)等。劑量以 g（藥劑）/g（蟲）表示 。42四、殺蟲劑毒力測定方法n2 觸殺劑毒力測定n用較高濃度（或劑量）的殺蟲劑施于蟲體的體表，使蟲體充分接觸藥劑而發(fā)揮觸殺作用。n2-1噴粉法及噴霧法nPotter噴霧塔n真空噴粉器n沉降噴霧塔43四、殺蟲劑毒力測定方法n2 觸殺劑毒力測定n2-2浸漬法n常用于有效化合物篩選試驗(yàn)（screen test），被聯(lián)合國糧農(nóng)組織（FAO）推薦為蚜蟲抗藥性的標(biāo)準(zhǔn)測定方法。n此法不是單純的觸殺毒力。44四、殺蟲劑毒力測定方法n2 觸殺劑毒

12、力測定n2-3玻片浸漬法（slide-dip method）n此法為FAO推薦為螨類抗藥性的標(biāo)準(zhǔn)測定方法。45The Immersion test for insecticide activityn1、靶標(biāo)昆蟲n鱗翅目幼蟲，同翅目的蚜蟲類、葉蟬類、飛虱類，鞘翅目成蟲如馬鈴薯瓢蟲，纓翅目昆蟲如薊馬等。n2、藥劑n水溶性藥劑直接用水溶解、稀釋，其它藥劑選用合適的有機(jī)溶劑（如丙酮、氯仿、乙醇等）溶解，再用含有適量表面活性如0.1%吐溫80（或0.1% Triton-X100）的水溶液稀釋。每濃度藥液量不少于50mL。46The Immersion test for insecticide activ

13、ityn3、藥劑處理n將靶標(biāo)昆蟲浸入藥液中 510s后，用濾紙吸取多余藥液，將試蟲轉(zhuǎn)移至正常條件下飼養(yǎng)，每處理4次重復(fù)，每重復(fù)1020頭。并設(shè)不含藥劑的相應(yīng)的有機(jī)溶劑處理作為對照。47The Immersion test for insecticide activityn4、 調(diào)查：24小時 后（根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求和目的可適當(dāng)調(diào)節(jié)時間），調(diào)查死蟲數(shù)和活蟲數(shù)。n5、數(shù)據(jù)處理：可用SAS，DPS軟件。記算毒力回歸方程，LD50，95%置信限，相關(guān)系數(shù)等。48四、殺蟲劑毒力測定方法n2 觸殺劑毒力測定n2-4藥膜法（residual films）n將一定量的殺蟲劑，采用浸漬、點(diǎn)滴、噴灑等方法施于物體表面，

14、形成一個均勻的藥膜，然后放入一定量的供試目標(biāo)昆蟲，讓其爬行接觸一定時間后，再移到正常的環(huán)境條件下，于規(guī)定時間內(nèi)觀察試蟲的中毒死亡反死，計算擊倒率或死亡率。49四、殺蟲劑毒力測定方法n2 觸殺劑毒力測定n2-4藥膜法（residual films）nA、濾紙藥膜法nB、容器藥膜法nC、蠟紙粉膜法50四、殺蟲劑毒力測定方法n2 觸殺劑毒力測定n2-5點(diǎn)滴法（topical application）n點(diǎn)滴法是將一定量的藥液點(diǎn)滴到供試目標(biāo)昆蟲體壁的一定部位，來測定殺蟲藥劑穿透表皮而引起昆蟲中毒致死的觸殺毒力。n此法是殺蟲劑觸殺毒力測定中最準(zhǔn)確的方法。51四、殺蟲劑毒力測定方法n2 觸殺劑毒力測定n2-

15、5點(diǎn)滴法（topical application）n點(diǎn)滴部位一般為胸部背板n家蠅成蟲：1L/頭n菜青蟲、玉米螟、棉鈴蟲三齡蟲0.1L/頭n五齡蟲0.51 L/頭n蚜蟲一般0.030.05 L/頭.52四、殺蟲劑毒力測定方法n2 觸殺劑毒力測定nA、微量點(diǎn)滴儀53四、殺蟲劑毒力測定方法n2 觸殺劑毒力測定nB、電動微量點(diǎn)滴器54四、殺蟲劑毒力測定方法n2 觸殺劑毒力測定nC、毛細(xì)管微量點(diǎn)滴器55The topical application test (點(diǎn)滴法) for insecticide contact activityn1、靶標(biāo)試蟲：鱗翅目3-4齡幼蟲，同翅目成蟲或若蟲，點(diǎn)滴時可用乙醚或

16、CO2麻醉處理。n2、殺蟲劑：原藥，水溶性原藥先用蒸餾水溶解，再用丙酮等有機(jī)溶劑稀釋；水不溶性原藥選用丙酮（或乙醇，二甲基亞砜等）按等比（或等差）稀釋成5-7個濃度。56The topical application test (點(diǎn)滴法) for insecticide contact activityn3、藥劑處理：用毛筆挑取試蟲于培養(yǎng)皿中，用（毛細(xì)管）點(diǎn)滴器逐頭點(diǎn)滴，鱗翅目幼蟲點(diǎn)前胸背板，藥量一般0.51L；蚜蟲、葉蟬等滴于腹部，藥量一般0.020.1L。n點(diǎn)滴完后放正常條件下飼養(yǎng)。n重復(fù)：每處理4次重復(fù)，每重復(fù)至少15蟲n對照：以對應(yīng)的有機(jī)溶劑為對照。對照死亡率不得超過20%。57The

17、 topical application test (點(diǎn)滴法) for insecticide contact activityn4、結(jié)果檢查：24（可根據(jù)情況調(diào)節(jié)）小時后檢查死蟲數(shù)和活蟲數(shù)（死亡標(biāo)準(zhǔn)需注明）。n5、數(shù)據(jù)處理：可用SAS，DPS軟件。記算毒力回歸方程，LD50（LC50），95%置信限，相關(guān)系數(shù)等。58四、殺蟲劑毒力測定方法n3 熏蒸劑毒力測定n熏蒸劑的藥量計算以單位容積內(nèi)的藥劑用量來表示（mg/L 或 ml/L）n溫度越高，殺蟲劑對目標(biāo)昆蟲的熏蒸毒力越強(qiáng)，昆蟲的呼吸作用也越強(qiáng)。n測定條件：一般25 ，相對濕度50%59四、殺蟲劑毒力測定方法n3 熏蒸劑毒力測定nA、二重皿法6

18、0四、殺蟲劑毒力測定方法n3 熏蒸劑毒力測定nB、廣口瓶法61四、殺蟲劑毒力測定方法n3 熏蒸劑毒力測定n、藥紙熏蒸法62四、殺蟲劑毒力測定方法n3 熏蒸劑毒力測定n、三角瓶法63Erlenmeyer flask test (錐形瓶法) for insecticide fumigant activityn1、靶標(biāo)昆蟲n鱗翅目幼蟲，同翅目的蚜蟲類、葉蟬類、飛虱類、鞘翅目成蟲（一般羽化2周后的成蟲）如玉米象、赤擬谷盜等n2、藥劑：熏蒸劑宜使用原藥，濃度以mg/L計。64Erlenmeyer flask test (錐形瓶法) for insecticide fumigant activityn3、藥劑處理：準(zhǔn)備500mL的錐形瓶，將試蟲籠懸掛于瓶的中部，按預(yù)定的劑量加入供試藥劑于瓶底，薰蒸處理1h后將試蟲轉(zhuǎn)移到正常條件下飼養(yǎng)。每處理4次重復(fù)，每重復(fù)不少于50頭試蟲，設(shè)不含藥劑的處理作為對照。n4、調(diào)查：一般24（根據(jù)試驗(yàn)要求和藥劑特點(diǎn)可適當(dāng)調(diào)節(jié)）小時調(diào)查試蟲死死情況。數(shù)據(jù)處理同其它方法。65四、殺蟲劑毒力測定方法n4 內(nèi)吸作用（systemic action）毒力測定nA、根系內(nèi)吸法nB、葉部內(nèi)吸法nC、莖部內(nèi)吸法nD